【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞免疫学，具体涉及新型抗体分子及其制药用途。
技术介绍
1、il-17细胞因子家族包括il-17a、il-17b、il-17c、il-17d、il-17e和il-17f，而il-17受体(il-17receptor)家族包括il-17ra、il-17rb、il-17rc、il-17rd和il-17re。其中，il-17a和其受体il-17ra被研究最多，il-17a是参与某些自身免疫性疾病和验证相关性疾病发生发展的促炎细胞因子。il-17a能够促进il-8、il-6、肿瘤坏死椅子(tnf)-α等炎症性因子的分泌，促进内皮细胞粘附分子的产生，从而导致明显的炎症反应。辅助性t细胞17(th17)是一种能够产生il-17的表面抗原分化簇4阳性(cd4+)的t细胞，主要通过分泌白细胞介素(il)-17a参与自身免疫性疾病的发生。
2、单克隆抗体是一种由b细胞产生，它以受体的形式存在于细胞表面，且只能与一种抗原决定簇结合并发生特异性反应，从而使该反应激活的同一淋巴系只能产生针对这一种抗原决定簇的免疫球蛋白。单克隆抗体主要由抗原结合域(fab)和可结晶区域(fc)组成。其中fab可与肿瘤抗原识别后调控相关信号通路，而fc段与表达fc受体的细胞相关作用后介导抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用、补体依赖的细胞毒性作用等效应参与抗肿瘤免疫反应。针对il-17的中和性单克隆抗体与免疫抑制剂或抗炎药物相比，在治疗自身免疫性疾病方面具有更高的特异性和选择性以及更小的副作用和毒性。
3、
4、中国专利cn110582512a中公开了一种针对il-17a和il-17f二者的单克隆抗体及其用途，所述抗体与il-17a和il-17f二者结合并且抑制il-17a和il-17f二者的活性，其中所述抗体包含cdr1h、cdr2h、cdr3h；以及cdr1l、cdr2l和cdr3l。该专利技术还提供所述抗体在制备用于治疗受试者中与il-17a和/或il-17f有关的疾病的药物中的用途，和包含所述抗体的药物组合物。
5、目前单克隆抗体仍然是较多的应用于治疗免疫性疾病，但单克隆抗体存在一定的毒性和副作用会对受试者的身体健康产生影响，并且单克隆由于其结构的原因，制备较为复杂，成本较高。
6、单域抗体(sdab)与传统的单克隆抗体不同，单域抗体没有轻链，其体积较小，呈椭圆形，相对分子质量约为15kda，单域抗体含有4个框架区域，他们形成免疫球蛋白核心结构和3个能与抗原结合的互补决定区。单域抗体的cdr1区n端非常异变，cdr3区较长，平均含有16个氨基酸，增加了vhh的多样性。单域抗体能够识别并结合特殊的抗体表位，并且单域抗体还可以深入识别抗原包裹起来的隐藏表位，达到常规抗体不能达到的区域。单域抗体具有较强的温度和酸碱耐受性，相对于传统的抗体在极端条件下的耐受能力具有较为明显的优势。
7、现有技术中对于il-17a单域抗体的研究较少，因此，开发一种稳定性高、亲和力强、生产成本低的单域抗体类的药物是目前亟需解决的技术问题。
8、本专利技术人致力于抗il-17a抗体开发，基于筛选出的9个单域抗体(已另案申请)，进行进一步的技术开发，获得了12个亲和力、阻断效果和稳定性相对提升的单域抗体组合，基于专利法单一性的相关规定，对12个不同单域抗体组合分别请求保护。
9、本专利技术是针对上述12个单域抗体组合抗体之一所进行的专利申请。
10、本专利技术人还基于以上，开发了基因修饰干细胞技术以及后续的应用技术，基于专利法单一性的相关规定，对3个不同的基因修饰干细胞以及3项不同的应用分别请求保护。
11、为便于理解本专利技术技术方案，可选地参阅本项目其他专利申请文件。
技术实现思路
1、本专利技术的术语和声明：
2、1、如本文所用，术语“氨基酸”：包含天然氨基酸、合成氨基酸、以及以类似于天然氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸在本文中可以由其通常已知的三字母符号或由iupac-iub生物化学命名法委员会(biochemicalnomenclature commission)所推荐的单字母符号来提及。
3、2、如本文所用，术语“抗体”：指特异性结合和识别抗原的包括免疫球蛋白基因的构架区的多肽或其片段。术语抗体的使用意指包含全抗体和其抗原结合片段。术语抗体包含单特异性抗体、双特异性抗体和多特异性抗体，只要其表现所期望的生物活性或功能即可。
4、3、如本文所用，术语“单域抗体(vhh)”、“单域抗体”(singledomain antibody,sdab，或纳米抗体nanobody)具有相同的含义，指克隆抗体重链的可变区，构建仅由一个重链可变区组成的单域抗体，它是具有完整功能的最小的抗原结合片段。通常先获得天然缺失轻链和重链恒定区1(ch1)的抗体后，再克隆抗体重链的可变区，构建仅由一个重链可变区组成的单域抗体(vhh)。
5、4、如本文所用，术语“表位”指抗体的互补位所结合的抗原上的任何抗原决定簇。抗原决定簇通常包含分子的化学活性表面基团，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。例如，表位通常以独特的空间构象包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个连续或非连续的氨基酸，其可以是“线性”表位或“构象”表位。
6、5、如本文所用，术语“氨基酸序列”是指氨基酸相互连接形成肽链(或多肽)的顺序，氨基酸序列只能按照一个方向读取。
7、6、如本文所用，术语“核酸分子”可以是dna形式或rna形式。dna形式包括cdna、基因组dna或人工合成的dna。dna可以是单链的或是双链的。dna可以是编码链或非编码链。本专利技术中的核苷酸分子全长序列或其片段通常可以用pcr扩增法或人工合成的方法获得。
8、7、如本文所用，术语“核苷酸序列”是指dna或rna中碱基的排列顺序，即在dna中为a、t、g、c的排列顺序，或者在mrna中a、u、g、c的排列顺序，也包括rrna、trna、mrna中碱基的排列顺序。
9、8、如本文所用，术语“框架区”即骨架区，在免疫球蛋白的h和l链的近n端约有110个氨基酸序列的变化很大，其他部分的氨基酸序列相对恒定，据此可将轻链和重链区分为可变区(v)和恒定区(c)。可变区内包含超变区hvr或称互补本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，其特征在于：所述抗体包含第一单域抗体和第二单域抗体；
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：通过在SEQID NO:1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：与SEQ IDNO:1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗体，其特征在于，所述第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个重链框架区。
5.根据权利要求4所述的串联单域抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于：所述的抗体包括第一单域抗体和第二单域抗体；
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于：所述HCDR1具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2具有如SEQ ID NO
