一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药及制备方法，该农药包括200亿PIB/ml病毒悬液、纳米级二氧化硅、昆虫源氨基酸、芳香族氨基酸、荧光增白剂、木质素磺酸钠、昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲、昆虫几丁质合成抑制剂氟虫脲、阿拉伯胶、油菜籽油、大豆油甲酯、2万IU/μg苏云金杆菌、无菌水，其制备方法包括：A、广谱杆状病毒的生产；B、生产中出现的死蛾废蛹污染物处理及昆虫源氨基酸提取；C、昆虫病毒制剂制备。本发明专利技术提供了一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药，尤其对农业上难以防治的玉米螟等螟虫有较好的防治效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物杀虫制剂及生产方法，更具体涉及一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药，同时还涉及一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药的制备方法，适用于螟虫和其他多种鳞翅目害虫的生物防治。
技术介绍
杆状病毒包括甲型杆状病毒、乙型杆状病毒、丙型杆状病毒和丁型杆状病毒四个病毒属，是专一性感染昆虫和其它节肢动物的病毒。甲型杆状病毒是感染鳞翅目害虫的核型多角体病毒，乙型杆状病毒是感染昆虫的颗粒体病毒，丙型杆状病毒是感染膜翅目害虫的核型多角体病毒，丁型杆状病毒是感染双翅目害虫的病毒。杆状病毒可以让感染害虫罹患不治之症死亡。当害虫取食多角体病毒后，多角体蛋白在昆虫中肠强碱性环境下降解，将病毒粒子释放出来，侵入中肠细胞，在细胞核中呈数量级扩增。扩增的病毒粒子随血淋巴循环很快进入不同组织器官，对害虫进行全身性感染。昆虫所有组织被病毒感染后都产生大量病毒粒子，病毒粒子由多角体蛋白包埋，形成多角体，昆虫全身都被病毒多角体占据，虫体液化，只有幼虫的几丁质表皮包裹。病毒感染致死幼虫表皮破裂后，释放出多角体病毒继续感染目标害虫。这样，病毒就可以在害虫之间以及上下代之间进行传播，形成大面积的昆虫病毒病。杆状病毒杀虫剂具有对目标害虫杀虫效果好，对人畜及其它高等动物安全，不污染环境，不伤害天敌，不易导致害虫产生抗性等诸多优点，国内外已有多种杆状病毒杀虫剂进行了工厂化生产和田间应用，我国也有十多种病毒杀虫剂完成农药登记注册。然而，在实际应用中，杆状病毒杀虫剂存在三个主要缺陷，一是杀虫谱窄，传统上一种昆虫病毒只能感染一种害虫，而田间往往同时发生多种害虫，用一种病毒制剂难以防治；二是昆虫病毒杀虫速度慢，施药后5－10天才看到明显杀虫效果，农民不易接受；三是昆虫病毒对紫外光敏感，在太阳光直射下容易失活。另外，昆虫病毒生产目前还主要依赖活体繁殖的方法生产，通过大量宿主幼虫，当幼虫长到四龄时，5-8％的幼虫继续在无病毒环境下饲养、化蛹、羽化成蛾交配产卵，繁殖下一代幼虫进行昆虫传代和病毒生产。92-95％的四龄幼虫接种病毒感染，大多数感染幼虫感染后5-10天死亡，病毒致死虫尸中充满病毒颗粒，收集虫尸提取病毒制备生物生物农药。在大规模工厂化生产中，大量成虫蛾子交配产卵后死亡，成为废物需要处理。病毒生产中为了获得较大病毒产量，常使用较大虫龄幼虫感染病毒生产，致使有3-8％的幼虫感染后不能致死而化蛹，这些蛹不能用于健康幼虫传代，也没有生产病毒的价值，因为蛹体内病毒含量极低，这些蛹只能作为废物丢弃。在昆虫病毒杀虫剂的生产和应用发展中，需要开发广谱、杀虫速度快、并具有抗紫外能力的新型制剂，并能对生产中的死蛾、废蛹等污染物进行再利用处理，避免环境污染，促进昆虫病毒生物农药产业的发展。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药，配方合理,使用方便,该生物农药突破了一种昆虫只能防治一种害虫的传统观念，一种病毒制剂可防治30多种害虫，尤其对农业上难以防治的玉米螟等螟虫有较好的防治效果。同时，该制剂中添加的光保护剂、增效剂和害虫引诱剂种类更多样，效果更完善，对环境更友好。本专利技术的另一个目的是在于提供了一种对鳞翅目螟蛾科幼虫有杀虫活性的广谱杆状病毒生物农药的制备方法，方法易行，操作简便，而且将生产中的死蛾和废蛹等废物处理变成生物农药的有用成份，实现循环经济模式，使生产和制备过程完全没有废物污染。为了实现上述的目的，本专利技术采用以下技术措施：一种利用替代宿主玉米螟或棉铃虫生产广谱杆状病毒芹菜夜蛾核型多角体病毒(Anagraphafalciferamultiplenucleopolyhedrovirus，AnfaNPV)，有如下特征：该病毒形态为多角体。多角体大小约1.45μm,病毒粒子杆状，为多粒包埋型，病毒粒子大小约为38×306nm。病毒对Tn368等昆虫细胞系敏感，对玉米螟和棉铃虫等昆虫也敏感。申请人从污染的Tn368培养细胞中筛选得到一株广谱杆状病毒。开始只认为它是一株普通的AcMNPV，后来经过棉铃虫和玉米螟的扩增，发现它的杀虫谱和杀虫活性与AcMNPV不同。