本发明专利技术涉及生物农药与微生物肥料领域，具体公开的是一种含有芽孢萌发剂的坚强芽孢杆菌的可湿性粉剂及其制备方法，该可湿性粉剂的由下列原料组成：坚强芽孢杆菌发酵液，填料：白炭黑；润湿剂：Morwet EFW；分散剂：Morwet D-425；芽孢萌发剂：果糖，缬氨酸，赖氨酸；紫外保护剂：卵磷脂，羧甲基纤维素；干燥保护剂：麦芽糖，甘露醇；制备的坚强芽孢杆菌可湿性粉剂芽孢含量为不低于100亿CFU/克，悬浮率不低于80%，润湿时间不高于70S，细度粉碎过400目筛，水份含量不高于5%，制备方法稳定，施入大田后芽孢萌发速度快，萌发效率高，可明显提高其肥效与对植物病害防治效果，减少芽孢的用量，降低成本，效果显著。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物农药与微生物肥料领域，具体涉及一种含芽孢萌发剂的坚强芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法。
技术介绍
我国每年使用大量的化学农药制剂与化肥，极易造成农药残留超标，生物富集，不仅污染生态环境，还影响人类的健康。而生物农药副作用小，对人无害，是一种具有广阔前景的绿色农药，日益成为全球农药发展的一种趋势。芽胞杆菌是目前生物农药中研究最多的一种微生物，它具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力，其营养细胞能在真菌性病原菌丝体表面繁衍定殖，有效抑制病菌生长，因此，在控制病害发生、促进植株生长，提高作物产量等方面显示出了广阔的应用前景。坚强芽孢杆菌（Bacillusfirmus）是1933年Bredemannn&Werner首次发现并命名的，坚强芽孢杆菌是一种营腐生生活的革兰氏阳性细菌，在土壤、水体、植物表面和其它自然环境中广泛存在，易于获取，内生芽孢，抗逆能力强，繁殖速度快、营养要求简单、对农作物和环境安全，可以产生多种抑菌物质，对许多真菌以及线虫均有较强的抑制作用。目前国内，外关于坚强芽孢杆菌作为生防菌的报道不少。BayerCropscience利用坚强芽孢杆菌I-1582作为生物农药已先后在美国和欧盟登记，登记名为PONCHO/VOTiVO，用于防治玉米，大豆害虫和植物线虫，可直接杀死线虫细胞，具有极好的防治效果。国内朱天辉教授利用绿粘帚霉与坚强芽孢杆菌，预先接种生防菌协同控制赤枯病取得一定效果，鹿秀云利用坚强芽孢杆菌XJT-7防治黄瓜白粉病，防治效果达到79%；刘幸红等利用坚强芽孢杆菌对核桃炭疽病进行防治，其防效可达到85%以上。目前，国内已有关生产坚强芽孢杆菌类产品的相关技术，如：廖先清等在专利号：2014104369551中公开了一种坚强芽孢杆菌活菌制剂的制备工艺；牛赡光等在专利号2009102564652中公开了一株坚强芽孢杆菌及其在核桃炭疽病，黄瓜灰霉病，玉米小斑病，棉花枯萎病等多种植物病害上的防治上的应用。虽然以芽孢杆菌为主制备的微生物农药产品不少，但总体说来，还存在包括研究开发与生产脱节，制剂化困难，产品质量稳定性差、生产工艺落后，产品一致性不高，生产企业规模小，应用推广难度大的问题，除些之外，目前芽孢杆菌以可湿性粉剂为主，这种剂型虽然便于储存和运输，但在生产应用中存在很多制约因子。如施用的可湿性粉剂中大部份以芽孢作为衡量产品中有效成分的惟一标准，若芽孢不能及时萌发，施用效果则不佳，如王倩利用枯草芽孢杆菌TR21防治巴西蕉枯萎病时，前期试验利用TR21菌株NB发酵液灌根和叶腋接种都能有效防治枯萎病，但是利用芽孢制备可湿性粉剂的灌根与叶腋效果却不理想，显示了去掉发酵液后的纯芽孢可能因为萌发困难而使防效下降。但还未有具体的有关坚强芽孢杆菌的可湿性粉剂的制备方法公开。也未有在可湿性粉剂中加入芽孢萌发剂的研究的报道。另外，由于不同的芽孢杆菌与湿润剂，分散剂等助剂的相容性，载体对各类芽孢杆菌吸附性各不相同，将现有的芽孢杆菌可湿性粉剂的配方或制备工艺无法直接用于制备含芽孢萌发剂的坚强芽孢杆菌可湿性粉剂；可湿性粉剂中有效菌的吸附量，存活率，对有害菌的防治效果及可湿性粉剂量的稳定性差异较大，其整个可湿性粉剂的制备方法必须全盘考虑各载体吸附能力，对坚强芽孢杆菌的干燥过程中保护作用，湿润剂，分散剂对可湿性粉剂的悬浮率，湿润时间的影响，并且对芽孢萌发剂进行全面的筛选才能够得到湿润时间短，悬浮率高，芽孢保存时间久，使用后芽孢能快速萌发的，防效好的坚强芽孢杆菌可湿性粉剂。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：针对上述现有技术的不足，提供一种加入芽孢萌发剂的坚强芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法，其制备的坚强芽孢杆菌可湿性粉剂芽孢含量为不低于100亿CFU/克，悬浮率不低于80%，润湿时间不高于70S，细度粉碎过400目筛，水份含量不高于5%，制备方法稳定，施入大田后芽孢萌发速度与萌发率远远超过普通可湿性粉剂。为了达到上述目的，一种坚强芽孢杆菌可湿性粉剂由下列重量分组成：坚强芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：白炭黑20-30份；润湿剂：MorwetEFW1-4份；分散剂：MorwetD-4250.2-1份；芽孢萌发剂：果糖0.2-1份，缬氨酸0.1-0.5份，赖氨酸0.2-1份；紫外保护剂：卵磷脂1-2份，羧甲基纤维素0.2-1份；干燥保护剂：麦芽糖1-5份，甘露醇0.2-1份。