吉氏芽孢杆菌-进化枝的丝氨酸蛋白酶制造技术

本公开内容涉及从吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)克隆的丝氨酸蛋白酶及其变体。包含所述丝氨酸蛋白酶的组合物适用于清洁织物和硬质表面，以及多种工业应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求于2013年12月13日提交的美国临时专利申请61/915737和于2014年10月27日提交的美国临时专利申请62/069200的权益，两篇临时申请的内容均在此通过引用以其整体并入本文。
本公开内容涉及从吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)克隆的丝氨酸蛋白酶及其变体。包含所述丝氨酸蛋白酶的组合物适用于清洁织物和硬质表面，以及多种工业应用。
技术介绍
丝氨酸蛋白酶是具有引发蛋白质肽键的水解的活性位点丝氨酸的酶(EC 3.4.21)。丝氨酸蛋白酶基于其结构有两大类别：胰凝乳蛋白酶样(胰蛋白酶样)和枯草杆菌蛋白酶样。原型枯草杆菌蛋白酶(EC 3.4.21.62)初始从枯草芽孢杆菌(B.subtilis)获得。枯草杆菌蛋白酶及其同源物是MEROPS分类方案的S8肽酶家族的成员。S8家族的成员具有在其氨基酸序列中具有顺序为Asp、His和Ser的催化三联体。尽管丝氨酸蛋白酶在工业酶领域中早已是已知的，但是仍然需要适于特定条件和用途的其它丝氨酸蛋白酶。
技术实现思路
本专利技术的组合物和方法涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝枯草杆菌蛋白酶，包括从吉氏芽孢杆菌克隆的重组丝氨酸蛋白酶及其变体。本专利技术的组合物和方法还涉及通过常规分子生物学技术产生的吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组丝氨酸蛋白酶(参见，例如Sambrook等人，Molecular Cloning:Cold Spring Harbor Laboratory Press)。包含所述丝氨酸蛋白酶的组合物适用于清洁织物和硬质表面，以及多种工业应用。一些实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中所述重组多肽或其活性片段具有蛋白水解活性。另一些实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中所述重组多肽或其活性片段具有蛋白水解活性，前提条件是所述吉氏芽孢杆菌-进化枝不包含WO03054184-CAE48421、WO2007131657-CAS91385、WO2008086916-CAV33594或NCBI登录号AGS78407。另一些实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，所述重组多肽或其活性片段具有蛋白水解活性并且包含DXGIXXHSDLXXXGGASXXXXXPTTADLNXHGTH(SEQ ID NO:47)或DXGIXXHSDLXXXGGASXXXXXXTTADLXXHGTH(SEQ ID NO:90)基序，其中起始D是活性位点天冬氨酸残基且倒数第二个H是活性位点组氨酸并且X是任意氨基酸。另一个实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，所述重组多肽或其活性片段具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨基酸序列，其中起始D是活性位点天冬氨酸残基且倒数第二个H是活性位点组氨酸并且X是任意氨基酸，前提条件是所述吉氏芽孢杆菌-进化枝不包含WO03054184-CAE48421、WO2007131657-CAS91385、WO2008086916-CAV33594或NCBI登录号AGS78407。另一个实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨基酸序列的重组多肽或其活性片段还包含与SEQ ID NO:4、7、11、15、19、23、49、50、51、52、57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列。另一个实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨基酸序列的重组多肽或其活性片段还包含与SEQ ID NO:11、15、19、23、49、50、51、52、57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列。另一个实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨基酸序列的重组多肽或其活性片段还包含与SEQ ID NO:57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列。另一些实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨基酸序列的重组多肽或其活性片段还包含与SEQ ID NO:4、7、11、15、19、23、49、50、51、52、57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列，前提条件是所述吉氏芽孢杆菌-进化枝不包含WO03054184-CAE48421、WO2007131657-CAS91385、WO2008086916-CAV33594或NCBI登录号AGS78407。另一些实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨基酸序列的重组多肽或其活性片段还包含与SEQ ID NO:11、15、19、23、49、50、51、52、57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列，前提条件是所述吉氏芽孢杆菌-进化枝不包含WO03054184-CAE48421、WO2007131657-CAS91385、WO2008086916-CAV33594或NCBI登录号AGS78407。另一些实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨基酸序列的重组多肽或其活性片段还包含与SEQ ID NO:57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列，前提条件是所述吉氏芽孢杆菌-进化枝不包含WO03054184-CAE48421、WO2007131657-CAS91385、WO2008086916-CAV33594或NCBI登录号AGS78407。另一些实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨基酸序列的重组多肽或其活性片段还包含与SEQ ID NO:4、7、11、15、19、23、49、50、51、52、57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列，前提条件是SEQ ID NO:4、7、11、15、19、23、49、50、51、52、57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列不包含WO03054184-CAE48421或WO2007131657-CAS91385。另一些实施方案涉及吉氏芽孢杆菌-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中具有蛋白水解活性并且包含SEQ ID NO:47或90的氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种吉氏芽孢杆菌(Bacillus Gibsonii)‑进化枝的重组多肽或其活性片段，其中所述重组多肽或其活性片段具有蛋白水解活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.13 US 61/915,737;2014.10.27 US 62/069,2001.