【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及单域抗体修饰的干细胞及其在疾病治疗中用途。
技术介绍
1、细胞治疗技术是指将人自体或异体细胞经过体外处理，回输人体后治疗或预防疾病的技术，其中体外操作包括细胞在体外的传代、扩增、筛选以及给予药物或其他能改变细胞生物学行为的处理，经过处理的细胞发挥了主要治疗或预防疾病作用。细胞疗法主要包括：一类即以嵌合抗原受体t细胞（简称car-t）（zhao z, chen y, francisco nm, zhangy, wu m. the application of car-t cell therapy in hematological malignancies:advantages and challenges. acta pharm sin b. 2018;8(4):539-551.）、t细胞受体t细胞（简称tcr-t）、嵌合抗原受体自然杀伤细胞（简称car-nk）等为代表的在体外通过基因工程手段改造过的免疫细胞回输疗法，这种疗法也被fda定义为基于细胞的基因疗法；一类则是直接获取后在体外扩增至一定数目便可进行回输的细胞疗法，如使用调节性t细胞（treg）、肿瘤浸润淋巴细胞（til）等治疗方案（guidance for human somatic celltherapy and gene therapy[j]. human gene therapy, 2001, 12(3):303.）；一类则是直接获取后在体外扩增至一定数目便可进行回输的细胞疗法，如使用调节性t细胞（treg）、肿瘤浸润淋巴细胞（til
2、目前的细胞疗法大多存在特异性不强、长效性较强，存在一定的脱靶效应等缺陷。以较为热门的car-t疗法为例，其在血液系统恶性肿瘤取得了一定疗效，但在实体瘤中疗效甚微。
3、干细胞技术与免疫治疗方法的结合产生了一种联合免疫疗法。近年来，科学家们开发了许多治疗性分子，例如双功能多靶点抗体、融合蛋白和溶瘤病毒，并且正在对不同类型的干细胞进行修饰以促进其有效递送。其中将抗体修饰的干细胞用于治疗肿瘤已经取得了一定成效（hu, q. et al. conjugation of haematopoietic stem cells andplatelets decorated with anti-pd-1 antibodies augments anti-leukaemiaefficacy. nat biomed eng2, 831-840 (2018).；cordero a, ramsey md, kanojia d, etal. combination of tucatinib and neural stem cells secreting anti-her2antibody prolongs survival of mice with metastatic brain cancer. proc natl acad sci u s a. 2022;119 (1): e2112491119.）。
4、国际专利申请wous22078320公开了一种修饰的cd117多肽，其包含抑制或减少与抗cd117抗体结合的一个或多个氨基酸修饰。还提供了编码修饰的cd117多肽的核酸，以及其中引入cd117核酸或多肽的细胞，例如造血干细胞，所述造血干细胞可用于例如造血细胞移植。
5、中国专利申请201980070933.9公开了一种或多种修饰的谱系特异性细胞表面抗原的遗传工程化造血细胞，例如造血干细胞（hsc）。在一些实施方案中，对一种或多种修饰的谱系特异性细胞表面蛋白进行修饰，使得谱系特异性细胞表面蛋白的一种或多种在hsc或表达其的后代细胞中至少部分保留其谱系特异性细胞表面抗原的生物学活性，但可逃避对相应野生型谱系特异性细胞表面抗原特异的细胞毒性剂的靶向作用。
6、目前本领域需要更多的修饰干细胞以用于免疫治疗。
技术实现思路
1、单域抗体（single domain antibody，sdab），也称纳米抗体（nanobody，nb)，最早是从骆驼血液中发现的新型抗体，因其只有两条重链，没有轻链，因此也被称为重链单域抗体vhh（variable domain of heavy chain of heavy chain antibody）。纳米抗体晶体直径2.5 nm，长4 nm，只包含一个重链可变区（vhh）和ch2、ch3区，相比于普通的抗体，纳米抗体轻链天然缺失，是自然存在的可以和抗原结合的最小片段。纳米抗体能像其他抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。以该“重链抗体”为基础的纳米抗体不仅分子量只是普通抗体的1/10，临床使用更加安全，而且化学性质也更加灵活、稳定性好、可溶性高、表达容易且容易偶联其他分子。
2、因此，本专利技术选取单域抗体修饰干细胞，并将两个单域抗体串联，以获得更好的技术效果。
3、为了实现上述技术目的，本专利技术特此提出了以下技术方案：
4、在一个方面，本专利技术提供了一种干细胞，所述干细胞包含、表达和/或分泌：
5、（1）第一抗体，所述的第一抗体包含特异性识别il-17a的单域抗体；和
6、（2）第二抗体，所述的第二抗体包含特异性识别il-17a的单域抗体；
7、所述的第一抗体包含序列如seq id no: 1-3所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3；和/或；与seq id no: 1-3所示的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列；
8、所述的第二抗体包含序列如seq id no: 4-6所示的hcdr4、hcdr5、hcdr6；和/或；与seq id no: 4-6所示的氨基酸序列具有至少80%序列一致性的氨基酸序列。
