针对间质和上皮-间质转化的循环肿瘤细胞的特异性检测工具制造技术

本发明专利技术包括发现细胞表面波形蛋白作为从癌症患者的血液检测和分离间质和上皮-间质转化的循环肿瘤细胞的新颖生物标志物。此外，提供一种对循环肿瘤细胞上的细胞表面波形蛋白的检测具有特异性的抗体以及所述抗体检测、计数和分离CTC的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】针对间质和上皮-间质转化的循环肿瘤细胞的特异性检测 工具 本申请要求2013年3月5日提交的美国临时申请号61/772, 973的优先权权益， 所述美国临时申请的整个内容以引用的方式并入本文。 文件名称"UTFCP1208TO_ST25. txt"中包含的 3KB (如 Microsoft Windows 中所测 量）且于2014年2月18日创建的序列表通过电子提交与此一起提交，并且以引用的方式 并入本文。 专利技术背景 本专利技术根据由国立卫生研究院授予的资助号CA120295在政府资助下进行。政府 享有本专利技术的某些权利。 1.专利
本专利技术大体上涉及癌症生物学的领域。更具体来说，它涉及计数和分离循环肿瘤 细胞以有助于早期检测肿瘤、转移和复发。 2.相关技术的描述 转移是癌症相关死亡的主要原因。循环肿瘤细胞（CTC)被视为转移的种子，并且 被定义为使它们自身从原发性肿瘤脱离进入血流中，并且朝向远端器官行进以定殖成转移 瘤的罕见细胞（Pantel和Brakenh off, 2004)。尽管在癌症疗法领域的近期进步能够牵制 原发性癌症散布，但需要用于早期检测、诊断和治疗性监测转移性癌症的可靠生物标志物。 癌症患者的外周血液中存在的CTC正作为用于早期检测和监测抗癌药物的治疗功效的有 前途靶标而出现（Parkinson等，2012)。目前，用于检测CTC的可接受标志物包括EpCAM 和细胞角蛋白（Parkinson等，2012)。然而，这些标志物可检测仅上皮CTC，从而排除已丧 失EpCAM的表达的上皮-间质转化的（EMT) CTC (Sieuwerts等，2009)和源于间质肿瘤的任 何其它非上皮CTC，所述间质肿瘤构成成人癌症类型的约10%以及儿科癌症类型的约20% (Mackall等，2002)。当前检测工具的这个局限性表明急切需要可满足这些要求的新颖工 具。 专利技术概述 在一些实施方案中，本专利技术提供一种用于检测循环肿瘤细胞上的细胞表面波形蛋 白的新颖抗体。在一个实施方案中，本专利技术提供一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体特异 性结合波形蛋白多肽，并且其中所述抗体与84-1单克隆抗体竞争结合所述多肽。在某些方 面，本专利技术的单克隆抗体可与84-1单克隆抗体结合相同表位。 在一个方面，本专利技术的单克隆抗体可包含与84-1的Vh⑶Rl (SEQ ID NO: 3)至少 80% 同一的第一 Vh CDR;与 84-1 的 Vh CDR2(SEQ ID N0:4)至少 80% 同一的第二 Vh CDR; 与 84-1 的 Vh CDR3(SEQ ID N0:5)至少 80% 同一的第三 Vh CDR;与 84-1的\ CDR1(SEQ ID N0:6)至少 80% 同一的第一 \ CDR;与 84-1 的\ CDR2(SEQ ID N0:7)至少 80% 同一的第 二\ CDR;和与 84-1 的\ CDR3(SEQ ID N0:8)至少 80% 同一的第三\ CDR。 在另一方面，本专利技术的单克隆抗体可包括与SEQ ID NO: 3同一的第一 Vh⑶R ;与 SEQ ID NO: 4 同一的第二 Vh CDR ;与 SEQ ID NO: 5 同一的第三 Vh CDR ;与 SEQ ID NO: 6 同一 的第一\CDR;与SEQIDN0:7同一的第二\CDR;和与SEQIDN0:8同一的第三\CDR。 在另一方面，本专利技术的单克隆抗体可包含与84-1的Vh结构域（SEQ ID NO: 1)至 少约80%同一的Vh结构域和与84-1的V1结构域（SEQ ID NO: 2)至少约80%同一的V #吉 构域。