【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体，具体涉及纳米抗体的串联分子及其在疾病治疗中的用途。
技术介绍
1、il-17为宿主保护粘膜感染的关键细胞因子，也是多种自身免疫和炎症性疾病的主要致病细胞因子和药物靶标(yao,z.et al.herpesvirus saimiri encodes anewcytokine,il-17,which binds to a novel cytokine receptor.immunity 3,811-821(1995).)。il-17家族包括六个成员：il-17a、il-17b、il-17c、il-17d、il-17e和il-17f，各成员皆通过il-17受体(il-17ra至il-17re)介导其生物学功能。其中研究最多的il-17家族成员是il-17a，其通过与il-17ra和il-17rc结合来促进其生物活性。
2、il-17a的进化是为了调节缺乏适应性免疫系统的无脊椎动物的先天免疫。然而，il-17a的炎症功能最初是在自身免疫性疾病小鼠模型中描述的，其中研究重点在于分泌il-17a的cd4+t细胞-t辅助17(th17)细胞-作为这种细胞因子的关键生产者。现在得知cd8+t细胞，γδt细胞，先天淋巴细胞(ilcs)，自然杀伤(nk)细胞，恒定nk t细胞(invariant nkt cells)，粘膜相关的恒定t细胞(invariant t cells)，肥大细胞(mast cells)和paneth细胞也可以是il-17a的来源。虽然t细胞受体(tcr)活化是cd4+和cd8+t细胞产生il-
3、实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)的研究表明，il-17a是t细胞介导的自身免疫性疾病病理学中的关键致病细胞因子(langrish,c.l.et al.il-23drives a pathogenic tcell population that induces autoimmune inflammation.j.exp.med.201,233-240(2005).；sutton,c.,brereton,c.,keogh,b.,mills,k.h.&lavelle,e.c.a crucial rolefor interleukin(il)-1in the induction of il-17-producing t cells that mediateautoimmune encephalomyelitis.j.exp.med.203,1685-1691(2006).)。随后的研究表明，在eae中，il-17a由th17细胞和分泌il-17a的γδt(γδt17)细胞分泌(sutton,c.e.etal.interleukin-1and il-23induce innate il-17production from gammadelta tcells,amplifying th17responses and autoimmunity.immunity 31,331-341(2009).)。
4、这些研究和其他详细阐述了il-17a在人类疾病中的病理作用的研究最终导致了针对il-17a(il-17a和il-17f、il-17ra或il-23)的单克隆抗体(mab)的开发，可用于治疗某些自身免疫性疾病，特别是牛皮癣，其疗效已超过传统的非甾体类抗炎药和肿瘤坏死因子(tnf)阻断药物(langley,r.g.et al.secukinumab in plaque psoriasis-results oftwo phase 3trials.n.engl.j.med.371,326-338(2014).；reich,k.et al.bimekizumabversus secukinumab in plaque psoriasis.n.engl.j.med.385,142-152(2021).；warren,r.b.et al.bimekizumab versus adalimumab in plaquepsoriasis.n.engl.j.med.385,130-141(2021).)。
5、近几十年来，越来越多的研究发现il-17a在多种癌症的发展中起着重要作用。il-17a在前列腺癌、结直肠癌(crc)、胃癌、乳腺癌、肺癌和肝细胞癌(hcc)组织中高表达，其表达水平与肿瘤进展呈正相关(kryczek i,banerjee m,cheng p,et al.phenotype,distribution,generation,and functional and clinical relevance of th17cells inthe human tumor environments.blood.2009；114(6):1141-1149.)。目前的研究表明，il-17a的高表达分别通过促进肿瘤细胞增殖、胆固醇合成、上皮到间充质细胞转化(emt)、mmps表达、炎症细胞募集到肿瘤组织以及抑制细胞自噬和凋亡来促进肿瘤进展(liao r,sun j,wu h,et al.high expression of il-17and il-17re associate with poor prognosisof hepatocellular carcinoma.j exp clin cancer res.2013；32(1):3.；sun c,kono h,furuya s,et al.interleukin-17a plays a pivotal role in chemically inducedhepatocellular carcinoma in mice.dig dis sci.2016；61(2):474-488.)。
6、中国专利申请202310019497.0公开了一种抗人il-17a蛋白的单克隆抗体、包含该抗体的试剂盒及其在检测人il-17a中的应用。包含所述抗人il-17a蛋白的单克隆抗体检测试剂盒可用于检测人血清中的il-17a。
7、中国专利申请202180041325.2公开了一种稳定的抗il-17a抗体的药物组合物及其在医药上的应用。该药物组合物含有抗il-17a抗体或其抗原结合片段、缓冲液，还可以含有至少一种稳定剂，任选的还可以含有表面活性剂。
8、尽管与化疗药物相比抗体药通常在人体具有良好的疗效和耐受性，然而在临床使用中仍然存在很多治疗相关副作用，例如：鼻咽炎、头痛、恶心和腹泻或者更严重的如感染、心脏毒性和严重的免疫反应等；另外单抗药物结构复杂、稳定性相对较差也导致其需要反复大剂量注射从而达到最佳效果。
9、因此本领域需要更多的高特异性、高稳定性和长效的抗il-17a抗体或il-17a抑制剂用于预防和/或治疗自身免疫性疾病、癌症或炎症疾病等。
10、基于抗il-17a抗体开发筛选出的9个单域抗体(已另案申请)，进行进一步的技术本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，其特征在于，为纳米抗体的串联分子，包含：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，氨基酸序列包含：通过在SEQ ID NO.1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：与SEQ IDNO.1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗体，其特征在于，所述第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个FR区。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于，包括：
