【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体领域，具体涉及抗il-17a的新型纳米抗体。
技术介绍
1、白细胞介素17(interleukin 17，il17)是已发现的30余种白细胞介素之一，按序号排在第17位。il17由cd4+t细胞分泌，能够诱导上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞合成分泌il-6、il-8、g-csf、pge2，促进icam-1的表达。
2、il-17a蛋白最早在啮齿类激活的杂交瘤t细胞中克隆得到，最初也叫做ctla-8，是最早被发现的il-17家族蛋白。il-17a蛋白共包含177个氨基酸，形成两对反向平行的β-折叠，并通过多个二硫键稳定结构。il-17a在cd4+t细胞中表达，并且该蛋白可在成纤维细胞中诱导il-6。il-17a还是t细胞与造血系统交流的主要载体，体内过表达也会导致髓外粒细胞生成。研究发现th17细胞谱系定型独立于stat4、stat6等传统激活通路，即il-17a和il-6等炎症因子并不相同。il-17a在宿主防御各种微生物病原体以及组织炎症中起关键作用，因此，il-17a已成为治疗各种形式的自身免疫和炎性疾病的药物发现的重要靶标。
3、抗体作为能与抗原发生特异性结合的蛋白，可以参与中和目标抗原，当以il-17a蛋白作为目标抗原时，本领域往往通过开发il-17a抗体以实现il-17a蛋白的检测，或通过il-17a抗体治疗以il-17a为靶标的疾病，如前所述的自身免疫病或炎症等等。示例如申请号为cn201910935046.5的中国专利中公开了一种人源化抗人il-17a单克隆抗体的药物组合物。
4、在羊驼外周血液中存在一种天然重链抗体，该抗体只包含一个重链可变区(vhh)和两个常规的ch2与ch3区，单独克隆并表达出来的vhh结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是已知的可结合目标抗原的最小单位，也被称作纳米抗体。通过纳米抗体的思路可以制备分子量更小的il-17a抗体，不同单域抗体串联后获得的串联抗体仍能保证较小分子量，有进一步研究的空间。
5、基于抗il-17a抗体开发筛选出的9个单域抗体(已另案申请)，进行进一步的技术开发，获得了12个亲和力、阻断效果和稳定性相对提升的单域抗体组合，基于专利法单一性的相关规定，对12个不同单域抗体组合分别请求保护。
6、本专利技术是针对上述12个单域抗体组合抗体之一所进行的专利申请。
7、基于以上，还开发了基因修饰干细胞技术以及后续的应用技术，基于专利法单一性的相关规定，对不同的基因修饰干细胞以及不同的应用分别请求保护。
8、为便于理解本专利技术技术方案，可选地参阅本项目其他专利申请文件。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种抗il-17a的新型纳米抗体。
2、需要说明的是，本专利技术通过制备il-17a重组抗原免疫羊驼获得了一系列单域抗体(纳米抗体)，对这一系列的单域抗体进行性能研究后，为了提高单域抗体性能，对其中的部分抗体尝试进行串联，以获得具有更高性能的串联抗体，并由此得到了一系列专利技术构思。
3、基于以上成果，本专利技术选择性地提供了包括两种纳米抗体可变区的il-17a特异性(抗il-17a、il-17a抗性)串联抗体。
4、本文所用的术语“高变区”、“超变区”、“互补决定区”、“hvr”或“cdr”，是指在抗体可变结构域区域中序列上高变和/或形成结构上限定的环(“高变环”)的区域。通常，天然四链抗体包含六个hvr或cdr：三个存在于vh中(h1、h2、h3)，三个存在于vl中(l1、l2、l3)。基于chothia定义规则，示例性cdr(lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2和hcdr3)位于氨基酸残基l26-l32(l1)、l50-l52(l2)、l91-l96(l3)、h26-h32(h1)、h52-h56(h2)和h96-h101(h3)处(chothia等人，j.mol.biol.196:901-917(1987))。基于kabat定义规则，示例性cdr(lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2和hcdr3)位于氨基酸残基l24-l34(l1)、l50-l56(l2)、l89-l97(l3)、h31-h35(h1)、h50-h65(h2)和h95-h102(h3)处(kabat等人，sequences of proteinsofimmunological interest,the fifth edtion,public health service,nationalinstitutes of health,bethesda,md(1991))。基于imgt定义规则，示例性cdr(lcdr1、lcdr2、lcdr3、hcdr1、hcdr2和hcdr3)位于氨基酸残基l27-l32(l1)、l50-l51(l2)、l89-l97(l3)、h26-h33(h1)、h51-h56(h2)和h93-h102(h3)处(honjo,t.和alt,f.w.(1995)immunoglobulin genes.academic press pp.3-443)。本领域人员公知，在本领域中可以通过多种方法来定义抗体的cdr，例如基于序列可变性的kabat定义规则、基于结构环区域位置的chothia定义规则和基于cdr移植的抗体人源化设计的参考工具(参见j molbiol.273:927-48,1997)。本领域技术人员应当理解的是，除非另有规定，否则术语给定抗体或其区(例如可变区)的“cdr”及“互补决定区”应理解为涵盖如通过本专利技术描述的上述已知方案中的任何一种界定的互补决定区。虽然本专利技术保护的范围是基于imgt定义规则所示出的序列，但是根据其他cdr定义规则所对应的氨基酸序列也应当落在本专利技术的保护范围中。
5、本专利技术所涉及的范围是多方面的，包括但不限于以下：
6、第一方面：一种抗体，其包含：
7、(1)第一单域抗体：
8、氨基酸序列包含：如seq id no.1-3所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3；和/或；与seq idno.1-3所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗体，包含第一单域抗体和第二单域抗体，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，氨基酸序列包含：通过在SEQ ID NO.1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：与SEQ IDNO.1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗体，其特征在于，所述第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个FR区。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于，包括：
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述HCDR1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，所述HCDR2具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，所述HCDR3具有如SEQ I
