一种利用重组大肠杆菌表达proteinA蛋白单体的发酵方法技术

本发明专利技术提供了一种利用重组大肠杆菌表达proteinA蛋白单体的发酵方法，所述方法包括重组大肠杆菌为可分泌表达proteinA蛋白的重组大肠杆菌，在发酵加入诱导剂后的0‑8小时保持发酵液pH值为5.0±0.1～7.0±0.1；在加入诱导剂后的8‑17小时保持发酵液pH值为3.5±0.1～4.5±0.1。本发明专利技术方法表达的proteinA蛋白为单体结构，基本不形成二聚体结构蛋白，显著提高下游纯化收率，且菌种目的蛋白分泌表达量明显增加。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种利用重组大肠杆菌表达proteina蛋白单体的发酵方法。

技术介绍

1、目前葡萄球菌proteina(staphylococcal protein a，spa)表达主要利用大肠杆菌表达系统与毕赤酵母表达系统。大肠杆菌因其具有构建相对简单，生长周期短，易于培养等优点成为研究相对成熟的表达宿主。通用电气医疗集团生物工艺研发股份有限公司(下文简称ge公司)于2018年申请了关于重组蛋白proteina基因在大肠杆菌表达系统中的克隆、表达及纯化的专利(cn110831956a)，使用e.coli k12-017作为表达宿主，使用tb培养基补料分批发酵，含60％葡萄糖作为补料，在初始葡萄糖耗尽后按预设模式补入发酵罐中，初始保持溶氧维持30％，搅拌器转速达最大后，通过增加氧浓度将溶氧维持20％。通过25％氨和2m磷酸将ph保持设定值。proteina蛋白产量达15.3g/l，实施例5表明所得proteina蛋白含有二聚体蛋白。

2、也有报道采用毕赤酵母表达proteina蛋白，毕赤酵母可以高效利用甲醇表达外源蛋白，自身分泌蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种利用重组大肠杆菌表达proteinA蛋白单体的发酵方法，其特征在于，所述发酵方法包括：重组大肠杆菌为可分泌表达proteinA蛋白的重组大肠杆菌，在发酵加入诱导剂后的0-8小时保持发酵液pH值为5.0±0.1～7.0±0.1、优选7.0±0.1；在加入诱导剂后的8-17小时保持发酵液pH值为3.5±0.1～4.5±0.1、优选4.0±0.1。

2.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述诱导剂选自IPTG、乳糖、或阿拉伯糖。

3.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵方法为分批发酵。

4.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在...

【技术特征摘要】

1.一种利用重组大肠杆菌表达proteina蛋白单体的发酵方法，其特征在于，所述发酵方法包括：重组大肠杆菌为可分泌表达proteina蛋白的重组大肠杆菌，在发酵加入诱导剂后的0-8小时保持发酵液ph值为5.0±0.1～7.0±0.1、优选7.0±0.1；在加入诱导剂后的8-17小时保持发酵液ph值为3.5±0.1～4.5±0.1、优选4.0±0.1。

2.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述诱导剂选自iptg、乳糖、或阿拉伯糖。

3.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵方法为分批发酵。

4.根据权利要求1所述的发酵方法，其特征在于，所述方法包括表达proteina蛋白单体时使用含氮源的基础培养基。

5.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于，所述基础培养基中，酵母浸粉和酵母蛋白胨的比例为(1-3)∶(1-5)，优选3∶5。

6.根据权利要求5所述的发酵方法，其特征在于，所述基础培养基进一步含有无机盐和碳源，其中所述无机盐选自氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、硫酸镁、或氯化钙中的一种或多种；所述碳源选自甘油。

7.根据权利要求1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：李张万金，屈婉婷，刘合栋，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：联邦生物科技珠海横琴有限公司，
类型：发明
国别省市：