【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体领域，具体涉及一种用于疾病治疗的新型串联纳米抗体。
技术介绍
1、多价抗体是识别同一种表位的单价抗体的聚合物，比单价抗体具有更高的抗原亲和力；多特异性抗体是识别不同表位的单价抗体的聚合物，能结合不同靶目标或同一靶目标的不同表位，比单价抗体具有更高的抗原识别能力，对比其他单抗、单抗联用，双抗表现出高的有效性、更低的耐药性、新功能赋予的更广的适用范围、以及较单抗联用预期更低的毒性。
2、链错配问题是双特异性抗体药物研发特有的技术难点，也是双抗药物开发最初遇到的挑战之一。天然抗体由四条多肽链组成，分子量较大的两条称为重链(h链)，分子量较小的两条链称为轻链(l链)。在单抗结构中，两条重链和轻链的氨基酸组成完全相同，四条链组合后仅有一种结构。但双抗与单抗不同，双抗研发是通过共表达两条不同的重链和两条不同的轻链，来实现可以同时特异性结合2个不同抗原的目的，因此在四条链组装的过程中，2条重链和2条轻链可随机产生16种可能的结构组合，即便将其中互为镜像的结构合并后，仍然有10种不同的抗体结构，但其中只有一种是目标产物。况且这10种不同双抗产物的生化特性极为相似，因此从中分离出目标产物的难度极大。这种情况在单抗生产中不常见，也是造成双抗产量低、有杂质蛋白、生产成本较高的根本原因。
3、单域抗体只包含一个重链可变区(vhh)和两个常规的ch2与ch3区，却具有非常好的稳定性，不像人工改造的单链抗体片段(scfv)那样容易相互沾粘，甚至聚集成聚体。更重要的是单独克隆并表达出来的vhh结构具有与原重链抗体相当
4、单域抗体因具有结构简单，分子量较小，结构稳定，易于表达等优势，并且单域抗体只含有一个重链可变区，可以避免四聚体制备双抗过程中重链与轻链的错配，实现双功能单域抗体的通用性设计，不需要像传统双抗的复杂的设计和生产工艺，有效克服了双抗药物原本的局限性。
5、il-17a是一种主要由活化的t细胞产生的致炎细胞因子，作用于下游效应细胞介导多种生理过程，如炎症反应、凝血过程和骨重塑等，与机体多种疾病密切相关。il-17a表达过量时将导致脊柱关节炎、类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、银屑病、炎症性肠病等多种疾病的发生发展。对于这类疾病临床可用的特效药物较少，传统治疗存在起效较慢、依从性差等缺点。il-17a缺失或者抗体中和il-17a，可以有效的抑制多种自身免疫病病理程度，但是单抗药物结构复杂、稳定性相对较差，在使用中需要反复大剂量注射才能达到一定的效果。因此，亟需开发一种稳定性高、亲和力强，有望用于自身免疫病诊断和治疗的二价单域抗体类的药物。
6、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种抗il-17a的二价单域抗体，该二价单域抗体是由两个单域抗体通过linker串联而成。该二价抗体制备容易，具有较好的亲和力和阻断效果，稳定性强。
7、本专利技术人致力于抗il-17a抗体开发，基于筛选出的9个单域抗体(已另案申请)，进行进一步的技术开发，获得了12个亲和力、阻断效果和稳定性相对提升的单域抗体组合，基于专利法单一性的相关规定，对12个不同单域抗体组合分别请求保护。
8、本专利技术是针对上述12个单域抗体组合抗体之一所进行的专利申请。
9、本专利技术人还基于以上，开发了基因修饰干细胞技术以及后续的应用技术，基于专利法单一性的相关规定，对3个不同的基因修饰干细胞以及3项不同的应用分别请求保护。
10、为便于理解本申请技术方案，可选地参阅本项目其他专利申请文件。
技术实现思路
1、本专利技术中，单域抗体为其互补决定区是单域多肽的一部分的抗体。因此，单域抗体包含单个互补决定区。单域抗体为仅有重链的抗体，该抗体天然不包含轻链，衍生自常规抗体的单域抗体和工程化抗体。单域抗体可以衍生自任何物种，包括小鼠、人、骆驼、美洲驼、山羊、兔和牛。例如，天然存在的vhh分子可以衍生自骆驼科物种(例如骆驼、单峰骆驼、美洲驼和原驼)提供的抗体。像完整的抗体一样，单域抗体能够选择性地结合特定抗原。单域抗体可以仅含有免疫球蛋白链的可变结构域，该结构域具有cdr1、cdr2和cdr3以及框架区。
2、本专利技术中，抗il-17a的二价单域抗体即抗il-17a的双价单域抗体不仅包括完整的二价单域抗体，还包括所述抗il-17a的二价单域抗体的片段、衍生物和类似物。其中，片段、衍生物和类似物含义相同，均是指基本上保持本专利技术抗体相同的生物学功能或活性的多肽。本专利技术的多肽片段、衍生物或类似物可以是有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与fc标签形成的融合蛋白)。
3、本专利技术中，cdr(complementarity-determining regions，cdr)叫做互补决定区或互补决定簇。它位于免疫球蛋白的超变区，超变区是抗体的抗原结合位，与抗原决定簇的结构互补。一般包括cdr1、cdr2、cdr3。本领域技术人员应当理解的是，除非另有规定，否则术语给定抗体或其区(例如可变区)的“cdr”及“互补决定区”应理解为涵盖如通过本专利技术描述的上述已知方案中的任何一种界定的互补决定区。虽然本公开请求保护的范围是基于imgt定义规则所示出的序列，但是根据其他cdr定义规则所对应的氨基酸序列也应当落在本专利技术的保护范围中。
4、本专利技术中，可变区指免疫球蛋白轻链和重链靠近n端氨基酸序列变化较大的区域称为可变区。
5、本专利技术中，序列同源性表示两个(核苷酸或氨基酸)序列在比对中在相同位置处具有相同残基的程度，并且通常表示为百分数。优选地，同源性在被比较的序列的整体长度上确定。因此，具有完全相同序列的两个拷贝具有100％同源性。在一些实施例中，与前述序列相比仅仅替换一个或少数几个氨基酸的序列，例如，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个保守氨基酸取代，也可以实现专利技术目的。这些变异形式包括但并不限于：一个或多个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在c末端和/或n末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。实际上，在确定两个氨基酸序列之间的序列同源性程度或在确定单域抗体中的cdr1、cdr2和cdr3组合时，技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸取代，在取代情况下，所述取代将优选为保守氨基酸取代。所述保守氨基酸，其通常可以被描述为氨基酸残基被具有相似化学结构的另一个氨基酸残基替代的氨基酸取代，并且该取代对多肽的功能、活性或其它生物学性质几乎没有或基本上没有影本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，其特征在于，所述的抗体包含下述(a)和(b)：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含通过在SEQID NO.1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰或取代中的至少一种方式获得的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含与SEQ IDNO.1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个重链框架区。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于，所述的抗体包含下述(a)和(b)：
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述的HCDR1的氨基酸序为SEQ ID NO.1；所述的HCDR2的氨基酸序列为S
