包含丝氨酸蛋白酶变体的组合物和方法技术

本发明专利技术提供丝氨酸蛋白酶变体，更具体而言为由其产生的枯草杆菌蛋白酶变体。具体而言，本发明专利技术提供与参考丝氨酸蛋白酶相比具有一个或多个置换的丝氨酸蛋白酶变体，更具体而言为枯草杆菌蛋白酶变体。另外，本发明专利技术提供包含这些丝氨酸蛋白酶变体，更具体而言枯草杆菌蛋白酶变体的组合物。在一些实施例中，本发明专利技术提供包含这些丝氨酸蛋白酶变体、更具体而言枯草杆菌蛋白酶变体中的至少一者的清洁组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供丝氨酸蛋白酶变体，更具体而言为由其产生的枯草杆菌蛋白酶变体。具体而言，本专利技术提供与参考丝氨酸蛋白酶相比具有一个或多个置换的丝氨酸蛋白酶变体，更具体而言为枯草杆菌蛋白酶变体。另外，本专利技术提供包含这些丝氨酸蛋白酶变体，更具体而言枯草杆菌蛋白酶变体的组合物。在一些实施例中，本专利技术提供包含这些丝氨酸蛋白酶变体、更具体而言枯草杆菌蛋白酶变体中的至少一者的清洁组合物。【专利说明】
本专利技术提供丝氨酸蛋白酶变体。具体而言，本专利技术提供与参考丝氨酸蛋白酶相比具有一个或多个置换的丝氨酸蛋白酶变体。此外，本专利技术提供包含这些丝氨酸蛋白酶变体的组合物。在一些实施例中，本专利技术提供包含这些丝氨酸蛋白酶变体(更具体而言是枯草杆菌蛋白酶变体)中的至少一者的清洁组合物。专利技术背景尽管丝氨酸蛋白酶在工业酶领域中已久为人所知，但对于适于特定条件和用途的工程蛋白酶仍存在需要。
技术实现思路
在一些实施例中，本专利技术包括分离的枯草杆菌蛋白酶变体，其中所述枯草杆菌蛋白酶变体为具有蛋白水解活性的成熟形式并且具有包含氨基酸置换的组合的氨基酸序列，所述氨基酸置换处于选自列表1-19的位置，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是根据SEQ ID NO:1中所示解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中的对应氨基酸位置的编号方式进行编号。在一些实施例中，本专利技术包括迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶的分离的枯草杆菌蛋白酶变体，其中所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶具有SEQ ID NO: 2中所示的氨基酸序列，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体与SEQID NO:2具有至少80%的氨基酸序列同一性且具有蛋白水解活性并且具有包含氨基酸置换的组合的氨基酸序列，所述氨基酸置换选自列表1-19，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是根据SEQ ID NO:1中所示解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中的对应氨基酸位置的编号方式进行编号。在一些实施例中，本专利技术包括编码分离的枯草杆菌蛋白酶变体的核酸，其中所述枯草杆菌蛋白酶变体为具有蛋白水解活性的成熟形式并且具有包含氨基酸置换的组合的氨基酸序列，所述氨基酸置换处于选自列表1-19的位置，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是根据SEQ ID NO:1中所示解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中的对应氨基酸位置的编号方式进行编号。在一些实施例中，本专利技术为用于产生上述变体任一者的表达载体、宿主细胞或方法。在一些实施例中，本专利技术包括编码迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶的分离的枯草杆菌蛋白酶变体的核酸，其中所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少80%的氨基酸序列同一性且具有蛋白水解活性并且具有包含氨基酸置换的组合的氨基酸序列，所述氨基酸置换选自列表1-19，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置是根据SEQ ID NO:1中所示解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中的对应氨基酸位置的编号方式进行编号。在一些实施例中，本专利技术为用于产生上述变体任一者的表达载体、宿主细胞或方法。