针对β淀粉样蛋白的抗体制造技术

针对人β淀粉样蛋白的抗体。相对于人β淀粉样蛋白40肽，抗体更选择性地结合人β淀粉样蛋白42肽。特异性针对β淀粉样蛋白42、作为用于结合β淀粉样蛋白42肽并治疗与淀粉样变性相关联的病况例如阿尔茨海默病的治疗剂的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对β淀粉样蛋白的抗体专利
本专利技术涉及结合至人β淀粉样蛋白1-42肽和其N-末端截短体的抗体，统称为Aβn-42肽，其中n是1至29。它涉及如下抗体，相对于β淀粉样蛋白1-40肽，所述抗体更选择地结合至β淀粉样蛋白n-42肽。本专利技术也涉及抗-Aβn-42抗体用于治疗与淀粉样变性相关联的病况(包括阿尔茨海默病)的用途。背景阿尔茨海默病(AD)表征为认知损害恶化、记忆受到影响，使患者的社会和职业功能衰弱。退行性疾病导致大脑内神经细胞的损失，这带来了在语言和更高功能例如判断、规划、组织和推理上的认知困难，这最终可导致人格变化。该疾病的末期表征为独立发挥功能的完全丧失。组织学上，AD(散发性和家族性)是由细胞内神经原纤维缠结(NFT)和细胞外斑块的存在定义的。斑块是从淀粉样前体蛋白(APP)的异常裂解衍生的淀粉样β蛋白肽(Aβ)的聚集体，该淀粉样前体蛋白是在大脑中神经元和星形胶质细胞中发现的跨膜蛋白。在AD患者的血管中也发现了Aβ沉积。胆碱能神经元在AD中特别易受伤害，并且随之而来的神经递质衰退影响了其他神经递质系统。该疾病的其他症状包括氧化应激、炎症和神经元凋亡(程序性细胞死亡)。在AD患者中，广泛的神经元细胞死亡导致认知衰退和患者的最终死亡(尤金(Younkin)，1995；博尔柯尔特(Borchelt)等人，1996；塞克(Selkoe)，1999)。目前的治疗仅是对症的并被视为最小有效的，其中伴随症状轻微的改善持续有限的时间段。然而，Aβ水平的产生过剩或改变被认为是散发和早发AD的发病机理中的关键事件。出于这个原因，Aβ已经成为开发旨在减少其形成(瓦萨(Vassar)等人，1999)、或旨在激活加速其从大脑中清除的机制的药物的主要靶标。淀粉样蛋白级联假说提出Aβ肽的产生不利地影响神经元功能，从而导致AD中的神经细胞死亡和痴呆。Aβ是从淀粉样前体蛋白(APP)产生，该前体蛋白被分泌酶顺序地裂解而产生不同长度的种类。主斑块成分是Aβ1-42的42个氨基酸同工型，其参与在AD病理中的神经毒性寡聚体的形成和斑块形成。Aβ的包括Aβ1-42、pGluAβ3-42、Aβ3-42和4-42的多个同工型在AD大脑中占主导地位，其中Aβ1-42和Aβ4-42在家族性和散发性AD(朴特柳斯(Portelius)等人，2010)的海马体和皮层中是主要形式。终止于残基42的Aβ是通过加工APP产生的Aβ种类的很小一部分。其他形式包括Aβ1-40和N-末端截短体Aβn-40。然而，终止于残基42的Aβ是最容易聚集并促使沉积为淀粉样蛋白斑。除了更易于聚集，该Aβ1-42肽还可形成可溶的低n聚合物(或寡聚体)，这些聚合物已显示对培养中的神经元是有毒的。不像更大的显著的原纤维沉积物，寡聚体在典型病理学测定中是检测不到的。已从AD脑中分离出具有类似性质的寡聚体，并且这些与疾病进展(与斑块相比)是更密切地相关联的(尤金(Younkin)，1998；沃尔什(Walsh)等人，2005a；沃尔什(Walsh)等人，2005b)。实验地产生的施加到脑切片或注入体内的寡聚体导致海马长时程增强(LTP)的障碍，该海马长时程增强是作为记忆机制范例而熟知的一种突触信息存储形式(兰伯特(Lambert)等人，1998；沃尔什(Walsh)等人，2002；王(Wang)等人，2002)。可溶寡聚体已参与到突触的物理变性中(穆克(Mucke)等人，2000)。在小鼠模型中由抗体进行的记忆障碍逆转已证实了以下新兴概念，寡聚体在突触障碍中发挥主要作用。遗传证据表明，在许多(如果不是全部)导致家族性AD(博尔柯尔特(Borchelt)等人，1996；达夫(Duff)等人，1996；斯彻尤利尔(Scheuner)等人，1996；西特伦(Citron)等人，1998)的遗传状况下产生增加量的Aβ1-42和其N-末端截短体(Aβn-42)，表明以下可能性，淀粉状蛋白形成可能是由Aβn-42产生的增加或降解的减少或二者导致(格拉贝(Glabe)，2000)。具体而言，导致APP基因和/或编码该γ分泌酶复合体成分早老蛋白的基因发生遗传突变的家族性AD增加了Aβ1-42(相对于Aβ1-40)的产生。还已经提出，对于毒性Aβ种类的产生，在大脑中产生的肽的绝对量可能没有Aβ肽的比率(反映为改变的Aβ1-42与Aβ-40的比率)那么重要(德斯特鲁(DeStrooper)，2007；库珀斯汀(Kuperstein)等人，2010)。此外，淀粉样蛋白沉积的动物模型(小鼠和果蝇两者)表明需要Aβ1-42以形成淀粉样蛋白沉积物(格雷夫(Greeve)等人，2004；饭岛(Iijima)等人，2004；麦高恩(McGowan)等人，2005)。