本发明专利技术公开了一种广谱粘膜免疫防控猪繁殖与呼吸综合症的疫苗组合物及其应用，所述疫苗组合物由灭活纯化的完整猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原和稳定增效剂组成，所述抗原来源于高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HP-PRRSV-JXM-F5株，其微生物保藏号是：CGMCC NO.9453。所述稳定增效剂包括：必需和非必需氨基酸混合物、Ⅰ类干扰素诱导剂、双糖、多元醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA盐、表面活性剂以及缓冲溶液。本发明专利技术的疫苗组合物高度安全，具有广谱粘膜免疫的保护作用。并且提高了规模化生产过程猪繁殖与呼吸综合症病毒原液、半成品、成品的贮存稳定性，特别是在极端温度的环境中能够保持抗原结构完整、效价不下降，有利于高热地区猪繁殖与呼吸综合症病毒疫苗的贮存及使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种疫苗组合物及其应用，尤其涉及一种广谱粘膜免疫防治猪繁殖与 呼吸综合症的组合物及其应用，属于医药生物
技术介绍
细胞培养的病毒类疫苗有3种：减毒活疫苗、全病毒灭活疫苗、病毒亚单位疫苗， 根据病毒不同，其理化性质和生物学特性不同，保存其抗原的赋型剂和条件也不同。为保护 灭活病毒的完整性或减毒活病毒感染性，有必要开发适宜的赋型剂。业已开发出水痘带状 疱瘆、麻瘆、鸡痘、猪乙型脑炎活疫苗的冻干保护剂，灭活疫苗的冻干保护剂在狂犬病疫苗 中已经成功使用。尽管这样，灭活疫苗的冻干保护剂因使用的对象、条件也在不断优化和筛 选。 在灭活病毒疫苗领域中，疫苗配方中常含有动物源性的蛋白、例如牛或人血清白 蛋白、明胶以增强病毒类疫苗的稳定性特别对环境敏感的病毒，但疫苗组份中的蛋白如果 来源于动物传染病没有控制的猪或牛，则有传染病传播的潜在风险，也有变态反应的风险， 如人白蛋白、马血清白蛋白或牛血清白蛋白。 因此需要发现一种稳定的不含蛋白、多肽和寡肽的赋型剂用于冻干保护疫苗抗 原，特别是难以保存的包含灭活纯化全病毒的猪繁殖与呼吸道病毒疫苗抗原；也需要开发 适合有效剂量低、总蛋白含量小疫苗使用的赋型剂，这种需求特别适合高度纯化的疫苗，这 些疫苗含微量的残余杂质蛋白和核酸，排除了潜在的过敏反应，但会引起纯化灭活病毒降 解、吸附或凝聚，从而使疫苗效果减小，因此赋型剂中需含有增强免疫作用的成分，目前疫 苗铝佐剂、双向油佐剂很难和病毒抗原冻干而保持疫苗的免疫原性和安全性，因此有必要 开发能冻干且具有佐剂效果的赋型剂成分。 干扰素是具有多种生理功能的蛋白质家族，且这个家族的每个成员在功能上是不 可完全替代的。研宄表明α类干扰素可显著增强特异性的体液免疫反应。在机体的免疫 网络中，干扰素是细胞分泌的具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生物活性的蛋白质。其 免疫调节活性不仅涉及体内非特异性免疫，也包括特异性免疫的细胞和体液免疫。许多细 胞因子如α类干扰素、IL-12免疫增强剂免疫的作用都有报道，且有抗微生物感染作用，佐 剂的作用是成倍增强机体的免疫反应并在多种动物上使用。猪繁殖与呼吸道综合症的流行 要求高效、安全、广谱的疫苗，目前有4-5个减毒活疫苗和灭活疫苗上市，是经过体外细胞 传代减毒适应而成，免疫效果达不到预期，对某些毒株的保护水平低且不能预防猪的感染， 可能是猪体没有产生足够的细胞免疫和野毒产生了逃逸机体免疫的变异。尽管抗猪繁殖与 呼吸综合症病毒的免疫不甚清楚，但研宄发现猪繁殖与呼吸道病毒野毒株和疫苗株均不能 刺激机体产生强烈的病毒清除免疫。病毒特异的T细胞分泌的γ-干扰素和病毒中和抗体 在病毒感染后几周产生具有病毒清除作用。和其它病毒的特性相比，猪繁殖与呼吸综合症 病毒不能或抑制诱导体内干扰素的形成，而猪体内α类干扰素影响病毒特异的T细胞分泌 的γ-干扰素的反应和高效抗病毒的免疫预防。 许多的研宄报道α类干扰素和猪繁殖与呼吸综合症病毒联合使用都不能刺激猪 体产生强烈的抗病毒免疫，病毒本身抑制了猪体的干扰素信号转导，详尽的机制仍不明白。 一般情况下干扰素具有广谱抗病毒作用，抑制病毒复制，可能对活病毒诱导的干扰素水平 有负面作用，但许多的试验表明干扰素对感染或暴露动物疾病状态和进程的影响，换句话 说是影响疾病的痊愈或加剧。α类干扰素通过增强特异性的体液免疫和细胞免疫，增强分 泌IL-1、IL-12、IL-18、γ-干扰素发挥其免疫增强作用以及抗病毒免疫作用。由于干扰素 作为佐剂使用，具有明显的种属特异性，自然干扰素提取复杂成本高，重组基因工程干扰素 多作为抗病毒、抗肿瘤的药物药物使用。尽管这样，自1970年以来，多种内源性干扰素诱 导剂的种类、作用已被阐明，这些物质来自包括病毒、其他微生物的双链DNA、RNA、内毒素、 甘露聚糖、分裂素、植物血凝素、链球菌溶血素、商陆分裂素以及合成的多聚核苷酸、青霉菌 素、木香脑，黄嘌呤二核苷酸、黄嘌呤单核苷酸、核黄素（维生素 Β2)细菌的胞嘧啶-鸟嘌 呤序列CpG基序，必须作为疫苗配方中的组分注册获准使用。