疫苗组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗和预防奈瑟氏球菌病的免疫原性组合物和疫苗。本发明专利技术的免疫原性组合物含有选自包括粘附素、自体转运蛋白、毒素、铁获得蛋白和膜相关蛋白(优选整合外膜蛋白)在内的至少两个不同种类抗原的抗原组合。这种抗原组合能以抗奈瑟氏球菌生活周期不同方面的免疫反应为目标，产生更有效的免疫反应。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及奈瑟氏球菌(Neisserial)免疫原性组合物和疫苗，它们的制备方法以及这种组合物在药物中的用途。更具体而言，它涉及包括抗原组合的疫苗组合物，正如在保护测定法或血清杀菌测定法中所测量的那样，其具有可使本专利技术的疫苗引发令人惊讶的良好免疫反应的性质。背景细菌中的奈瑟氏球菌菌株是很多人类病变的病原体，因此需要研制出可抗这些病原体的有效疫苗。特别是，淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)和脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)所引起的病变可通过接种疫苗而治疗。淋病奈瑟氏球菌是淋病的病原体，淋病是全世界所报道的最常见的性传播疾病之一，据估计每年有六千两百万个病例发病(Gertase等人，1998 Lancet 351 ； (Supp 1 3)2-4)。淋病的临床表现包括泌尿生殖道、咽喉或直肠粘膜炎症以及新生儿眼睛感染。妇女淋球菌(gonococcal)感染上升可导致不孕、子宫外妊娠、慢性盆腔炎和输卵管-卵巢脓肿形成。败血症、关节炎、心内膜炎和脑膜炎均与并发性淋病有关。大量淋球菌菌株对抗生素产生耐药性导致发病率以及与淋病有关的并发症增加。 用抗生素治疗淋病的吸引人的替代方案是利用接种疫苗而预防淋病。目前还没有抗淋病奈瑟氏球菌感染的疫苗。脑膜炎奈瑟氏球菌是一种重要的病原体，特别是在儿童和年轻人中。败血症和脑膜炎是侵入性脑膜炎球菌病(IMD)的最严重威胁生命的形式。这种疾病由于其较高的发病率和死亡率已经成为全世界的健康问题。根据荚膜多糖的抗原差异，已经鉴定出了 13种脑膜炎奈瑟氏球菌血清组，最普遍的是A、B和C，它们导致全世界90%的该疾病。血清组B是欧洲、美国和拉丁美洲几个国家中脑膜炎球菌病的最普遍原因。已经研制出了基于血清组A、C、W和Y的荚膜多糖的疫苗，它们表现出可控制脑膜炎球菌病的暴发(Peltola等人，1985PediatriCS76 ；91-96)。然而，血清组B的免疫原性较差，且仅主要诱导I gM同种型的短暂抗体反应(Ala’ Aldeen D和Cartwright K 1996， J. Infect. 33 ；153-157)。因此，目前还没有能够抗导致绝大多数温带国家中大多数该疾病的血清组B脑膜炎球菌的广泛有效的疫苗。尤为严重的是血清型B疾病在欧洲、澳洲和美洲的发生率日益增加，主要是在5岁以下的儿童中。抗血清组B脑膜炎球菌的疫苗的研制提出了一个特有的困难，即由于多糖荚膜与人神经细胞粘着分子的免疫学相似性导致其免疫原性较差。将疫苗生产的方案集中于脑膜炎球菌外膜的表面外露结构，但却被菌株之间这些抗原的显著变异所阻碍。进一步的研究采用由外膜小泡构成的疫苗，其包括很多构成细菌膜正常内含物的蛋白。这些的其中之一是抗脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B和C的VA-MENGOC- BC Cuban疫苗(Rodriguez 等人，1999Mem Inst. Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro 94 ;433_440)。设计这种疫苗用来抗古巴的侵入性脑膜炎球菌病，这种病不能通过使用荚膜多糖AC疫苗进行的接种程序而被消除。流行的血清组是B和C，且VA-MENGOC-BC 疫苗已经可以成功控制暴发，据估计该疫苗抗脑膜炎奈瑟氏球菌血清组B菌株的效能为83% (Sierra等人，19901η Neisseria，Walter Gruyter，Berlin，m. Atchman 等人(eds)p 129-134，Sierra 等人，1991， NIPH Ann 14;195_210)。