杀灭线虫菌制剂及其制备方法技术

本发明专利技术一种杀灭线虫菌制剂及其制备方法。本发明专利技术杀灭线虫的菌制剂由巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、荧光假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）和细黄链霉菌（Ｓｔａｅｓｔｏｍｙｃｅｓ　ｍｉｃｒｏｆｌａｖｕｓ）优化组合组成的复合菌群，其中各菌菌落数比例是１∶０．５～１∶１～１．５，吸附载体为腐殖酸。本发明专利技术的杀灭线虫的菌制剂的制备方法，包括三级液体扩大培养，吸附于载体上。有效菌一旦施入土壤可以很快形成优势菌群，发挥杀灭线虫的作用，杀灭率９４－９８％。三种菌相互配合，不仅杀虫驱虫而且促进、修复土壤生态环境。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及环境生物
，具#^及一种杀^±壤线虫菌制剂及其制备方法。
技术介绍
土壤线虫显著增多，植物病害的种类和范围不断增加，这都^h壤生态系,至臓坏的明证。 其中土壤线虫是直接影响农作物产量的土壤害虫，尤其是种植花生、红薯的土壤，线虫可以把整 块整±央土地的花生、红薯吃光或破坏,几乎绝收。以前只是寻求化学杀虫剂，如涕K^(Aldicarb)， 第一年有效，第二年则几乎无效，而且它所造成的土壤污染几十年都消除不掉。所以，研究开发 微生物制剂杀灭线虫势在必行。国内外己有一些研究，但是，还未见高密度、高活性，可大面积 f顿的菌制齐啲J随。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是掛共一种高密度、高活性的杀灭土壤线虫菌制剂及其制备方法。本专利技术解决该技术问^^f采用的技术方案是本专利技术杀灭线虫的菌制剂由巨大芽孢杆菌(&w77"sme辟ten'鹏)、荧光假单胞菌 (尸se"obi770/7a9 /7〃Qre5ce/7Sy)禾口细l^l5菌(5"tee5tQ27jce51啦'cro/7ara5)优化纟且合组成的复合菌 群，其中各WMm比例是l:0.5 l:1 1.5，吸附载体为腐殖酸。 本专利技术的杀灭线虫的菌制剂的制备方法，包括下述步骤1) 将保存的巨大芽孢杆菌(泡w77"观e辟ter7'湖)、荧光假单胞菌(尸sew/o嫩"as /7〃oresce/7^和细黄H5菌(分aasto迈/cas啦'cro/7sms)斜面菌种活化，分别摇瓶培养； 基本培养基:可溶性淀粉培养基培养，具体配加卩下:可溶性淀粉20g， KN03 lg, NaCl 0. 5g, K2HP040.5g， MgS04. 7H20 0. 5g, FeS04 0. Olg，蒸馏7jU000raL， pH7. 0 7. 2， 0.1Mpa， 121°C 高压灭菌20 30min; 28 30。C培养12 24h;2) 将各菌群混合，二级液^T大培养，总体积5 20L，以玉米面代替可溶性淀粉培养基中 的可溶性淀粉，并添加驢百分比O. 1%的腐殖酸，其《械分和比例与可溶性培养對瞷， 接种量^^只百分比为5% 10%， 28 30。C培养12 24h;菌群密度为5X 107mL_8X 10VmL;3) 再，液体扩大培养，总体积10倍于2)，扩大培养基同2)，接种量懒只百分比为5% 10%， 28 30。C培养12 24h;菌群密度为1X 109/mL-9X 109/mL;4) 以腐殖酸为载铜每混合菌群均匀吸附、固定化于腐殖酸匕腐殖酸与的步骤3)的扩大培 养液重量比为3 5，菌職度为2 X 108/mL-3 X 10VmL。3巨大^fS杆菌(5""7/^y附egaten'wm)、荧光假单胞菌(尸5"e"Ghc c!/7a51 /7〃ore5ce/75^禾卩细黄 链霉菌OS/re/ to/^cas附z'm^m^)，都是能产生几丁质辭口腦酶的菌，倉滩破坏线虫的肠壁， 从而杀灭线虫；而且SH种菌都有可以fg植物根生长、改善根围生态环境的作用。将三种菌活 化经三级液^T大培养并吸附、固定化于腐殖社制备成菌制剂。三株菌种均购于中国科学院微 生物研娜菌种臓中心。杀灭土壤线虫菌制剂是J^H种菌群优化组合的复合微生物，SH种菌都是农业部允许4顿 的，、无害的菌。本专利技术的有益效果1) 复合菌固定化于腐殖社，使每克复合菌制剂的有效離落数(CFU)可高达10个亿以上 (2~3X109/g)，几乎超lj了最大可能数，至今絲见如此高含菌量菌制齐啲J隨。