本发明专利技术涉及一种运用二维中心切割技术鉴定复方感冒药中强制降解产物的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法。其步骤为：在第一维色谱中使用质谱不兼容流动相对样品进行分离；通过一维检测器采集紫外数据；确定目标峰，进行中心切割，使目标峰存于定量环中；二维体系使用质谱兼容性流动相，通过阀切换将目标峰反冲至二维体系中，进入二维紫外及质谱检测器中完成杂质分析和鉴定。本发明专利技术不改变原分离条件，对杂质检测具有较高的专属性、准确度以及分辨率，提高了非挥发性缓冲盐分离体系杂质质谱分析及鉴定的可靠性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学领域，具体地说，涉及鉴定复方感冒药中降解产物的方法。
技术介绍
杂质研究与控制是药品质量控制的核心内容之一，药品在临床使用中产生的不良反应往往与产品中的杂质有关，因此杂质研究及控制是药品安全保证的关键要素，也是药品研发中风险控制意识的重要体现。通过药物的强制降解实验，利用液质技术对降解产物的结构进行解析，推测杂质的结构，并对可能的来源进行分析，为药物的杂质控制和工艺优化提供重要参考。目前，液相色谱-质谱技术(liquidchromatography-massspectrometry,LC/MS)因其卓越的灵敏度、高选择性和快速的特点已成为药品有关物质分析的首选技术。对于成分复杂的药物，使用LC/MS技术可以不经分离和纯化步骤即可获得样品的色谱和质谱信息。多级质谱和高分辨质谱技术的发展和应用，能够在线获得丰富的化合物片段信息和分子组成信息，为药物中有关物质的结构鉴定提供了快速、灵敏、准确的方法。然而在各国药典中，有很多药品的有关物质检测项下使用的是离子对试剂、磷酸盐缓冲试剂等不挥发性的缓冲盐。虽然磷酸盐及离子对试剂会对杂质的保留以及峰形有很好的作用，但对化合物的鉴定带来了困难。LC/MS是杂质鉴定最常用的方法，如果流动相中使用了不挥发性的盐类，如磷酸盐、离子对试剂等，会极大降低质谱的灵敏度，污染质谱。所以，将这类流动相统称为质谱不兼容流动相。中心切割技术，可有效解决在使用质谱不兼容流动相时鉴定杂质的问题。即在一维体系中，使用质谱不兼容流动相对化合物进行分离，在二维体系中使用质谱兼容型流动相连接质谱检测器。通过软件控制阀切换，使一维体系中感兴趣的组分切入二维体系中，再进行杂质鉴定。复方感冒药-布洛肾素那敏片(AdvilAllergyandCongestionReliefTablet)是由惠氏公司开发的新复方制剂，其含主药成分布洛芬、盐酸去氧肾上腺素以及马来酸氯苯那敏，2011年末首次在美国获批上市，暂未在国内上市销售。本品可迅速缓解普通感冒、上呼吸道过敏引起的相关症状。目前，对此复方制剂并没有公开的杂质检测方法，我们结合三个药物的性质及强制降解试验中杂质的分离情况，开发了适用于这三种药物杂质检测的液相分离分析方法。然而，此种方法中需要加入磷酸盐、三乙胺等质谱不兼容性缓冲盐从而保证获得较高的分离度以及保持较好的峰形，这对于杂质的定性检测则产生了极大的困难。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决利用液质对杂质进行鉴定时使用非挥发性缓冲盐体系流动相对其造成的污染和干扰的难题，涉及一种基于二维中心切割技术鉴定复方感冒药中降解产物的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种基于二维中心切割技术鉴定复方感冒药中降解产物的高效液相色谱-飞行时间质谱联用方法，包括步骤：在第一维色谱中使用质谱不兼容流动相对样品进行分离；通过一维检测器采集紫外数据，确定目标峰，进行中心切割，使目标峰存于定量环中；二维体系使用质谱兼容性流动相，通过阀切换将目标峰反冲至二维体系中，进入二维紫外及质谱检测器中完成杂质分析和鉴定。