9、其中，seq id no: 1为gedlgyya；
10、seq id no: 2为vtssgsst；
11、seq id no: 3为astillcsdyisafgt；
12、seq id no: 4为gfsihiya；
13、seq id no: 5为itrggvt；
14、seq id no: 6为naggtnggy。
15、在又一个方面，所述干细胞包含、表达和/或分泌：
16、1）第一蛋白，所述的第一蛋白的结构如fr1-hcdr1-fr2-hcdr2-fr3-hcdr3-fr4所示；
17、2）第二蛋白，所述的第二蛋白的结构如fr5-hcdr4-fr6-hcdr5-fr7-hcdr6-fr8所示；
18、所述hcdr1-hcdr6选自seq id no: 1-6所示的氨基酸序列；或；与seq id no: 1-6相比具有1、2、3、4或5个氨基酸差异的氨本文档来自技高网...
【技术保护点】
1. 一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌：
2.一种干细胞，其特征在于，所述干细胞包含、表达和/或分泌：
3. 根据权利要求2所述的干细胞，其特征在于，所述的第一蛋白的序列包含如SEQ IDNO: 16所示的氨基酸序列；和/或
4.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白；
5.根据权利要求4所述的干细胞，其特征在于，所述富含Gly和Ser的组合的肽为例如由重复的GGGGS氨基酸序列组成的序列。
6. 根据权利要求5所述的干细胞，其特征在于，所述融合蛋白包含如SEQ ID NO: 18所示的氨基酸序列。
7. 根据权利要求1-6中任一所述的干细胞，其特征在于，所述HCDR1具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述HCDR2具有如SEQ ID NO: 2所示的氨基酸序列，所述HCDR3具有如SEQ ID NO: 3所示的氨基酸序列，所述HCDR4具有如SEQ ID NO: 4所示的氨基酸序列，所述HCDR5具有如SEQ ID NO: 5所示的氨基酸序列，所
8.根据权利要求7所述的干细胞，其特征在于，所述干细胞包含、表达和/或分泌能够延长所述第一抗体、第二抗体、第一蛋白、第二蛋白或融合蛋白在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
9.根据权利要求8所述的干细胞，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签和SUMO标签中的至少一种。
10.根据权利要求9所述的干细胞，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc结构域为人免疫球蛋白Fc结构域。
11.根据权利要求10所述的干细胞，其特征在于，所述人免疫球蛋白Fc结构域为人IgG1的Fc结构域。
12. 一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含：
13.根据权利要求12所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含：
14. 一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含：编码SEQ ID NO: 18的核苷酸序列。
15.根据权利要求8-14中任一所述的干细胞，其特征在于，所述干细胞选自胚胎干细胞、成体干细胞、间充质干细胞、脐带血干细胞、造血干细胞、神经干细胞、脂肪干细胞、皮肤干细胞或肌肉干细胞。
16.根据权利要求15所述的干细胞，其特征在于，所述干细胞为间充质干细胞。
17.根据权利要求16所述的干细胞，其特征在于，所述干细胞分离自脐带血、脐带、胎盘、脂肪组织、皮肤、神经组织、骨髓或胚胎。
18.一种细胞培养物，其特征在于，所述细胞培养物经权利要求1-17中任一项所述的干细胞培养获得。
19.一种提取物，其特征在于，所述提取物经根据权利要求18所述的细胞培养物提取获得。
20.一种药物组合物，其特征在于，其包含根据权利要求1-17中任一所述的干细胞、权利要求18所述的细胞培养物或权利要求19所述的提取物。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括至少一种药学上可接受的辅料。
22.一种试剂盒，其特征在于，其包括根据权利要求1-17中任一所述的干细胞、权利要求18所述的细胞培养物、权利要求19所述的提取物或权利要求20-21中任一所述的药物组合物。
23.一种权利要求1-17中任一所述的干细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
24.权利要求1-17中任一所述的干细胞、权利要求18所述的细胞培养物、权利要求19所述的提取物或权利要求20-21所述的药物组合物在制备预防和/或治疗炎性疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病和/或肿瘤中的用途。
25.权利要求1-17中任一所述的干细胞、权利要求20所述的细胞培养物、权利要求21所述的提取物或权利要求20-21所述的药物组合物在制备炎性疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、神经系统疾病和/或肿瘤的诊断产品中的用途。
26.根据权利要求24或25所述的用途，其特征在于，所述自身免疫性疾病包括白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、风湿性关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉...