8.根据权利要求1-7任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列直接连接；或；通过连接子间接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述连接子为(GGGGS)n，其中n选自1、2、3、4、5或6；较佳地，所述连接子为(GGGGS)3。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体以任选的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从N端到C端的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从C端到N端的顺序连接。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的抗体，其特征在于，为抗IL-17A抗体。
12.包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体的重组蛋白。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白还包含协助表达和/或分泌，或延长体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白Fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、His标签、GST标签、MBP标签、FLAG标签和SUMO标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.一种抗体制剂，其特征在于，其包括：
17.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂；
18.一种药物偶联物，其特征在于，其包括：
19.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-11中任意一项所述的抗体或权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白。
20.包含权利要求19所述核酸分子的表达载体。
21.一种药物组合物，其特征在于，其包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白、权利要求16所述的抗体制剂、权利要求18所述的药物偶联物、权利要求19所述的核酸分子或权利要求20所述的表达载体；
22.权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白、权利要求16所述的抗体制剂、权利要求18所述的药物偶联物或权利要求21所述的药物组合物在以下用途中的至少一种：
23.根据权利要求22所述的用途，其特征在于，所述自身免疫性疾病包括白塞氏病、系统性红斑狼疮、慢性盘状红斑狼疮、多发性硬化症、系统性硬皮病、进行性系统性硬化症、硬皮病、多发性肌炎、皮肌炎、结节性动脉周围炎、主动脉炎综合征、恶性类风湿关节炎、类风湿关节炎、幼年特发性关节炎、脊椎关节炎、混合性结缔组织病、卡斯尔曼病、干燥综合征、成人斯蒂尔病、血管炎、过敏性肉芽肿性血管炎、过敏性血管炎、类风湿性血管炎、大血管血管炎、ANCA相关性血管炎、Cogan综合征、RS3PE综合征、颞动脉炎、风湿性多肌痛、纤维肌痛、抗磷脂抗体综合征、嗜酸性筋膜炎、IgG4相关疾病、格林巴利综合征、...
【技术特征摘要】
1.一种抗体，包含第一单域抗体和第二单域抗体，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，氨基酸序列包含：通过在seq id no.1-6所示的氨基酸序列上进行添加、缺失、修饰和/或取代中的至少一种方式所得到的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列包含：与seq idno.1-6所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氨基酸差异的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的抗体，其特征在于，所述第一单域抗体或第二单域抗体还包括用于连接重链可变区的至少4个fr区。
5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于，所述重链框架区包含部分或全部选自人源、鼠源、灵长目动物源或骆驼科动物源的抗体重链框架区或其变体；
6.一种抗体，其特征在于，包括：
7.根据权利要求6所述的抗体，其特征在于，所述hcdr1具有如seq id no.1所示的氨基酸序列，所述hcdr2具有如seq id no.2所示的氨基酸序列，所述hcdr3具有如seq id no.3所示的氨基酸序列，所述hcdr4具有如seq id no.4所示的氨基酸序列，所述hcdr5具有如seq id no.5所示的氨基酸序列，所述hcdr6具有如seq id no.6所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体的氨基酸序列直接连接；或；通过连接子间接连接。
9.根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述连接子为(ggggs)n，其中n选自1、2、3、4、5或6；较佳地，所述连接子为(ggggs)3。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的抗体，其特征在于，所述的第一单域抗体和第二单域抗体以任选的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从n端到c端的顺序连接；或；第一单域抗体和第二单域抗体按照从c端到n端的顺序连接。
11.根据权利要求1-10任意一项所述的抗体，其特征在于，为抗il-17a抗体。
12.包含权利要求1-11中任意一项所述的抗体的重组蛋白。
13.根据权利要求12所述的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白还包含协助表达和/或分泌，或延长体内半衰期的生物活性蛋白或其功能片段。
14.根据权利要求13所述的重组蛋白，其特征在于，所述生物活性蛋白或其功能片段选自免疫球蛋白fc结构域、血清白蛋白、白蛋白结合多肽、前白蛋白、羧基末端肽、弹性蛋白样多肽、his标签、gst标签、mbp标签、flag标签和sumo标签中的至少一种。
15.根据权利要求14所述的重组蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白fc结构域源自人抗体、鼠抗体、灵长目动物抗体或骆驼科动物抗体、或其变体；
16.一种抗体制剂，其特征在于，其包括：
17.一种试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-11中任意一项所述的抗体、权利要求12-15中任意一项所述的重组蛋白或权利要求16所述的抗体制剂；
18.一种药物偶联物，其特征在于，其包括：
19.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-11中任意一项所述的抗体或权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘广洋，刘拥军，徐晓丹，米一，苗丽，王道辉，
申请(专利权)人：北京贝来药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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