优选地，本专利技术方法包括下述具体步骤：1)样品的制备：复方感冒药经过氧化破坏处理：a.布洛芬氧化样品的制备：取复方感冒药适量(约相当于布洛芬200mg)，加乙腈10ml，超声使溶解，过滤，加30％过氧化氢10ml，置80℃水浴1小时，取出，放冷，转移至100ml量瓶中，定容，摇匀，滤过，待进样。b.盐酸去氧肾上腺素及马来酸氯苯那敏氧化样品的制备：取复方感冒药适量(约相当于盐酸去氧肾上腺素10mg及马来酸氯苯那敏4mg)，加20％乙腈-水溶剂10ml，超声使溶解，摇匀加30％的过氧化氢5ml，置80℃水浴30分钟，取出，放冷，转移至25ml量瓶中，定容，摇匀，过滤，待进样。2)一维高效液相色谱检测：将步骤1)制备的氧化破坏样品分别进样，在泵I的驱动下，样品通过第一维色谱柱进行分离，并通过检测器I，观察流出组分的特征，选定目标组分；3)捕集目标峰：通过阀切换，将一维色谱图中目标峰切出，捕集至切换阀定量环中；4)二维高效液相色谱-质谱检测：进行阀切换，在泵II的驱动下，将定量环中的目标物通过二维质谱兼容性流动相反冲至二维色谱柱中，采用梯度洗脱方式进行脱盐，脱盐时流路通过检测器II进废液。经过适当的时间脱盐后，再将流路从废液切换进质谱，采集目标物的紫外及质谱数据；5)质谱检测以ESI为离子源，电离模式为正离子模式以及选择AutoMS/MS功能同时获取目标物的一级以及二级质谱数据，进而借助仪器自带MSC软件进行结构推测和鉴定。上述方法中，中心切割一维液相色谱质谱分析条件为：a.布洛芬一维色谱测定条件为：高效液相色谱：HPLC，Agilent1260；色谱柱：WatersBEHC183.5um4.6*150mm；梯度洗脱条件：流动相A：0.02mol/L磷酸二氢钠(用磷酸调节pH至3.0)-乙腈(83.5：16.5)；流动相B：0.02mol/L磷酸二氢钠(用磷酸调节pH至3.0)-乙腈(16.5：83.5)；线性梯度：检测波长：214nm；流速：1.4ml/分钟；柱温：35℃；进样体积：20ul。b.马来酸氯苯那敏及盐酸去氧肾上腺素一维色谱测定条件为：高效液相色谱：HPLC，Agilent1260；色谱柱：Watersspherisorb5umSCX,4.6*150mm；流动相A：0.075mol/L磷酸氢二钠(含0.1％三乙胺，用磷酸调节pH至2.4)；流动相B:乙腈；线性梯度：检测波长：215nm；流速：1.0ml/分钟；柱温：35℃；进样体积：20ul。c.二维高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱条件为：超高效液相色谱：UHPLC,Agilent1290；色谱柱：AgilentZORBAXExtend-C181.8um,2.1*50mm；流动相A:加入甲酸的水；B：加入甲酸的乙腈；流动相梯度：T1及T2根据需要设定；检测波长：215nm；流速：0.3ml/分钟；柱温：35℃；质谱仪：Q-TOFG6540BAgilent；离子源：ESI+电离源；喷雾电压：3.5～4kV，雾化器流量：11L/min，去溶剂气温度：350℃，离子源气压：45psi，驱簇电压：120V，碰撞能量：35±15ev，MS扫描范围：100-1000m/z，MS/MS扫描范围：50-800m/z。本专利技术的优点在于：通过中心切割二维液相色谱质谱联用，可有效解决复方感冒药在一维液相色谱分离时使用质谱不兼容流动相时鉴定杂质的难题。即在一维体系中，使用质谱不兼容流动相对化合物进行分离，在二维体系中使用质谱兼容型流动相，二维体系连接质谱检测器。通过软件控制阀切换，使一维体系中感兴趣的组分切入二维体系中，再进一步进行杂质鉴定。