【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对fcγrⅲa的选择性结合力得到提高的糖基化fc变体。
技术介绍
1、随着基因重组、细胞培养等生命工学技术在全世界的发展，有关蛋白质的结构和功能的研究也随之发展，这不仅提高对生命现象的理解，也在查明各种疾病的发病机理方面起到决定性作用，为疾病的诊断和治疗铺设有效的途径，从而大幅提高生活质量。尤其，随着1975年开发出通过融合b细胞(b cell)与骨髓瘤细胞(myeloma cell)来生产单克隆抗体的杂交瘤技术(hybridoma technology)(kohler and milstein,nature,256:495-497,1975)，在癌症、自身免疫疾病、炎症、心血管疾病、感染等临床领域中，有关利用治疗用抗体的免疫治疗(immunotherapy)的研究开发也随之活跃起来。
2、抗体提供体液免疫系统与细胞免疫系统之间的桥梁，与抗体的fab区识别抗原相反，fc结构域部分与对于所有通过免疫活性细胞有差别地表达的细胞上的抗体(免疫球蛋白)的受体(fc受体或fcr)结合。抗体的fc区上的fc受体结合部位与细胞上的fc受体(fcr)结合，从而通过fc区与细胞结合，当抗体与细胞表面上的fc受体结合时，触发包括抗体-包被粒子的吞噬及破坏、免疫复合物的去除、通过杀伤细胞的抗体-包被靶向细胞的溶解(抗体依赖细胞介导的细胞毒作用，antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity或adcc)、炎症介质的释放、胎盘移动及免疫球蛋白生成的控制在内的重要且多样的多种生物学反应(
3、与现有的低分子药物相比，治疗用抗体对靶标示出非常高的特异性，不仅生物体毒性低且副作用低，还具有约3周的优秀的血中半衰期，因此被认为是最为有效的癌症治疗方法之一。实际上，全世界的大型制药企业和研究所正加紧通过与包括癌症发病因子在内的癌细胞特异性结合来有效去除癌细胞的治疗用抗体的研究开发的步伐。治疗用抗体药品的开发主要在罗氏公司、安进公司、强生公司、雅培公司、bms公司等制药企业中进行，尤其是罗氏公司依靠以抗癌治疗为目的赫赛汀(herceptin)、阿瓦斯汀(avastin)、利妥昔单抗(rituxan)等三种代表性的治疗用抗体于2012年在世界市场实现约195亿美元的销售额等，创造了极大的利润，不仅如此，还引领着世界的抗体药品市场。开发出类克(remicade)的强生公司也因销售的增加而在世界抗体市场中快速成长起来，已知雅培公司和bms公司等制药企业也保有大多数已到开发最后阶段的治疗用抗体。由此带来的结果就是曾在世界制药市场占主导地位的低分子药品正快速被对疾病目标具有特异性且副作用低的包括治疗用抗体在内的生物药品取代。
4、现在，作为药品的抗体的作用有与抗原结合来抑制抗原的作用的直接的方式以及通过与抗原结合的抗体的fcγ部位和具有fcγ受体(fc gamma receptor，fcgr)的效应细胞(自然杀伤细胞、巨噬细胞等)来间接去除抗原的方式。最近开发中的抗体治疗剂在通过与抗原的结合来抑制抗原作用的同时，通过效应细胞识别抗体的fcγ部位来攻击及去除的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用机制进一步提高药剂的效果。据最近有关抗体依赖细胞介导的细胞毒作用的研究，查明fcγ与fcγ受体的结合力受fcγ部位受体的基因型的影响，据多数发表的研究，基于抗体的治疗剂的效率随作为患者的fcγ受体的fcgr2a蛋白(fcγrⅲa)的第131位氨基酸和fcgr3a蛋白的第158位氨基酸的氨基酸序列的多样性而不同。作为一例，据2008年穆索利诺(musolino)的研究报告，在临床前研究中，作为乳腺癌治疗剂的曲妥珠单抗(trastuzumab)在fcgr2a131h/h或fcgr3a158v/v基因型中的抗体依赖性细胞毒性表现出显著差异并增加。然而，虽然通过哺乳动物抗体的fc部位的变形来增加对特定fc受体的结合力，但由于仍保持对其他fc受体的结合力，因此仍具有保持所不希望的免疫反应的问题。人类的5种主要fcγr中的4种诱导免疫激活或炎症反应，而fcγrⅱb诱导免疫抑制或抗炎反应，但大部分自然生成的抗体或重组的糖基化抗体与激活及抑制的fc受体都结合。通过抗体依赖细胞介导的细胞毒作用最大程度地诱导治疗用igg抗体的癌细胞杀灭功效的免疫细胞为自然杀伤细胞(nk细胞)，与其他免疫细胞(例如，单核细胞(monocytes)、巨噬细胞(macrophages)、树突状细胞(dendritic cells)等)不同，nk细胞的表面表达fcγrⅲa而不表达fcγri、fcγrⅱa、fcγrⅱb及fcγrⅲb，因此，为了使癌细胞杀灭作用机制最大化，需要通过igg抗体的fc部位的最优化来提高与nk细胞表面表达的fcγrⅲa的亲和力。