为了实现上述目的，我们采用的一种坚强芽孢杆菌可湿性粉剂的其制备方法，由以下几步骤组成：一、坚强芽孢杆菌发酵液的制备取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种至50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至5L大三角瓶中的芽孢杆菌液体培养基，装液量为2L，37℃震荡培养16-28小时，检测其菌液浓度，菌液含量超过60亿/毫升，即可作为坚强芽孢杆菌种子液。将坚强芽孢杆菌种子液接种至1000L的发酵罐中，装液量为600L的发酵培养基，通气量为前16小时为每分钟液气比为1：0.6，其后通气量为1：1；开搅拌，转速为160r/min，培养温度前24小时为37℃，其后，每4小时将温度提高1℃，培养28-36小时，检测其芽孢含量超过100亿CFU/ml，即可结束发酵，作为坚强芽孢杆菌发酵液；其中，所述LB培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%。其中，所述芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，可溶性淀粉8g/L，豆粕粉15g/L，鱼粉5g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，pH7.2；其中，所述的发酵培养基：葡萄糖10g/L，玉米粉20g/L，豆粕粉75g/L，鱼粉5g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸锰0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；二、将坚强芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：白炭黑20-30份；紫外保护剂：卵磷脂1-2份，羧甲基纤维素0.2-1份；干燥保护剂：麦芽糖1-5份，甘露醇0.2-1份，混匀后喷雾干燥，得到坚强芽孢杆菌粉剂；三、将润湿剂：MorwetEFW1-4份；分散剂：MorwetD-4250.2-1份；芽孢萌发剂：果糖0.2-1份，缬氨酸0.1-0.5份，赖氨酸0.2-1份混匀得到坚强芽孢杆菌的助剂；四、将步骤二与步骤三所得到的坚强芽孢杆菌粉剂与助剂混匀并过通过气流粉碎机粉碎过400目筛，检测其芽孢含量不低于100亿cfu/g，悬浮率不低于80%，润湿时间不高于70s，水份含量不高于5%，真空包装，即可得到坚强芽孢杆菌可湿性粉剂。其中，所述的坚强芽孢杆菌可湿性粉剂的最佳重量份组成为：坚强芽孢杆菌发酵液60份；填料：白炭黑25份；润湿剂：MorwetEFW3份；分散剂：MorwetD-4250.8份；芽孢萌发剂本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种坚强芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，由下列重量分组成：坚强芽孢杆菌发酵液40‑70份；填料：白炭黑20‑30份；润湿剂：Morwet EFW 1‑4份；分散剂：Morwet D‑425 0.2‑1份；芽孢萌发剂：果糖0.2‑1份，缬氨酸0.1‑0.5份，赖氨酸0.2‑1份；紫外保护剂：卵磷脂1‑2份，羧甲基纤维素0.2‑1份；干燥保护剂：麦芽糖1‑5份，甘露醇0.2‑1份。
【技术特征摘要】
1.一种坚强芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，由下列重量分组成：坚强芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：白炭黑20-30份；润湿剂：MorwetEFW1-4份；分散剂：MorwetD-4250.2-1份；芽孢萌发剂：果糖0.2-1份，缬氨酸0.1-0.5份，赖氨酸0.2-1份；紫外保护剂：卵磷脂1-2份，羧甲基纤维素0.2-1份；干燥保护剂：麦芽糖1-5份，甘露醇0.2-1份。
2.根据权利要求1所述的一种坚强芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，其制备方法由以下几步骤组成：
一、坚强芽孢杆菌发酵液的制备
取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至5L大三角瓶中的芽孢杆菌液体培养基，装液量为2L，37℃震荡培养16-28小时，检测其菌液浓度，菌液含量超过60亿/毫升，即可作为坚强芽孢杆菌种子液，将坚强芽孢杆菌种子液接种至1000L的发酵罐中，装液量为600L的发酵培养基，通气量为前16小时为每分钟液气比为1：0.6，其后通气量为1：1；开搅拌，转速为160r/min，培养温度前24小时为37℃，其后，每4小时将温度提高1℃，培养28-36小时，检测其芽孢含量超过100亿CFU/ml，即可结束发酵，作为坚强芽孢杆菌发酵液；
其中，所述LB培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；其中，所述的芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，可溶性淀粉8g/L，豆粕粉15g/L，鱼粉5g/L，硫酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡艳晖，
申请(专利权)人：佛山市艳晖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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