腐殖酸不仅能为所培养菌掛共一些营养成分，还由于其网状结构，具有较大的比表面积，所以能在单位体积内 附着吸附固定化较多的菌体。所以，有效菌一旦MA土壤可以很決形成优势菌群，发挥杀灭线虫 的作用，杀灭率94-98%。2) 土壤线虫的肠壁细胞含，多的几丁质，而巨大^ &杆菌等菌能分泌较多的几丁质酶。所以，土壤线虫一旦遇到巨大飾杆菌等菌体，由于其肠壁觀ij几丁质酶的破坏，最后m而死。巨大^m杆菌还具有fct壤固定化的磷转化为可溶性磷，可溶性磷是植物可利用的磷。 细黄鶴菌，能产生抗生素抗病、驱虫，分泌刺激素，舰植物生长，转化矿物质。 荧光假单胞菌是促根生长、防治土传病菌的有效菌种，而且还有,土壤残留农药等污染物 的作用。三种菌相互配合，不仅杀虫驱虫而且^i4、修fch壤生态系统平衡。 具体实施方案 实施例1按下列步513S行1) 将4'C保存的巨大芽孢杆菌(fecj7&观e辟te27'湖)、荧光假单胞菌(/^e"cfcffi70朋s /7"oresce/JsJ和细H，菌(分aasto/nyces啦'cro/7ams)余4面菌种活H分别摇瓶i錄。 以可溶性淀粉培养基培养，具体配別卩下可溶性淀粉20g， KN03 lg， NaCl 0. 5g, lOHX 0. 5g， MgS04.7H20 0.5g， FeS04 0. Olg,蒸馏水lOOOraL， pH7.2， 121。C高压灭菌30min 。 28。C培养 24h。2) 二级液^T^t咅养(6L)，以就面代替代替上述培养基中的可溶性淀粉，并加入0.1%腐殖 酸(质量分数)，接种量5%， 28。C培养24h。。3) Hm液体扩大培养(60L)，培养基同上；接种量10%， 28。C培养24h。4)以腐殖酸为载懒各菌液固定、吸附于腐殖B。 实施例2按下列步^ffl^亍1) 将4。C保存的巨大芽孢杆菌(泡c^W"柳e辟terAra7)、荧光假单胞菌(化e"。te o/7as /7〃oresce/ W和细黄链霉菌(分a"to,ces啦'cro/7ams)三种菌种斜面活化，分别摇瓶培养。 以可溶'性^定粉培养^T;Ut养，具体配方如下可溶性淀粉20g， KN03 lg, NaCl 0. 5g' 1(掛04 0. 5g, MgS04. 7H20 0. 5g， FeS04 0. Olg，蒸衞JU000mL， pH7. 0， 121。C高压灭菌30min 。 28°C 培养12h。2) 二级液体扩大培养(10L)，以玉米面代替上述培养基中的可溶性淀粉，并加入0.1%腐殖酸 (质量分数)，接种量5%， 28。C培养12h。。3) H^液体扩大培养(IOOL)，培养基同上，接种量10%， 28。C培养12h。4) 以腐殖酸为载湘各菌液固定、吸附于腐殖fei:。 实施例3按下列步職行1) 将4。C保存的巨大芽孢杆菌(fe"'7^/57Z/e卵ter2'^ )、荧光假单胞菌(/^e"ofcffio"as /7i/orescm^和细黄链霉菌(分aesto,ms孤'cro/7ams)三种菌种斜面活化，分别摇瓶培养。 以可、溶性淀粉、培养ST;^咅养，具体配加口下可溶性淀粉20g， KN03lg，NaCl 0. 5g' K掛(X 0.5g， MgS04. 7H20 0. 5g， FeS04 0. Olg,蒸馏7K 1000mL， pH7. 0， 121。C高压灭菌30min 。 28。C 培养12h。2) 二级液体扩力咅养(20L)，以玉米面代替上述培养基中的可溶性淀粉，并加入0.1%腐殖酸 (重量分激，接种量5%， 28。C培养24h。。3) H0液体扩^i咅养(200L)，培养基同上本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杀灭线虫的菌制剂，其特征在于：该菌制剂由巨大芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、荧光假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）和细黄链霉菌（Ｓｔａｅｓｔｏｍｙｃｅｓ　ｍｉｃｒｏｆｌａｖｕｓ）优化组合组成的复合菌群，其中各菌菌落数比例是１∶０．５～１∶１～１．５，吸附载体为腐殖酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张清敏，齐建超，薛洪涛，崔合香，崔小会，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]