【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于干细胞，具体涉及基于单域抗体基因修饰的干细胞对于多种的疾病的制药用途。
技术介绍
1、干细胞是未成熟细胞，其未充分分化，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能。干细胞治疗已在糖尿病、帕金森综合征、红斑狼疮、白血病等多种疾病中进行了相应治疗尝试。诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cell，ipsc）的制备技术及其应用，将干细胞治疗带入了一个全新时代。随着分子生物学技术，特别是基因编辑技术的不断发展，基因修饰在干细胞治疗中发挥着越来越重要的作用。
2、干细胞治疗作为一种再生医学技术，旨在用具有特定功能的细胞替代功能异常细胞，恢复相应细胞功能，改善机体健康状态。目前有多种干细胞用于临床， 其中，hsc移植已改善多种免疫系统和血液系统疾病的预后，如先天性免疫缺陷、多发性骨髓瘤、地中海贫血等。研究数据表明，异体hsc的植入可将r/raml（idh1/idh2突变的急性髓系白血病）患者的4年生存率提高至20%~35%。此外，msc因具有一定的免疫调节功能，被用于治疗免疫性疾病，如移植物抗宿主病等，取得了一定疗效。现有技术中已经公开了用于治疗腺苷脱氨酶缺乏性重度联合免疫缺陷病（ada-scid） 的自体hsc药物strimvelis及用于治疗阿尔茨海默病的自体msc药物astrostem。
3、间充质干细胞（mesenchymal stem cell，msc）是一种多能干细胞，是具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞像apsc多能细胞。在胚胎发育
4、il-17为宿主保护粘膜感染的关键细胞因子，也是多种自身免疫和炎症性疾病的主要致病细胞因子和药物靶标。il-17家族包括六个成员：il-17a、il-17b、il-17c、il-17d、il-17e和il-17f，各成员皆通过il-17受体（il-17ra至il-17re）介导其生物学功能。其中研究最多的il-17家族成员是il-17a，其通过与il-17ra和il-17rc结合来促进其生物活性。现有技术已经公开了il-17a在人类疾病中的病理作用的研究最终导致了针对il-17a（il-17a和il-17f、il-17ra或il-23）的单克隆抗体（mab）的开发。
5、研究il-17与干细胞的作用方式的现有技术如公开号为cn105079792a的中国专利申请，其公开了il-17在提高间充质干细胞免疫抑制功能中的应用。具体地本专利技术提供了一种白介素-17、白介素-17的衍生物或其激动剂用于制备制剂或试剂盒的用途，用于提高间充质干细胞的免疫抑制功能；上调间充质干细胞中免疫抑制因子的表达；增强免疫抑制因子的mrna的稳定性；降低rna结合蛋白auf1的表达水平；抑制t细胞的增殖；治疗肝炎或肝损伤。
6、但现有技术中未有公开il-17相关抗体对干细胞的修饰，特别是il-17a特异性串联抗体在干细胞修饰中的作用。本领域需要对修饰干细胞的应用进行深入研究和开发。
7、本专利技术系在上述背景下产生，本专利技术系基于抗il-17a单域抗体开发项目所进行的第四代技术开发。
8、为便于审查，现对研发项目的技术背景进行简要介绍：
9、本专利技术人首先开发出9个单域抗体（已另案申请）；
10、本专利技术人在单域抗体的基础上，开发出由2个单域抗体构成的抗体组合（已另案申请）；
11、本专利技术人在单域抗体的基础上，开发出由抗体组合基因修饰干细胞（已另案申请）；
12、本专利技术人在基因修饰干细胞的基础上，开发出修饰干细胞的应用技术，本专利技术即为该应用技术之一。
13、以上，基于专利法单一性的相关规定，分别进行专利申请。
14、为便于理解本专利技术，可选地参阅本项目其他专利申请文件。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种基于il-17a特异性串联抗体所修饰干细胞的应用。
2、本专利技术基于免疫羊驼进行筛选，得到了多种具有il-17a特异性结合能力的纳米抗体，并选择了其中的两种进行串联，以实现干细胞基因修饰应用。
3、il-17家族共有7个成员，分别被命名为il-17a到il-17f，il-17家族氨基酸序列在c端高度相似，主要由5个在空间上保守的半胱氨酸组。表达il-17最丰富的细胞主要是胸腺依赖的淋巴细胞，包括适应性免疫中的αβt细胞，固有免疫中的γδt细胞， 恒定型自然杀伤t细胞和淋巴组织诱导样细胞（lti-like cells）。il-17家族在宿主抗微生物反应和炎症性疾病的发展过程中扮演着重要角色。il-17促进了调节其各种功能的多种细胞因子的合成和分泌。这些细胞因子包括：趋化因子（如cxcl1、cxcl8和ccl2）；促炎症因子（如il-6、tnf-α和il-1β）；促炎症因子调节因子（如nos和cox）；gm-csf和g-csf生长因子和组织重塑因子（如mmp1，mmp3和rankl）。