来自2000年的疫苗接种研究的结果表明了对于AD来说可能的新的治疗策略。过度表达突变体人APP(其中位置717处的氨基酸是苯丙氨酸而不是正常的缬氨酸)的PDAPP转基因小鼠以年龄和大脑区域依赖性方式逐步显露了AD的许多神经病理学标志。当充分确立Aβ沉积和随后的一些神经病理学变化时，在AD型神经病理学发作之前(在6周龄)或在更大的年龄(11个月)，将转基因动物用Aβ1-42肽进行免疫。对年幼动物的免疫接种基本上防止了斑块形成、神经炎性营养不良和星形胶质细胞增生的发展。对年长动物的治疗也显着地降低了这些AD样神经病理的程度和进展。显示了Aβ1-42免疫接种导致抗-Aβ抗体的产生并且Aβ免疫反应性单核细胞/小胶质细胞出现在剩余斑块的区域中(申克(Schenk)等人，1999；申克(Schenk)等人，2000)。然而，主动免疫接种途径当施加到人体时导致一些脑膜脑炎案例，这最可能归因于T细胞应答，并且尽管在功效上的初步结果是有希望但仍被中断(奥格戈佐(Orgogozo)等人，2003；吉尔曼(Gilman)等人，2005；普赖德(Pride)等人，2008)。在此之后，研究了一些被动免疫接种策略。针对Aβ的抗体的外周给药足以减轻淀粉样蛋白负担(巴德(Bard)等人，2000)。尽管在这些实验中实现相对适度的抗体血清水平，被动给予的抗体能够穿过血脑屏障并进入中枢神经系统，修饰斑块并诱发已存在的淀粉样蛋白的清除。在Aβ1-40特异性抗体、Aβ1-42特异性抗体与针对Aβ的残基1-16的抗体之间的比较中，所有抗体显示降低了Aβ在小鼠大脑中的聚积(列维捷斯(Levites)等人，2006)。新近已经提出，CNS渗透是对于被动给予抗体的有效Aβ清除的最可能路径(戈尔德(Golde)等人，2009)。然而，除了能够穿过血脑屏障的抗体，下沉假说也被提出作为可能的作用机制。下沉假说认为可以间接通过降低血浆中的肽的浓度从CNS中去除Aβ。在描述这点的实验中，使用了能在血浆中结合Aβ并且从而将Aβ与CNS隔绝的抗体。这可以实现，是因为血浆中游离Aβ浓度的降低使得该抗体阻止了来自血浆的Aβ流入CNS，和/或而改变了血浆和CNS之间的平衡(德马托斯(DeMattos)等人，2001)。与抗体无关的淀粉样蛋白结合剂也显示在通过血浆中的结合而从CNS去除Aβ中是有效的。显示隔绝血浆Aβ的两种Aβ结合剂，即凝溶胶蛋白和GM1，减少或阻止了大脑淀粉样变性(松冈(Matsu本文档来自技高网...

【技术保护点】
相对于人β淀粉样蛋白1‑40肽(Aβ1‑40)，更选择性地结合人β淀粉样蛋白1‑42肽(Aβ1‑42)的分离的抗体分子，其中该抗体分子能够结合可溶的单体人Aβ1‑42和低n寡聚(高达五聚体)人Aβ1‑42。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.10.15 US 61/713,9961.相对于人β淀粉样蛋白1-40肽(Aβ1-40)，更选择性地结合人β淀粉样蛋白1-42肽(Aβ1-42)的分离的抗体分子，其中所述抗体分子包括(i)VH域，该VH域包括穿插有框架区的一组HCDR：HCDR1，HCDR2和HCDR3，所述HCDR的氨基酸序列是：HCDR1SEQIDNO：525，HCDR2SEQIDNO：526，以及HCDR3SEQIDNO：527，和(ii)VL域，该VL域包括穿插有框架区的一组LCDR：LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中该组LCDR的氨基酸序列是LCDR1SEQIDNO：534LCDR2SEQIDNO：535，以及LCDR3SEQIDNO：536。2.根据权利要求1所述的抗体分子，其中该VH域包括重链框架区FW1、FW2、FW3和FW4，其中该重链框架区的氨基酸序列是FW1SEQIDNO：528FW2SEQIDNO：529FW3SEQIDNO：530，以及FW4SEQIDNO：531。3.根据权利要求1所述的抗体分子，其中该VL域包括轻链框架区FW1、FW2、FW3和FW4，其中该轻链框架区的氨基酸序列是FW1SEQIDNO：537FW2SEQIDNO：538FW3SEQIDNO：539，以及FW4SEQIDNO：540。4.根据权利要求1所述的抗体分子，包括a)与氨基酸序列SEQIDNO：524至少90％一致的VH域；和b)与氨基酸序列SEQIDNO：533至少90％一致的VL域。5.根据权利要求1所述的抗体分子，包括氨基酸序列SEQIDNO：524的VH域；和氨基酸序列SEQIDNO：533的VL域。6.根据权利要求1所述的抗体分子，其中抗体分子识别可溶性Aβ1-42单体和高达并包括五聚体的寡聚形式...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·格罗夫斯，S·古斯塔夫松，K·豪格伦德，D·罗恩，C·劳埃德，A·尼克森，C·尼瓦，S·西蒙，
申请(专利权)人：米迪缪尼有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB