一种来源于坚强芽孢杆菌的发酵产物免疫蛋白及其制备工艺制造技术

本发明专利技术提供了一种来源于坚强芽孢杆菌的发酵产物免疫蛋白及其制备工艺，该工艺通过液体发酵培养出含有免疫蛋白的发酵液，依次采用离心、浓缩、硫酸铵沉淀、低压离子交换层析和液相色谱纯化步骤，从发酵液中分离提纯出免疫蛋白，其氨基酸序列如序列表中的序列1所示。本发明专利技术免疫蛋白能诱导植物产生防卫反应，具有明显的防病、抗虫、增产效果，可开发成能大面积应用、批量生产的农用植物免疫剂。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，涉及微生物发酵产物及其提取分离和纯化方法，特别涉及一种来源于坚强芽孢杆菌的发酵产物免疫蛋白及其制备工艺。
技术介绍
人可以通过自身锻炼表现(短跑、跳高等)或注射丙种球蛋白药物增强抗性(免疫力)或接种疫苗(肝炎、结核、天花、麻疹、水痘等)都控制一些流行疾病的发生，同样植物体内也存在抗性物质，在植物遭到攻击时也能表现出抗性。1963年匈牙利科学家发现在研究植物抗性时发现这种现象，但直到1992年才由美国康乃尔大学华裔科学家韦忠民博士从梨火疫病蛋白细菌中发现这种物质，并命名为超敏蛋白(harpin)。这一现象的发现，揭示了植物体内抗性秘密，国际权威科学刊物美国的《Science(科学)》杂志对这一科研成果做了突出报导，被认为是科学上的重大突破，并得到美国政府的特别资助。1997年，韦忠民博士与伊甸生物技术公司的专家们共同努力，将这种物质开发成能大面积应用在农作物上的农用生物技术产品——超敏蛋白。超敏蛋白是一种新型结构的免疫蛋白，它能调节植物的新陈代谢，启本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种来源于坚强芽孢杆菌的发酵产物免疫蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。

【技术特征摘要】
1.一种来源于坚强芽孢杆菌的发酵产物免疫蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID
NO.1所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得
的保守性变异体。
2.一种编码权利要求1所述的免疫蛋白的DNA分子。
3.根据权利要求2所述的DNA分子，其特征在于，其核苷酸序列为SEQIDNO.2。
4.根据权利要求1所述的免疫蛋白在制备抵御病原物的植物免疫剂中的应用。
5.一种来源于坚强芽孢杆菌的发酵产物免疫蛋白的制备工艺，其特征在于，该工艺利用
坚强芽孢杆菌SSL065菌株，通过液体发酵培养出含有免疫蛋白的发酵液，依次采用离心、
浓缩、硫酸铵沉淀、低压离子交换层析和液相色谱纯化步骤，从发酵液中分离提纯出免疫蛋
白；具体步骤如下：
①发酵上清液提取：发酵液在4℃条件下，以7500-8500r/min的转速离心，得发酵上清
液；
②免疫蛋白的粗提取：向发酵上清液加入硫酸铵粉末，使溶液中的硫酸铵饱和度达到
65％-72％，搅匀，于4℃冰箱中沉淀过夜，然后在14000r/min、4℃的条件下离心，分离出沉
淀和上清液，将沉淀烘干，以0.05mol/LpH7.5的Tris-HCl缓冲液溶解，再用0.05mol/LTris-HCl
缓冲液透析过夜，得免疫蛋白粗提液；
③免疫蛋白的分离纯化：将免疫蛋白粗提液浓缩至原体积的1/5后，采用低压层析系统
做离子交换层析并以紫外检测仪在280nm检测，以25nmol/LpH7.5的Tris...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文军，安天赐，杨登，安德荣，
申请(专利权)人：宝鸡西姆现代生物技术工程有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61