在某一方面，本专利技术的单克隆抗体可包含与84-1的Vh结构域（SEQ ID NO: 1)同一 的Vh结构域和与84-1的V1结构域（SEQ ID NO:2)同一的V1结构域。在另外某一方面，本 专利技术的单克隆抗体可为84-1抗体。 在一些方面，本文公开的单克隆抗体可为重组的。在一些方面，实施方案的单克隆 抗体可为IgG、IgM、IgA或其抗原结合片段。在一些方面，本专利技术的单克隆抗体可为Fab'、 F((ab'）2、F((ab'）3、单价scFv、二价scFV或单结构域抗体。在一些方面，本文单克隆抗 体可为人抗体、人源化抗体或去免疫抗体。在某些方面，所述人源化或去免疫抗体可在人 IgG (例如IgGl或IgG2)骨架上包含前述CDR。 在某些方面，实施方案的单克隆抗体可缀合于显像剂、化学治疗剂、毒素或放射性 核素。在某些方面，本文公开的单克隆抗体可包含在药学上可接受的载体中。 在一个实施方案中，本专利技术提供一种分离的多核苷酸分子，其包含编码本专利技术的 单克隆抗体的核酸序列。 在一个实施方案中，本专利技术提供一种重组多肽，其包含含有84-1的Vh结构域的 ⑶R 1-3(SEQ ID N0:3、4和5)的抗体Vh结构域。在另一实施方案中，本专利技术提供一种重组 多肽，其包含含有84-1的\结构域的CDR 1-3 (SEQ ID N0:6、7和8)的抗体V ^结构域。在 另一实施方案中，本专利技术提供一种分离的多核苷酸分子，其包含编码包含含有84-1的Vh结 构域的CDR 1-3 (SEQ ID NO: 3、4和5)的抗体Vh结构域和/或含有84-1的八结构域的CDR 1-3(SEQ ID N0:6、7和8)的抗体\结构域的多肽的核酸序列。 在一个实施方案中，本专利技术提供一种宿主细胞，其包含一种或多种编码实施方案 的单克隆抗体或重组蛋白的多核苷酸分子。在某些方面，宿主细胞可为哺乳动物细胞、酵母 细胞、细菌细胞、纤毛虫细胞或昆虫细胞。 在一个实施方案中，本专利技术提供一种制备抗体的方法，其包括在细胞中表达一种 或多种编码本专利技术的抗体的\和V H多肽链的多核苷酸分子，以及从所述细胞纯化所述抗 体。 在一个实施方案中，本专利技术提供一种分离的抗体，其中所述抗体包含与84-1的VhCDR1(SEQ ID N0:3)至少 80% 同一的第一 Vh CDR;与 84-1 的 Vh CDR2(SEQ ID N0:4)至少 80% 同一的第二 Vh CDR;与 84-1 的 Vh CDR3(SEQ ID N0:5)至少 80% 同一的第三 Vh CDR; 与 84-1的\ CDR1(SEQ ID N0:6)至少 80% 同一的第一 \ CDR;与 84-1的\ CDR2(SEQ ID N0:7)至少 80% 同一的第二\ CDR;和与 84-1 的\ CDR3(SEQ ID N0:8)至少 80% 同一的 第三\ CDR。 在一个实施方案中，本专利技术提供一种特异性检测循环肿瘤细胞的方法，其包括（a) 从患者获得血液样品，（b)使所述样品与结合细胞表面波形蛋白的抗体一起孵育，以及（C) 检测所述抗体结合的细胞。在某些方面，结合细胞表面波形蛋白的抗体可为本文公开的抗 体。在一些方面，抗体可为结合细胞表面波形蛋白的抗体样分子，如适体。在一些方面，检 测抗体结合的细胞可包括使用流式细胞计量术、免疫组织化学、荧光显微术、放射免疫测定 或 ELISA。 在某些方面，方法可进一步包括在使样品与结合细胞表面波形蛋白的抗体一起孵 育之前清除样品的CD45阳性细胞。在某些方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的单克隆抗体，其中所述抗体特异性结合波形蛋白多肽，并且其中所述抗体与84‑1单克隆抗体竞争结合所述多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·萨特里，李书林，
申请(专利权)人：得克萨斯州大学系统董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US