一种疫苗组合物及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种疫苗组合物，该疫苗组合物中包括免疫量的PCV2Cap蛋白病毒样颗粒抗原和稳定缓冲液。本发明专利技术的疫苗组合物中PCV2ORF2蛋白能以病毒样颗粒的形式稳定存在，在保存不同时间后，效果明显优于对比疫苗。

【技术实现步骤摘要】
一种疫苗组合物及其制备方法
本专利技术涉及一种疫苗组合物，具体地说，涉及一种抗圆环病毒疫苗组合物。
技术介绍
猪圆环病毒（PCV）是迄今发现的一种最小的动物病毒。现已知PCV有两个血清型，即PCV1和PCV2。PCV1为非致病性的病毒。PCV2为致病性的病毒，它是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原。PMWS的临床特征有消瘦、皮肤苍白、呼吸困难、腹泻、黄疽等。病理变化可见全身淋巴结肿大，特别是腹股沟淋巴结肿大可达5～10倍；肺主要呈弥散性、间质性肺炎变化，质地硬如橡皮，表面一般呈灰褐色的斑驳状外观；肾的变化较多，可见皮质和髓质散在大小不一的白色坏死灶，由于水肿而导致其呈现蜡样外观；脾轻度肿大；大多病猪的肝有不同程度的萎缩、纤维化。除PMWS外，猪皮炎与肾病综合征（PDNS）、增生性坏死性肺炎（PNP）、猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV2感染有重要关联。PCV2相关的猪病，死亡率达10%～30%不等，较严重的猪场在暴发时死淘率高达40%，给养猪业造成严重的经济损失。现有技术通过全病毒灭活疫苗和PCV2的CAP蛋白制备的亚单位疫苗用于预防PMWS，然而全病毒灭活疫苗，由于PCV的细胞产量不高造成成本较高，而亚单位疫苗具有不在动物体内增殖，无外源性核酸，因此不具传染性等优点，但同时也存在纯化成本高的问题。现有技术需要一种成本低且高效的针对圆环病毒的疫苗。制备成病毒样颗粒（virus-likeparticles，VLP）和选择合适的佐剂是提高亚单位疫苗效力的两种常用技术手段。中国专利CN103173470A公开了一种病毒样颗粒的制备，但没有公开其疫苗产品中含有能保持稳定存在的病毒样颗粒。关于佐剂增强猪圆环病毒疫苗效力的研究，“不同佐剂对猪圆环病毒2型灭活抗原免疫效果的影响”（马涛等，中国兽医科学2011,41（06）：593-600）公开了ISA206和ISA15A为最优佐剂。
技术实现思路
为解决现有技术的不足，本专利技术提供一种圆环病毒疫苗，包含：圆环病毒2型病毒样颗粒抗原、佐剂和缓冲液以及药学上可以接受的载体。本专利技术的主要目的在于提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物中包括免疫量的PCV2Cap蛋白病毒样颗粒抗原和稳定缓冲液。术语“圆环病毒2型病毒样颗粒抗原是指任何其它至少含PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位或其他成分，以病毒样颗粒存在。优选地，所述PCV2Cap蛋白病毒样颗粒抗原含量为≥30μg/ml，更优选60μg/ml。圆环病毒的抗原含量，至少包含2μgPCV2ORF2蛋白/剂量，优选2-300μgPCV2ORF2蛋白/剂量，更优选20-150μgPCV2ORF2蛋白/剂量，更优选50-100μgPCV2ORF2蛋白/剂量，最优选60μgPCV2ORF2蛋白/剂量。优选地，所述稳定缓冲液为磷酸氢二钠-氯化钠缓冲液，其中磷酸氢二钠浓度为2～100mM，氯化钠浓度为100～2000mM，pH为6.0～7.6；优选磷酸氢二钠浓度为50mM，氯化钠浓度为1100mM，pH为6.8。更优选地，所述缓冲液的用量为疫苗组合物70%～90%重量比，优选80%。PCV2CapVLPs在特定的缓冲液中保持稳定，该缓冲液由磷酸氢二钠盐和氯化钠两种成分组成。缓冲液中磷酸氢二钠盐的使用范围为2mM～100mM，优选范围为10mM～80mM，优选范围为30mM～70mM，优选范围为40mM～60mM，最优选为50mM。氯化钠的使用范围为100mM～2000mM，优选范围为400mM～1800mM，优选范围为600mM～1600mM，优选范围为800mM～1400mM，优选范围为1000mM～1200mM，最优选为1100mM。缓冲液的用量为疫苗组合物70%～90%重量比，优选80%。疫苗组合物pH值范围为6.0～7.6，优选范围为6.2～7.4，优选范围为6.4～7.2，优选范围为6.6～7.0，最优选为6.8。优选地，所述疫苗组合物还包括佐剂，所述佐剂优选GEL、卡波姆。更优选地，所述佐剂卡波姆的量为0.1-500mg/剂量，优选1～20mg/ml；或所述佐剂GEL的量为0.1g/ml。疫苗组合物中含有佐剂，优选的为含有商品名为卡波姆（Carbomer）的聚丙烯酸，优选的法国赛比克（SEPPIC）的GEL佐剂。