8.根据权利要求1-7任一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列直接连接或通过连接子间接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述的连接子为(GGGGS)n，其中n选自1、2、3、4、5或6；优选地，所述的连接子为(GGGGS)3。
10.根据权利要求1-9任一项所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的连接顺序选自下述(a)-(c)中的一种：
11.根据权利要求1-10任一项所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为抗IL-17A抗体。
12.包含权利要求1-11中任一项所述的抗体的重组蛋白。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白还包含协助其表达和/或分泌，或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于，所述的生物活性多肽或其功能片段选自免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签和SUMO标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于，所述的Fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.包括(a)和(b)的抗体制剂，其特征在于，所述的(a)和(b)为：
17.包括权利要求1-11中任一项所述的抗体或权利要求12-15中任一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂的试剂盒；
18.包括(a)和(b)的药物偶联物，其特征在于，所述的(a)和(b)为：
19.编码权利要求1-11中任一项所述的抗体或权利要求12-15中任一项所述的重组蛋白的分离的核酸分子。
20.包含权利要求19所述的核酸分子的表达载体。
21.包含权利要求1-11中任一项所述的抗体或权利要求12-15中任一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂或权利要求18所述的药物偶联物或权利要求19所述的核酸分子或权利要求20所述的表达载体的药物组合物；
22.权利要求1-11中任一项所述的抗体或权利要求12-15中任一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂或权利要求18所述的药物偶联物或权利要求21所述的药物组合物在下述(a)-(c)用途中的至少一种：
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于，所述的自身免疫性疾病包括白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、恶性类风湿关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、ANCA相关性血管炎、Cogan综合征、RS3PE综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、IgG4相关疾病、格林巴利综合征、重症肌无力、慢性萎缩性胃炎、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、原发性胆汁性肝硬...
【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特征在于，所述的抗体包含下述(a)和(b)：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含通过在seqid no.1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰或取代中的至少一种方式获得的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列包含与seq idno.1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个重链框架区。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于，所述的抗体包含下述(a)和(b)：
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述的hcdr1的氨基酸序为seq id no.1；所述的hcdr2的氨基酸序列为seq id no.2；所述的hcdr3的氨基酸序列为seq id no.3；所述的hcdr4的氨基酸序列为seq id no.4；所述的hcdr5的氨基酸序列为seq id no.5；所述的hcdr6的氨基酸序列为seq id no.6。
8.根据权利要求1-7任一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列直接连接或通过连接子间接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述的连接子为(ggggs)n，其中n选自1、2、3、4、5或6；优选地，所述的连接子为(ggggs)3。
10.根据权利要求1-9任一项所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的连接顺序选自下述(a)-(c)中的一种：
11.根据权利要求1-10任一项所述的抗体，其特征在于，所述的抗体为抗il-17a抗体。
12.包含权利要求1-11中任一项所述的抗体的重组蛋白。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白还包含协助其表达和/或分泌，或延长其在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于，所述的生物活性多肽或其功能片段选自免疫球蛋白fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、his标签、gst标签、mbp标签、flag标签和sumo标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于，所述的fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.包括(a)和(b)的抗体制剂，其特征在于，所述的(a)和(b)为：
17.包括权利要求1-11中任一项所述的抗体或权利要求12-15中任一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂的试剂盒；
18.包括(a)和(b)的药物偶联物，其特征在于，所述的(a)和(b)为：
19.编码权利要求1-11中任一项所述的抗体或权利要求12-15中任一项所述的重组蛋白的分离的核酸分子。
20.包含权利要求19所述的核酸分子的表达载体。
21.包含权利要求1-11中任一项所述的抗体或权利要求12-15中任一项所述的重组蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘广洋，刘拥军，王荷蕊，陈瑶瑶，米一，苗丽，
申请(专利权)人：北京贝来药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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