通过部分基因组序列测定，结合其他生理生化特征和分子特征，鉴定其为一种广谱芹菜夜蛾核型多角体病毒，命名为芹菜夜蛾核型多角体病毒C1株(Anagraphafalciferamultiplenucleopolyhedrovirus-C1)。该病毒株已于2016年7月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，湖北省武汉市武昌珞珈山)，保藏编号：CCTCCNO:V201640。一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成：所述的200亿PIB/ml病毒悬液(请见本专利技术制备步骤A).所述的昆虫源氨基酸(请见本专利技术制备步骤B)。所述的昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲、氟虫脲及2万IU/μg苏云金杆菌等均商品化产品。一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成(优选范围)：一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成(最好范围)：一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成(最佳值)：一种防治螟虫广谱杆状病毒体病毒生物农药的制备方法，其步骤是：A、广谱杆状病毒的生产：使用人工饲料饲养玉米螟和棉铃虫幼虫，棉铃虫1-3龄群体饲养，4龄后单头饲养，玉米螟则在整个幼虫期都群体饲养。待幼虫长到4龄时，分别接种芹菜夜蛾核型多角体病毒进行感染。感染病毒的幼虫在温度27±1℃，相对湿度75-85％条件下继续培养，培养7-10天后，92-97％幼虫体内充满病毒颗粒而死亡，收集病毒致死虫尸加工制备200亿PIB/mL病毒悬液。B、生产中出现的死蛾废蛹污染物处理及昆虫源氨基酸提取：在工厂化病毒生产中，有3-8％的幼虫不能致死而进入化蛹。这些经病毒感染而没有在幼虫期死亡而化得蛹体内病毒含量极低，只能作为废物。虫种室每天数万头蛾子交配产卵后死亡成为污染物。为了处理这些废料并提取有用物质在病毒杀虫剂中应用，每天将死亡蛾子和废蛹分别收集，85-88℃浸煮5-10分钟，捞出后40-50℃烘干至含水量为5-8％，然后将两者混合，粉碎成浆糊状，按1:4重量比(死蛾废蛹1:盐酸4)加入5Mol/L盐酸溶液，在88－87℃反应缶中反应13－17小时，加氢氧化钠调节溶液pH至6.5-7终止反应。经网纱过滤，不能降解的渣子作为有机肥料组分使用，液体部分经测定总氨基酸含量作为昆虫源氨基酸在病毒杀虫剂中使用。液体中含有昆虫源短肽，并含有昆虫源油脂，在制备病毒杀虫剂时，这些短肽及油脂随昆虫源氨基酸一并加入，昆虫源油脂和短肽的特殊气味对害虫幼虫具有引诱作用，引诱幼虫从隐蔽植物部位出来取食喷施在植株表面的昆虫病毒，提高杀虫效果。C、昆虫病毒制剂制备：病毒制剂包括病毒悬液、纳米级二氧化硅、荧光增白剂、昆虫源氨基酸、芳香族氨基酸、木质素磺酸钠、植物源油脂、昆虫几丁质合成抑制剂氟啶脲和氟虫脲、阿拉伯胶及无菌水。各原料成分按比例依次加入反应缶中，常温常压(不需要标注范围)下140－160转/分钟搅拌1－2小时，得到一种灰白色的悬浮剂产品，检验合格后分装入库。所述病毒悬液由芹菜夜蛾核型多角体病毒感染替代宿主得到，替代宿主为本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成：

【技术特征摘要】
1.一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，它由以下重量份的原料制成：2.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：3.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：4.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：5.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：6.根据权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药，其特征在于：7.权利要求1所述的一种防治螟虫广谱杆状病毒生物农药的制备方法，其步骤是：A、广谱杆状病毒的生产：使用人工饲料饲养玉米螟和棉铃虫幼虫，棉铃虫1-3龄群体饲养，4龄后单头饲养，玉米螟则在整个幼虫期都群体饲养，待幼虫长到4龄时，分别接种芹菜夜蛾核型多角体病毒进行感染，感染病毒的幼虫在温27±1℃，相对湿度75-85％条件下继续培养，培养7-10天后，92-97％幼虫体内充满病毒颗粒死亡，收集病毒致死虫尸加工制备200亿PIB/mL病毒悬液；B、生产中出现的死蛾废蛹污染物处理及昆虫源氨基酸提取：在工厂化病毒生产中，有3-8％的幼虫不...

【专利技术属性】
技术研发人员：张忠信，孙修炼，类承凤，吴柳柳，高梅影，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42