【技术特征摘要】
1. 一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌：
2.一种干细胞，其特征在于，所述干细胞包含、表达和/或分泌：
3. 根据权利要求2所述的干细胞，其特征在于，所述的第一蛋白的序列包含如seq idno: 16所示的氨基酸序列；和/或
4.一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含、表达和/或分泌融合蛋白；
5.根据权利要求4所述的干细胞，其特征在于，所述富含gly和ser的组合的肽为例如由重复的ggggs氨基酸序列组成的序列。
6. 根据权利要求5所述的干细胞，其特征在于，所述融合蛋白包含如seq id no: 18所示的氨基酸序列。
7. 根据权利要求1-6中任一所述的干细胞，其特征在于，所述hcdr1具有如seq id no:1所示的氨基酸序列，所述hcdr2具有如seq id no: 2所示的氨基酸序列，所述hcdr3具有如seq id no: 3所示的氨基酸序列，所述hcdr4具有如seq id no: 4所示的氨基酸序列，所述hcdr5具有如seq id no: 5所示的氨基酸序列，所述hcdr6具有如seq id no: 6所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求7所述的干细胞，其特征在于，所述干细胞包含、表达和/或分泌能够延长所述第一抗体、第二抗体、第一蛋白、第二蛋白或融合蛋白在体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
9.根据权利要求8所述的干细胞，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、his标签、gst标签、mbp标签、flag标签和sumo标签中的至少一种。
10.根据权利要求9所述的干细胞，其特征在于，所述免疫球蛋白fc结构域为人免疫球蛋白fc结构域。
11.根据权利要求10所述的干细胞，其特征在于，所述人免疫球蛋白fc结构域为人igg1的fc结构域。
12. 一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含：
13.根据权利要求12所述的干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含：
14. 一种干细胞，其特征在于，所述的干细胞包含：编码seq id no: 18的核苷酸序列。
15.根据权利要求8-14中任一所述的干细胞，其特征在于，所述干细胞选自胚胎干细胞、成体干细胞、间充质干细胞、脐带血干细胞、造血干细胞、神经干细胞、脂肪干细胞、皮肤干细胞或肌肉干细胞。
16.根据权利要求15所述的干细胞，其特征在于，所述干细胞为间充质干细胞。
17.根据权利要求16所述的干细胞，其特征在于，所述干细胞分离自脐带血、脐带、胎盘、脂肪组织、皮肤、神经组织、骨髓或胚胎。
18.一种细胞培养物，其特征在于，所述细胞培养物经权利要求1-17中任一项所述的干细胞培养获得。
19.一种提取物，其特征在于，所述提取物经根据权利要求18所述的细胞培养物提取获得。
20.一种药物组合物，其特征在于，其包含根据权利要求1-17中任一所述的干细胞、权利要求18所述的细胞培养物或权利要求19所述的提取物。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括至少一种药学上可接受的辅料。
【专利技术属性】
技术研发人员：刘拥军，刘广洋，李欣，王道辉，徐晓丹，李果，
申请(专利权)人：北京贝来药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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