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述HCDR1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述HCDR2具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，所述HCDR3具有如SEQ ID
8.根据权利要求1-7任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列直接连接；或；通过连接子间接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述连接子为(GGGGS)n，其中n选自1、2、3、4、5或6；较佳地，所述连接子为(GGGGS)3。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体以任选的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从N端到C端的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从C端到N端的顺序连接。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的抗体，其特征在于，为抗IL-17A抗体。
12.包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体的重组蛋白。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白还包含协助表达和/或分泌，或延长体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签和SUMO标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.一种抗体制剂，其特征在于，其包括：
17.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂；
18.一种药物偶联物，其特征在于，其包括：
19.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-11中任意一项所述的抗体或权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白。
20.包含权利要求19所述核酸分子的表达载体。
21.一种药物组合物，其特征在于，其包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白、权利要求16所述的抗体制剂、权利要求18所述的药物偶联物、权利要求19所述的核酸分子或权利要求20所述的表达载体；
22.权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白、权利要求16所述的抗体制剂、权利要求18所述的药物偶联物或权利要求21所述的药物组合物在以下用途中的至少一种：
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于，所述自身免疫性疾病包括白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、恶性类风湿关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、ANCA相关性血管炎、Cogan综合征、RS3PE综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、IgG4相关疾病、格林巴利综合征、重症肌无...
【技术特征摘要】
1.一种抗体，其特征在于，为纳米抗体的串联分子，包含：
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，氨基酸序列包含：通过在seq id no.1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：与seq idno.1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗体，其特征在于，所述第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个fr区。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于，包括：
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述hcdr1具有如seq id no.1所示的氨基酸序列，所述hcdr2具有如seq id no.2所示的氨基酸序列，所述hcdr3具有如seq id no.3所示的氨基酸序列，所述hcdr4具有如seqid no.4所示的氨基酸序列，所述hcdr5具有如seqid no.5所示的氨基酸序列，所述hcdr6具有如seq id no.6所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列直接连接；或；通过连接子间接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述连接子为(ggggs)n，其中n选自1、2、3、4、5或6；较佳地，所述连接子为(ggggs)3。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体以任选的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从n端到c端的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从c端到n端的顺序连接。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的抗体，其特征在于，为抗il-17a抗体。
12.包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体的重组蛋白。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白还包含协助表达和/或分泌，或延长体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、his标签、gst标签、mbp标签、flag标签和sumo标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.一种抗体制剂，其特征在于，其包括：
17.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂；
18.一种药物偶联物，其特征在于，其包括：
19.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-11中任意一项所述的抗体或权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘广洋，刘拥军，张晨亮，徐利强，周敬文，王道辉，
申请(专利权)人：北京贝来药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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