该疫苗可有效抗特异性暴发，然而所引发的免疫反应不能抗脑膜炎奈瑟氏球菌的其它菌株。随后在拉丁美洲，在由同源和异源血清组B脑膜炎球菌菌株引起的流行病过程中进行的功效研究已在年龄稍大的儿童和成人中表现出一些功效，但它的有效性在感染危险最大的、年龄较小的儿童中明显偏低(Milagres等人，1994，Infect. Immun. 62 ； 4419-4424)。这种疫苗在具有多菌株地方病的国家，如UK效果怎样还不肯定。对抗异源菌株的免疫原性的研究仅证实了有限的交叉反应性血清杀菌活性，特别是在婴儿中(Tappero 等人，1999，JAMA 281 ；1520-1527)。第二种外膜小泡疫苗是在挪威，使用在斯堪的纳维亚流行的那些普遍血清型B 分离物研制的(Fredriksen等人，1991，NIPH Ann, 14 ；67-80) 该疫苗已在临床试验中进行了测试，并发现四个月后，它具有57%的保护功效(Bjune等人，1991，Lancet, 338 ； 1093-1096)。然而，外膜小泡在疫苗中的使用与某些问题有关。例如，OMV包括有毒的脂多糖且它们可包括免疫显性抗原，这些抗原或者是菌株特异性的，或者是可变表达的。已经描述过的几个方法都可用于克服外膜小泡制品疫苗的一些问题。WO 01/09350描述了例如通过降低毒性并修饰外膜小泡上存在的抗原而解决某些问题的方法。WO 01/52885描述了把外膜小泡与其它抗原组合在一起的可能性且包括了超过 2，000种潜在的奈瑟氏球菌蛋白列表，从该列表可推测研制出对更宽血清型范围都具有功效的疫苗。目前所用的抗-脑膜炎球菌疫苗存在着多种问题。基于蛋白的外膜疫苗倾向于特异性且仅对少数菌株有效。多糖疫苗也是次最优的，这是因为它们倾向于引发较差且短暂的免疫反应，特别是对血清组 BO^pow 等人 1986 ；Peltola 1998，Pediatrics 76 ；91-96)。奈瑟氏球菌感染提出了一个重要的保健问题，即对淋病奈瑟氏球菌而言，还没有可用的疫苗，或对脑膜炎奈瑟氏球菌而言，仅有有限的抗异源菌株的功效和能力的疫苗。显然需要研制抗奈瑟氏球菌感染更好的疫苗，它们能够改善目前所用疫苗的功效并抗更大范围的菌株。附图描述附图说明图1.-对由tbpA和hsf表达被上调的重组脑膜炎奈瑟氏球菌菌株制备的OMV中的TbpA和Hsf的检测。通过用考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE分析(4-20%梯度凝胶)分离 OMV 制品(10 μ g)。图2.-在大肠杆菌(E. coli)中产生的重组Hsf过客(passenger)结构域的检测， 10 μ g纯化的Hsf过客蛋白(第2和3道)通过12% SDS-PAGE凝胶上分离，并与分子量标记(第1道)相比较。图3. -Hap过客纯度的分析，这是通过㈧考马斯染色，⑶银染，(C)抗_His5蛋白质印迹和(D)抗-大肠杆菌检测的。IOyg纯化抗原是在4-20%丙烯酰胺梯度凝胶上通过SDS-PAGE分离的。图4.-从脑膜炎奈瑟氏球菌菌株FAM20分离的FrpA和FrpC蛋白共有的序列相似性区。(A)脑膜炎奈瑟氏球菌菌株FAM20 RTX蛋白FrpA和FrpC的结构域组成。(B)从脑膜炎奈瑟氏球菌菌株H44/76获得的FrpA/C扩增产物。图5.-重组Frp23 (具有23个重复单位的FrpA/C保守区)抗原在大肠杆菌中的表达。用对照载体(pETMd)或重组构建体(分别为Frp3、Frp 13和Frp2;3)转化的大肠杆菌BL21DE3的非诱导(Ni)和诱导(I)的总细胞提取物的SDS-PAGE分析。用考马斯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：F·X·J·贝尔泰，R·比曼斯，P·德诺埃，C·费龙，C·戈拉，J·普尔曼，V·魏南茨，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：