并且，不仅是nk细胞，考虑到存在于血液中的多种免疫细胞的复合的免疫反应，由于抗体的fc结构域的与激活fcγr结合的能力(a)比与抑制的fcγrⅱb结合的能力(i)的比例(a/iratio)越高表现出越优秀的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用诱导能力，因此，选择性地提高相对于作为抑制受体的fcγrⅱb的与激活受体的结合力尤为迫切(boruchov et al,jclin invest,115(10):2914-23,2005)。但是，由于fcγrⅱb与激活的fcγr具有96％的同源性，通过向糖基化抗体导入基因突变来增加a/i比例(ratio)的努力很难有大的成果。
技术实现思路
1、技术问题
2、本专利技术的目的在于，提供新型人类抗体fc结构域变体。
3、并且，本专利技术的目的在于，提供对特定fcγ受体具有特异性的糖基化抗体或具有其免疫活性的片段。
4、并且，本专利技术的目的在于，提供编码上述fc结构域变体、上述抗体或具有其免疫活性的片段的核酸分子、包含上述核酸分子的载体以及包含上述核酸分子的宿主细胞。
5、并且，本专利技术的目的在于，提供用于预防或治疗癌症的药物组合物。
6、并且，本专利技术的目的在于，提供人类抗体fc结构域变体的制备方法。
7、并且，本专利技术的目的在于，提供对fcγrⅲa的选择性结合力得到提高的糖基化抗体的制备方法。
8、并且，本专利技术的目的在于，提供抗体或具有其免疫活性的片段在制备抗体治疗剂中的用本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人类抗体Fc结构域变体，其特征在于，在野生型人类抗体Fc结构域中，选自由根据Kabat编号系统编号的224、243、247、292、300、303、305、330、332、339、356及387位置的氨基酸组成的组中的一个以上位置的氨基酸被与野生型氨基酸不同的序列取代。
2.根据权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体，其特征在于，包含选自由H224R、F243L、P247I、R292P、Y300L、V303I、V305I、A330L、I332E、A339Q、D356G及P387Q组成的组中的一种以上的氨基酸取代。
3.根据权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体，其特征在于，包含F243L、P247I、R292P、Y300L、V305I、A330L、I332E、A339Q及P387Q的氨基酸取代。
4.根据权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体，其特征在于，包含H224R、F243L、P247I、R292P、Y300L、V303I、V305I、A330L、I332E、A339Q及P387Q的氨基酸取代。
5.根据权利要求1所述
6.根据权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体，其特征在于，与野生型Fc结构域相比，提高与FcγRⅢa的结合力。
7.根据权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体，其特征在于，与野生型Fc结构域相比，减少与FcγRⅡb的结合力。
8.根据权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体，其特征在于，具有提高的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用诱导能力。
9.一种抗体或具有其免疫活性的片段，其特征在于，包含权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体。
10.根据权利要求9所述的抗体或具有其免疫活性的片段，其特征在于，上述抗体为糖基化抗体。
11.根据权利要求9所述的抗体或具有其免疫活性的片段，其特征在于，包含：
12.一种核酸分子，其特征在于，编码权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体或权利要求9所述的抗体或具有其免疫活性的片段。
13.一种载体，其特征在于，包含权利要求12所述的核酸分子。
14.一种宿主细胞，其特征在于，包含权利要求13所述的载体。