本专利技术所述佐剂卡波姆的量为0.1-500mg/剂量，优选1～20mg剂量，更优选5～10mg/剂量，更优选1mg～3mg剂量，最优选2mg/剂量。本专利技术的一种实施方式中，佐剂为赛比克（SEPPIC）的GEL佐剂，佐剂量为0.1g/剂量，每剂量为1ml。优选地，所述疫苗组合物还包括药学上可以接受的载体，所述载体包括任何所用溶剂、分散介质、稳定剂、稀释剂、防腐剂；稀释剂包括水、磷酸盐缓冲溶液，盐水、乙醇、甘油，等渗剂包括氯化钠、右旋糖苷、葡萄糖；稳定剂包括蛋白、乙二胺四乙酸二钠。.术语“药学上可以接受的载体包括任何所用溶剂、分散介质、稳定剂、稀释剂、防腐剂。例如稀释剂包括但不限于水、磷酸盐缓冲溶液，盐水、乙醇、甘油，等渗剂包括但不限于氯化钠、右旋糖苷、葡萄糖。稳定剂包括蛋白或乙二胺四乙酸二钠。组合物中还可以含有抗生素或防腐剂，包括，例如：庆大霉素、硫柳汞、或氯甲酚。本领域技术人员公知可以选用不同类别的抗生素或防腐剂。本专利技术的另一目的在于提供一种制备所述的疫苗组合物的方法，所述方法包括：1）表达PCV2Cap蛋白；2）配制所述稳定缓冲液；3）混合所述PCV2Cap蛋白病毒样颗粒抗原和稳定缓冲液。本专利技术疫苗组合物的制备方法，先加入佐剂，再加入用缓冲液稀释的PCV2抗原液，最后加入药学上可以接受的载体。本专利技术的再一目的在于提供所述疫苗组合物在制备预防和治疗猪圆环相关疾病的药物中的应用。优选地，所述应用包括距保护期提前14天施用所述疫苗组合物免疫仔猪。由上可以看出，本专利技术的用于治疗或预防猪感染性疾病的疫苗佐剂组合物至少有以下优点：1.本专利技术的疫苗组合物中PCV2ORF2蛋白以病毒样颗粒的形式稳定的存在，提高疫苗的效力。2.本专利技术当PCV2ORF2蛋白量达到30μg/ml时，能够清除病毒。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。攻毒所用的PCV2SH株，保藏号为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏日期：2008年3月4日，保藏号为CGMCCNo.2389。公开于中国专利申请CN101240264A。实施例1PCV2亚单位疫苗的制备及检验1、Cap蛋白稳定缓冲液的制备本实施例采用最优选配方制备缓冲液，具体步骤如下，使用注射用水配制浓度为50mM磷酸氢二钠溶液，磷酸调节pH至6.8，加入氯化钠使其终浓度为1100mM，溶液配制完全后使用0.22μm滤膜过滤，室温封闭保存备用。详细配方见下表1。表1VLPs稳定缓冲液的配制（1000ml）2、疫苗的制备在灭菌烧杯中加入称量的GEL佐剂。按照专利CN10317347本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，所述疫苗组合物中包括免疫量的PCV2Cap蛋白病毒样颗粒抗原和稳定缓冲液。

【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，所述疫苗组合物中包括免疫量的PCV2Cap蛋白病毒样颗粒抗原和稳定缓冲液；其中，所述稳定缓冲液为磷酸氢二钠-氯化钠缓冲液，其中磷酸氢二钠浓度为2～100mM，氯化钠浓度为100～2000mM，pH为6.0～7.6，所述稳定缓冲液的用量为疫苗组合物70％～90％重量比；所述PCV2Cap蛋白为PCV2SH株ORF2蛋白。2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述PCV2Cap蛋白病毒样颗粒抗原含量为≥30μg/ml。3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述PCV2Cap蛋白病毒样颗粒抗原含量为60μg/ml。4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述稳定缓冲液为磷酸氢二钠-氯化钠缓冲液，其中磷酸氢二钠浓度为50mM，氯化钠浓度为1100mM，pH为6.8。5.根据权利要求1或4所述的疫苗组合物，其中，所述缓冲液的用量为疫苗组合物80％重量比。6.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物还包括佐剂，所述佐剂包括GEL、卡波姆。7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其中，所述佐剂卡波姆的量为0.1-500mg/剂量；或所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，袁于人，孙进忠，莫小兵，田克恭，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，斯澳生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41