作为干扰素诱导剂的聚肌胞 复合物（polyIC)或另外混入多聚赖氨酸和羧甲基纤维素的聚肌胞复合物（Poly ICLC)的 干扰素诱导作用、佐剂作用在多种病毒疫苗或动物疫苗中都有研宄报道。 POlyIC和POlyICLC在猪体上具有诱导干扰素的能力，增强细胞介导的免疫和体 液免疫，特别增强特异性体液免疫，增强狂犬病毒疫苗、百日咳疫苗、流感疫苗的特异性抗 体生成。 结合以上的的问题，本专利技术提供了一种稳定高效的疫苗组合物，由作为抗原的灭 活纯化的完整猪繁殖与呼吸综合症病毒和稳定增效剂组成，稳定增效剂包括：必需和非必 需氨基酸混合物、I类干扰素诱导剂、麦芽糖、山梨糖醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA 盐、吐温-20以及缓冲溶液。
技术实现思路
为了克服现有技术的缺陷，本专利技术的目的在于提供纯化灭活猪繁殖与呼吸综合症 病毒疫苗稳定增效剂组合物及其疫苗组合物，所述的稳定增效剂完全为水溶性的佐剂，并 且能够安全有效地增强现行灭活猪繁殖与呼吸综合症病毒疫苗的安全性，扩大对不同基因 型、遗传谱系猪繁殖与呼吸综合症病毒免疫谱，提高免疫效果，扩大疫苗的使用范围，延长 免疫期达到120天。结合了猪繁殖与呼吸综合症病毒的在不同物理状态、不同温度理化性 质，提高猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原在生产、贮存、冷链、使用的稳定性。在2-8°C可保存 2年，效期长达2年；特别是可在极端温度的环境中45°C保存1周、37°C保存1月病毒结构 完整性和活性不下降，有利于高热地区猪繁殖与呼吸综合症病毒疫苗的冷链、疫苗质量保 证、使用效果稳定。本专利技术制备的冻干灭活纯化疫苗组合物经鼻内滴注免疫小母猪、母猪、 怀孕母猪可增强中和抗体的生成，减少感染病毒的病毒血症持续时间，对同型基因、异型基 因、不同遗传谱系猪繁殖与呼吸综合病毒感染引起症状或死亡具有保护作用，具有广谱免 疫原性；且对怀孕母猪安全不影响其生殖，免疫期为120天。 为实现上述目的本专利技术所采用的技术方案如下： 本专利技术的一种广谱粘膜免疫防控猪繁殖与呼吸综合症的疫苗组合物，其特征在于 所述疫苗组合物由灭活纯化的完整猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原和稳定增效剂组成； 其中，所述抗原来源于高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HP-PRRSV-JXM-F5株， 其为在MARC-145细胞上传至5代的适应株，分类命名为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病 毒，其微生物保藏号是：CGMCC NO. 9453,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心，保藏日期2014年7月8日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科 学院微生物研宄所。 其中，所述的稳定增效剂包括：必需和非必需氨基酸混合物、I类干扰素诱导剂、 双糖、多元醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA盐、表面活性剂以及缓冲溶液。 在本专利技术中，优选的，HP-PRRSV-JXM-F5工作种子批病毒经a)细胞培养；b)澄清； c)离子交换层析纯化；d)透析；e)核酸酶解；f)连续流密度梯度超速纯化或分子筛层析纯 化；g)灭活；f)透析制备。 在本专利技术中，优选的，所述的疫苗组合物中含有：2. 0?10g/本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种广谱粘膜免疫防控猪繁殖与呼吸综合症的疫苗组合物，其特征在于所述疫苗组合物由灭活纯化的完整猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原和稳定增效剂组成；其中，所述抗原来源于高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HP‑PRRSV‑JXM‑F5株，其为HP‑PRRSV‑JXM分离毒在MARC‑145细胞上传至第5代的细胞适应株，微生物保藏号是：CGMCC NO.9453；其中，所述的稳定增效剂包括：必需和非必需氨基酸混合物、Ⅰ类干扰素诱导剂、双糖、多元醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA盐、表面活性剂以及缓冲溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张澍，吕宏亮，
申请(专利权)人：吕宏亮，张澍，山西隆克尔生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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