一种吉氏芽孢杆菌(Bacillus Gibsonii)-进化枝的重组多肽或其活性片段，其中所述重组多肽或其活性片段具有蛋白水解活性。2.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，其中所述吉氏芽孢杆菌-进化枝包含DXGIXXHSDLXXXGGASXXXXXPTTADLNXHGTH(SEQ ID NO:47)或DXGIXXHSDLXXXGGASXXXXXXTTADLXXHGTH(SEQ ID NO:90)基序，其中起始D是活性位点天冬氨酸残基且倒数第二个H是活性位点组氨酸，并且X是任意氨基酸。3.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，其中所述吉氏芽孢杆菌-进化枝包含SEQ ID NO:47。4.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，其中所述吉氏芽孢杆菌-进化枝包含SEQ ID NO:90。5.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，还包含与SEQ ID NO:4、7、11、15、19、23、49、50、51、52、57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列。6.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，还包含与SEQ ID NO:11、15、19、23、49、50、51、52、57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列。7.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，还包含与SEQ ID NO:57、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80或82的氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列。8.根据权利要求5至7中任一项所述的重组多肽或其活性片段，前提条件是所述氨基酸序列不包含WO03054184-CAE48421或WO2007131657-CAS91385。9.根据权利要求5至8中任一项所述的重组多肽或其活性片段，前提条件是所述氨基酸序列不包含WO03054184-CAE48421、WO2007131657-CAS91385或NCBI登录号AGS78407。10.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，前提条件是所述吉氏芽孢杆菌-进化枝不包含WO03054184-CAE48421、WO2007131657-CAS91385、WO2008086916-CAV33594或NCBI登录号AGS78407。11.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，其中所述多肽在表面活性剂存在下具有蛋白酶活性。12.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，其中所述蛋白酶活性包括酪蛋白水解活性。13.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，其中所述多肽在8至12的pH范围下保留其最大蛋白酶活性的至少50％。14.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，其中所述多肽在50℃至75℃的温度范围下保留其最大蛋白酶活性的至少50％。15.根据前述权利要求中任一项所述的重组多肽或其活性片段，其中所述多肽在洗涤剂组合物中具有清洁活性。16.根据权利要求15所述的重组多肽，其中所述洗涤剂组合物是自动餐具洗涤用洗涤剂。17.根据权利要求16所述的重组多肽，其中所述清洁活性包括卵黄底物的水解。18.根据权利要求15所述的重组多肽，其中所述洗涤剂组合物是衣物洗涤剂。19.根据权利要求18所述的重组多肽，其中所述衣物洗涤剂是液体衣物洗涤剂。20.根据权利要求18所述的重组多肽，其中所述衣物洗涤剂是粉末衣物洗涤剂。21.根据权利要求18至20中任一项所述的重组多肽，其中所述清洁活性包括选自下列的底物的水解：血液、乳、墨水以及它们的组合。22.一种组合物，包含表面活性剂和权利要求1至21中任一项所述的重组多肽。23.根据权利要求22所述的组合物，其中所述表面活性剂选自非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、两性表面活性剂、半极性非离子表面活性剂以及它们的组合。24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述表面活性剂是离子表面活性剂。25.根据权利要求23所述的组合物，其中所述表面活性剂是非离子表面活性剂。26.根据权利要求21至25中任一项所述的组合物，其中所述组合物是洗涤剂组合物。27.根据权利要求26所述的组合物，其中所述洗涤剂组合物选自衣物洗涤剂、织物软化洗涤剂、餐具洗涤用洗涤剂和硬质表面清洁洗涤剂。28.根据权利要求26至27中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含至少一种钙离子和/或锌离子。29.根据权利要求22至28中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含至少一种稳定剂。30.根据权利要求22至29中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含约0.001重量％至约1.0重量％的所述重组多肽。31.根据权利要求22至30中任一项所述的组合物，还包含至少一种漂白剂。32.根据权利要求22至31中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含磷酸盐。33.根据权利要求22至32中任一项所述的组合物，其中所述组合物含有磷酸盐。34.根据权利要求22至33中任一项所述的组合物，其中所述组合物不含硼酸盐。35.根据权利要求22至33中任一项所述的组合物，其中所述组合物含有硼酸盐。36.根据权利要求22至35中任一项所述的组合物，还包含至少一种助剂成分。37.根据权利要求22至36中任一项所述的组合物，其中所述组合物是颗粒、粉末、固体、棒、液体、片剂、凝胶、糊剂或单位剂量组合物。38.根据权利要求22至37中任一项所述的组合物，还包含一种或多种选自下列的另外的酶或酶衍生物：酰基转移酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-半乳糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、芳基酯酶、β-半乳糖苷酶、卡拉胶酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、软骨素酶、角质酶、内切-β-1,4-葡聚糖酶、内切-β-甘露聚糖酶、酯酶、外切-甘露聚糖酶、半乳聚糖酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、透明质酸酶、角蛋白酶、漆酶、乳糖酶、木质素酶、脂酶、脂氧合酶、甘露聚糖酶、金属蛋白酶、氧化酶、果胶酸裂解酶、果胶乙酰酯酶、果胶酶、戊聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、酚氧化酶、磷酸酶、磷脂酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、普鲁兰酶、还原酶、鼠李半乳糖醛酸酶、β-葡聚糖酶、鞣酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖乙酰酯酶、木聚糖酶、木葡聚糖酶、木糖苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·科尔克曼，R·梅耶达尔，F·格德埃格伯，L·M·巴别，A·H·凯利特史密斯，H·穆尔德，R·R·博特，M·C·斯科特谢尔，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：美国;US