本专利技术提高了质谱鉴定复方感冒药中降解杂质的准确性和可靠性，克服了质谱在使用磷酸盐、三乙胺等非挥发性缓冲盐流动相时对其造成污染和干扰的困难。附图说明图1为马来酸氯苯那敏及盐酸去氧肾上腺素氧化降解样品一维液相色谱图，阴影部分保留时间10.20、12.80、以及14.33分钟的峰为被切割的色谱峰；图2为布洛芬氧化降解样品一维液相色谱图本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于中心切割技术鉴定复方感冒药中降解产物的高效液相色谱‑四级杆飞行时间质谱联用方法，包括步骤：在第一维色谱中使用质谱不兼容流动相对样品进行分离；通过一维检测器采集紫外数据，确定目标峰，进行中心切割，使目标峰存于定量环中；二维体系使用质谱兼容性流动相，通过阀切换将目标峰反冲至二维体系中，进入二维紫外及质谱检测器中完成杂质分析和鉴定。
【技术特征摘要】
1.一种基于中心切割技术鉴定复方感冒药中降解产物的高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用方法，包括步骤：在第一维色谱中使用质谱不兼容流动相对样品进行分离；通过一维检测器采集紫外数据，确定目标峰，进行中心切割，使目标峰存于定量环中；二维体系使用质谱兼容性流动相，通过阀切换将目标峰反冲至二维体系中，进入二维紫外及质谱检测器中完成杂质分析和鉴定。2.权利要求1所述的方法，包括下述步骤：1)样品的制备：将待鉴定的复方感冒药经过氧化破坏处理，包括：a)布洛芬氧化样品的制备：取相当于布洛芬200mg的复方感冒药适量，加乙腈10ml，超声使溶解，过滤，加30％过氧化氢10ml，置80℃水浴1小时，取出，放冷，转移至100ml量瓶中，定容，摇匀，滤过，待进样；b)盐酸去氧肾上腺素及马来酸氯苯那敏氧化样品的制备：取相当于盐酸去氧肾上腺素10mg及马来酸氯苯那敏4mg的复方感冒药适量，加20％乙腈-水溶剂10ml，超声使溶解，摇匀加30％的过氧化氢5ml，置80℃水浴30分钟，取出，放冷，转移至25ml量瓶中，定容，摇匀，过滤，待进样；2)一维高效液相色谱检测：将步骤1)制备的氧化破坏样品分别进样，在泵I的驱动下，样品通过第一维色谱柱进行分离，并通过检测器I，观察流出组分的特征，选定目标组分；3)捕集目标峰：通过阀切换，将一维色谱图中含目标组分的目标峰切出，捕集目标物至切换阀定量环中；4)二维高效液相色谱-质谱检测：进行阀切换，在泵II的驱动下将定量环中的步骤3)捕集至定量环中的目标物通过二维质谱兼容性流动相反冲至二维色谱柱中，采用梯度洗脱方式进行脱盐，脱盐时流路通过检测器II进废液；经过脱盐后，再将流路从废液切换进质谱，采集目标物的紫外及质谱数据；5)质谱检测以ESI为离子源，电离模式为正离子模式以及选择AutoMS/MS功能同时获取目标物的一级以及二级高分辨质谱数据，进而借助仪器自带MSC软件进行结构推测和鉴定。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中布洛芬一维
\t色谱测定条件为：高效液相色谱：HPLC，Agilent1260；色谱柱：WatersBEHC183.5um4.6*150mm；梯度洗脱条件：流动相A：0.02mol/L磷酸二氢钠-乙腈(83.5：16.5)；其中磷酸二氢钠用磷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：石涛，胥娜，刘小柔，朱丹，王菲，
申请(专利权)人：深圳海王药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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