15.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体或权利要求9所述的抗体或具有其免疫活性的片段作为有效成分。
16.根据权利要求15所述的用于预防或治疗癌症的药物组合物，其特征在于，癌症为选自由脑肿瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、非小细胞肺癌、口腔癌、肝癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、宫颈癌、卵巢癌、大肠癌、小肠癌、直肠癌、输卵管癌、肛周癌、子宫内膜癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食管癌、淋巴结癌、膀胱癌、胆囊癌、内分泌腺癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉芽肿、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、慢性或剂型白血病、淋巴细胞淋巴瘤、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、脊髓肿瘤、脑干胶质瘤及脑垂体腺瘤组成的组中的任一种。
17.一种人类抗体Fc结构域变体的制备方法，上述人类抗体Fc结构域变体对FcγRⅢa的选择性结合力得到提高，其特征在于，包括：
18.一种糖基化抗体的制备方法，上述糖基化抗体对FcγRⅢa的选择性结合力得到提高，其特征在于，包括：
19.一种包含权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体的抗体或具有其免疫活性的片段在制备抗体治疗剂中的用途。
20.一种包含权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体的抗体或具有其免疫活性的片段在预防或治疗癌症中的用途。
21.一种癌症治疗方法，其特征在于，包括以药学上有效的量向患有癌症的个体给药包含权利要求1所述的人类抗体Fc结构域变体的抗体或具有其免疫活性的片段的步骤。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种人类抗体fc结构域变体，其特征在于，在野生型人类抗体fc结构域中，选自由根据kabat编号系统编号的224、243、247、292、300、303、305、330、332、339、356及387位置的氨基酸组成的组中的一个以上位置的氨基酸被与野生型氨基酸不同的序列取代。
2.根据权利要求1所述的人类抗体fc结构域变体，其特征在于，包含选自由h224r、f243l、p247i、r292p、y300l、v303i、v305i、a330l、i332e、a339q、d356g及p387q组成的组中的一种以上的氨基酸取代。
3.根据权利要求1所述的人类抗体fc结构域变体，其特征在于，包含f243l、p247i、r292p、y300l、v305i、a330l、i332e、a339q及p387q的氨基酸取代。
4.根据权利要求1所述的人类抗体fc结构域变体，其特征在于，包含h224r、f243l、p247i、r292p、y300l、v303i、v305i、a330l、i332e、a339q及p387q的氨基酸取代。
5.根据权利要求1所述的人类抗体fc结构域变体，其特征在于，包含f243l、p247i、r292p、y300l、v305i、a330l、i332e、a339q、d356g及p387q的氨基酸取代。
6.根据权利要求1所述的人类抗体fc结构域变体，其特征在于，与野生型fc结构域相比，提高与fcγrⅲa的结合力。
7.根据权利要求1所述的人类抗体fc结构域变体，其特征在于，与野生型fc结构域相比，减少与fcγrⅱb的结合力。
8.根据权利要求1所述的人类抗体fc结构域变体，其特征在于，具有提高的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用诱导能力。
9.一种抗体或具有其免疫活性的片段，其特征在于，包含权利要求1所述的人类抗体fc结构域变体。
10.根据权利要求9所述的抗体或具有其免疫活性的片段，其特征在于，上述抗体为糖基化抗体。
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【专利技术属性】
技术研发人员：郑相泽，曹美京，金修延，
申请(专利权)人：高丽大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：
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