8.根据权利要求1-7任意一项所述的抗体，其特征在于：所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列通过连接子间接连接；或；直接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于：所述连接子为(GGGGS)n，n选自1、2、3、4、5或6；较佳地，所述连接子为(GGGGS)3。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的抗体，其特征在于：所述的第一单域抗体和第二单域抗体以任选的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从C端到N端的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从N端到C端的顺序连接。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的抗体，其特征在于：所述的抗体为抗IL-17A抗体。
12.一种重组蛋白，其特征在于：所述的重组蛋白包含权利要求1-11任意一项所述的抗体。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白还包含协助其表达和/或分泌，或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于：所述生物活性多肽或其功能片段选自血清白蛋白、His标签、GST标签、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、免疫球蛋白Fc结构域、MBP标签、FLAG标签和SUMO标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于：所述免疫球蛋白Fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.一种药物偶联物，其特征在于：所述的药物偶联物包括：
17.一种抗体制剂，其特征在于：所述的抗体制剂包括：
18.一种试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白或权利要求17所述的抗体制剂；
19.一种分离的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码权利要求1-11中任意一项所述的抗体或权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白。
20.一种表达载体，其特征在于：所述的表达载体包含根据权利要求19所述的核酸分子。
21.一种药物组合物，其特征在于：所述的药物组合物包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白、权利要求16所述的药物偶联物、权利要求17所述的抗体制剂、权利要求19所述的核酸分子或权利要求20所述的表达载体；
22.权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白、权利要求16所述的药物偶联物、权利要求17所述的抗体制剂或权利要求21所述的药物组合物的用途，其特征在于：所述的用途为以下用途中的至少一种：
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于：所述的自身免疫性疾病包括局灶性硬皮病、多发性肌炎、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、皮肌炎、银屑病、过敏性血管炎、特发性无精子症、硬皮病、习惯性流产、纤维肌痛、风湿性多肌痛、巴塞杜病、慢性盘状红斑狼疮、自身免疫性溶血性贫血、白塞氏病、成人斯蒂尔病、系统性红斑狼疮、大血管血管炎、艾迪生病、类风湿关节炎、重...
【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特征在于：所述抗体包含第一单域抗体和第二单域抗体；
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：通过在seqid no:1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：与seq idno:1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗体，其特征在于，所述第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个重链框架区。
5.根据权利要求4所述的串联单域抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于：所述的抗体包括第一单域抗体和第二单域抗体；
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于：所述hcdr1具有如seq id no:1所示的氨基酸序列，所述hcdr2具有如seq id no:2所示的氨基酸序列，所述hcdr3具有如seq id no:3所示的氨基酸序列，所述hcdr4具有如seq id no:4所示的氨基酸序列，所述hcdr5具有如seq id no:5所示的氨基酸序列，所述hcdr6具有如seq id no:6所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的抗体，其特征在于：所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列通过连接子间接连接；或；直接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于：所述连接子为(ggggs)n，n选自1、2、3、4、5或6；较佳地，所述连接子为(ggggs)3。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的抗体，其特征在于：所述的第一单域抗体和第二单域抗体以任选的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从c端到n端的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从n端到c端的顺序连接。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的抗体，其特征在于：所述的抗体为抗il-17a抗体。
12.一种重组蛋白，其特征在于：所述的重组蛋白包含权利要求1-11任意一项所述的抗体。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白还包含协助其表达和/或分泌，或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于：所述生物活性多肽或其功能片段选自血清白蛋白、his标签、gst标签、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、免疫球蛋白fc结构域、mbp标签、flag标签和sumo标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于：所述免疫球蛋白fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.一种药物偶联物，其特征在于：所述的药物偶联物包括：
17.一种抗体制剂，其特征在于：所述的抗体制剂包括：
18.一种试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白或权利要求17所述的抗体制剂；
19.一种分离的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码权利要求1-11中任...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘拥军，刘广洋，李欣，米一，龙浩淼，徐利强，
申请(专利权)人：北京贝来药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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