在上文所列的每个实施例中，与具有SEQ ID NO:2中所示氨基酸序列的GG36蛋白酶相比，所述变体可具有改善的清洁性。在一些实施例中，本专利技术包括上述变体或编码所述变体的核酸中的任一者，其中所述变体的总净电荷相对于迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶的总净电荷为O、+1、+2、+3、+4、+5、-1、-2、-3、-4 或-5。在一些实施例中，本专利技术包括具有上文所列变体中的至少一者的组合物，其中所述组合物不是织物和家庭护理产品。在一些实施例中，本专利技术为使用上述组合物的清洁方法。【专利附图】【附图说明】图1提供了包括BPN’ (SEQ ID NO:1)和GG36 (SEQ ID NO:2)在内的成熟参考蛋白酶的比对。每种蛋白酶变体(更具体而言,本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体,包括每种冷水蛋白酶变体)的每个氨基酸位置均根据如图1中所显示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’ (SEQ ID NO:1)的氨基酸序列中的对应氨基酸位置的编号方式进行编号，如通过将所述蛋白酶变体氨基酸序列与解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列进行比对所确定的。因而，除非本文另外指明，否则置换位置是以与BPN’的关系给出。【具体实施方式】本专利技术提供丝氨酸蛋白酶变体，更具体而言枯草杆菌蛋白酶变体。具体而言，本专利技术提供与参考丝氨酸蛋白酶 相比具有一个或多个置换的丝氨酸蛋白酶变体，更具体而言枯草杆菌蛋白酶变体。另外，本专利技术提供包含这些丝氨酸蛋白酶变体(更具体而言，枯草杆菌蛋白酶变体)的组合物。在一些实施例中，本专利技术提供包含这些丝氨酸蛋白酶变体(更具体而言是枯草杆菌蛋白酶变体)中的至少一者的清洁组合物。定义除非另外指明，否则本专利技术的实施涉及处于本领域技术范围内的常用于分子生物学、蛋白质工程改造、微生物学和重组DNA的常规技术。这类技术是本领域技术人员已知的并描述于本领域技术人员众所周知的许多文章和参考著作中。将本文提及的所有专利、专利申请、文章和出版物，包括上文中和下文中的，都特此明确地以引用的方式并入本文。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本专利技术所属领域普通技术人员所一般理解的含义相同的含义。许多技术词典是本领域技术人员已知的。尽管与本文描述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料均可用于本专利技术的实施，但还是在本文中描述了一些合适的方法和材料。相应地，通过整体参考本说明书来更完整地描述接下来定义的术语。另外，如本文所用，除非上下文明确指明，否则单数术语“一”、“一个”和“所述”包括复数含义。数值范围包括限定该范围的数值。除非另外指明，否则分别地，核酸从左至右以5'至3'取向写出；氨基酸序列从左至右以氨基至羧基取向写出。应当理解，本专利技术不限于所描述的具体方法学、方案和试剂，因为这些方面可根据本领域技术人员使用它们的背景而有所变化。除非另外指明，否则本专利技术的实施可采用蛋白质纯化、分子生物学、微生物学、重组DNA技术以及蛋白质测序的常规技术，所有这些均在本领域技术人员的技能之内。此外，本文提供的标题并是对本专利技术的各个方面或实施例的限制，这些方面或实施例都可以通过整体参考说明书而获取。因此，通过整体参考本说明书可更完全地限定下文定义的术语。尽管如此，为了便于理解本专利技术，将多个术语定义如下。如本文所用，术语“蛋白酶”和“朊酶”是指具有分解其他蛋白质的能力的酶蛋白。蛋白酶具有进行“蛋白水解”的能力，其通过水解在形成该蛋白质的肽或多肽链中将氨基酸连接在一起的肽键而开始蛋白质分解代谢。蛋白酶作为蛋白质消化酶的这种活性称为“蛋白水解活性”。存在许多众所周知的用于测量蛋白水解活性的方法(参见例如，Kalisz, “Microbial Proteinases (微生物蛋白酶)”，载于:Fiechter (编辑)，Advances in Biochemical Eng本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·S·阿明，K·奥古斯汀，J·R·巴斯勒，L·G·卡斯康佩雷拉，K·D·科利尔，E·M·孔卡，D·A·埃斯特尔，J·T·小凯利斯，E·J·马格尼斯，A·比萨奇科，A·J·保罗斯，P·F·苏特，G·S·沃德，J·姚，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，宝洁公司，
类型：
国别省市：