4、不论是由固有免疫细胞还是适应性免疫细胞分泌的il-17a和il-17f，其最显著的功能是诱导中性粒细胞向感染部位迁移，il-17a和il-17f的这种功能对微生物的清除至关重要。一些研究表明，上皮和黏膜屏障受到细菌感染过程中诱导产生的il-17a和il-17f在宿主防御中起重要作用。第一个证明il-17介导的宿主防御作用的研究是il-17r缺陷型小鼠的克雷伯氏肺炎肺部感染模型（ye p, et al. requirement of interleukin 17receptor signaling for lung cxc chemokine and granulocyte colony-stimulatingfactor expression, neutrophil recruitment, and host defense. j exp med.2001;194(4):519-527.）。研究使用il-17ra和il-17缺陷型小鼠模型或是使用il-17受体或配体的中和抗体来阻断il-17信号通路，会导致小鼠对各种细胞外或者细胞内细菌感染更加敏感，这些细菌包括沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、链球菌肺炎、结核分枝杆菌、单核细胞增多性李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌和幽门螺杆菌（pappu r, et al. the interleukin-17cytokine family: critical players in host defence and inflammatorydiseases. immunology.本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于单域抗体基因修饰的干细胞在制备药物中的用途，其特征在于，所述的干细胞包含、表达或分泌第一抗体和第二抗体，所述的第一抗体包含序列如SEQ ID NO: 1-3所示的HCDR1、HCDR2、HCDR3；所述的第二抗体包含序列如SEQ ID NO: 4-6所示的HCDR4、HCDR5、HCDR6。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的第一抗体还包括SEQ ID NO:7-10所示的氨基酸序列作为FR区；所述的第二抗体还包括SEQ ID NO:11-14所示的氨基酸序列作为FR区。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的第一抗体和第二抗体直接连接或通过连接子连接。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的连接子选自(GS)n、(GGS)n、(GGGS)n、(GGGGS)n或AS(GGGGS)n，n选自1、2、3、4、5或6。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的干细胞包含、表达或分泌：包括如SEQ ID NO:16-SEQ ID NO:15-SEQ ID NO:17-SEQ ID NO:
6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物用于预防或治疗炎性疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病或肿瘤。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的药物用于预防或治疗炎性疾病。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的药物用于预防或治疗关节炎或银屑病。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的关节炎为类风湿性关节炎、银屑病关节炎或关节滑膜炎。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的药物用于降低炎症因子。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的用途，其特征在于，所述的干细胞为胚胎干细胞、成体干细胞、间充质干细胞、脐带血干细胞、造血干细胞、神经干细胞、脂肪干细胞、皮肤干细胞或肌肉干细胞。
12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述干细胞为间充质干细胞。
13.根据权利要求12所述的用途，其特征在于，所述干细胞分离自脐带血、脐带、胎盘、脂肪组织、皮肤、神经组织、骨髓或胚胎。
14.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物中还包括药学上可接受的辅料。
...【技术特征摘要】
1.一种基于单域抗体基因修饰的干细胞在制备药物中的用途，其特征在于，所述的干细胞包含、表达或分泌第一抗体和第二抗体，所述的第一抗体包含序列如seq id no: 1-3所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3；所述的第二抗体包含序列如seq id no: 4-6所示的hcdr4、hcdr5、hcdr6。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的第一抗体还包括seq id no:7-10所示的氨基酸序列作为fr区；所述的第二抗体还包括seq id no:11-14所示的氨基酸序列作为fr区。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的第一抗体和第二抗体直接连接或通过连接子连接。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的连接子选自(gs)n、(ggs)n、(gggs)n、(ggggs)n或as(ggggs)n，n选自1、2、3、4、5或6。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的干细胞包含、表达或分泌：包括如seq id no:16-seq id no:15-seq id no:17-seq id no: 26所表示的的氨基酸序列的蛋白。
【专利技术属性】
技术研发人员：刘广洋，刘拥军，李欣，张晨亮，徐利强，米一，
申请(专利权)人：北京贝来药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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