用于增强芽孢杆菌属细胞中蛋白质产生的方法和组合物技术

本公开总体上涉及表达异源目的蛋白的重组微生物细胞。因此，本公开的某些方面尤其涉及具有增强的蛋白质生产能力的重组芽孢杆菌属细胞、新型蛋白质信号序列、编码异源目的蛋白的重组多核苷酸及其相关组合物和/或方法。因此，如本文所举例说明的，本公开的重组芽孢杆菌属细胞特别适合用于在异源蛋白质的表达、生产和分泌中使用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本公开总体上涉及微生物细胞、分子生物学、发酵、蛋白质生产等领域。本公开的某些方面尤其涉及具有增强的蛋白质生产能力的重组芽孢杆菌属(bacillus)细胞。序列表的引用命名为“nb41810-us-psp_sequencelisting.txt”的文本文件序列表的电子提交的内容创建于2022年8月15日，并且大小为192kb，将其通过引用以其全文特此并入。

技术介绍

1、革兰氏阳性细菌如枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)等由于其优异的发酵特性和高产率(例如，高达25克/升培养物；van dijl和hecker,2013)经常被用作用于产生工业相关蛋白质的微生物工厂。例如，芽孢杆菌属物种细胞因其生产食品、纺织品、洗衣、医疗器械清洗、制药工业等所必需的淀粉酶(jensen等人，2000；raul等人，2014)和蛋白酶(brode等人，1996)而被熟知(westers等人，2004)。因为这些非致病性革兰氏阳性细菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种核酸，其编码包含SEQ ID NO:2的信号序列。

2.一种核酸，其编码包含SEQ ID NO:6的信号序列。

3.一种多核苷酸，其包含编码包含SEQ ID NO:2的信号序列的上游(5′)核酸，所述上游核酸可操作地连接到编码目的蛋白(POI)的下游(3′)核酸。

4.一种多核苷酸，其包含编码包含SEQ ID NO:6的信号序列的上游(5′)核酸，所述上游核酸可操作地连接到编码目的蛋白(POI)的下游(3′)核酸。

5.一种多核苷酸，其包含上游(5′)启动子，所述上游启动子可操作地连接到编码包含SEQ ID NO:2的信号序列的下游...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种核酸，其编码包含seq id no:2的信号序列。

2.一种核酸，其编码包含seq id no:6的信号序列。

3.一种多核苷酸，其包含编码包含seq id no:2的信号序列的上游(5′)核酸，所述上游核酸可操作地连接到编码目的蛋白(poi)的下游(3′)核酸。

4.一种多核苷酸，其包含编码包含seq id no:6的信号序列的上游(5′)核酸，所述上游核酸可操作地连接到编码目的蛋白(poi)的下游(3′)核酸。

5.一种多核苷酸，其包含上游(5′)启动子，所述上游启动子可操作地连接到编码包含seq id no:2的信号序列的下游核酸，所述下游核酸可操作地连接到编码目的蛋白(poi)的下游(3′)核酸。

6.一种多核苷酸，其包含上游(5′)启动子序列，所述上游启动子序列可操作地连接到编码包含seq id no:6的信号序列的下游核酸，所述下游核酸可操作地连接到编码目的蛋白(poi)的下游(3′)核酸。

7.如权利要求3-6中任一项所述的多核苷酸，其进一步包含位于编码所述poi的核酸下游(3′)并与其可操作地连接的终止子序列。

8.如权利要求3-7中任一项所述的多核苷酸，其中编码所述poi的核酸编码酶。

9.一种重组芽孢杆菌属(bacillus)细胞，其包含至少一种引入的如权利要求5-7中任一项所述的多核苷酸。

10.一种重组芽孢杆菌属细胞，其包含至少两种引入的如权利要求5-7中任一项所述的多核苷酸。

11.如权利要求9或权利要求10所述的重组芽孢杆菌属细胞，使其缺乏一种或多种天然(内源)基因的产生。

12.一种重组芽孢杆菌属细胞，其表达编码异源目的蛋白(poi)的引入的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含编码包含seq id no:2的信号序列的上游(5′)核酸，所述上游核酸可操作地连接到编码所述poi的下游(3′)核酸。

13.一种重组芽孢杆菌属细胞，其表达至少两种编码异源目的蛋白(poi)的引入的多核苷酸，其中所述引入的多核苷酸包含编码包含seq id no:2的信号序列的、可操作地连接到编码所述poi的下游(3′)核酸的上游(5′)核酸。

14.一种重组芽孢杆菌属细胞，其表达编码异源目的蛋白(poi)的引入的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含编码包含seq id no:6的信号序列的上游(5′)核酸，所述上游核酸可操作地连接到编码所述poi的下游(3′)核酸。

15.一种重组芽孢杆菌属细胞，其表达至少两种编码异源目的蛋白(poi)的引入的多核苷酸，其中所述引入的多核苷酸包含编码包含seq id no:6的信号序列的、可操作地连接到编码所述poi的下游(3′)核酸的上游(5′)核酸。

16.一种重组芽孢杆菌属细胞，其表达至少两种编码异源目的蛋白(poi)的引入的多核苷酸，其中所述第一和第二引入的多核苷酸分别包含编码包含seq id no:2的信号序列的、可操作地连接到编码所述poi的下游(3′)核酸的上游(5′)核酸，以及编码包含seq id no:6的信号序列的、可操作地连接到编码所述poi的下游(3′)核酸的上游(5′)核酸。

17.一种用于在芽孢杆菌属细胞中表达异...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·L·弗里希，W·徐，C·莱夫朗，M·科尔克曼，H·贺，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：