一株甲基营养芽孢杆菌KACC13105及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株甲基营养芽孢杆菌（

A Bacillus KACC13105 and its application

The present invention discloses a methyl Bacillus

【技术实现步骤摘要】
一株甲基营养芽孢杆菌KACC13105及其应用
本专利技术属于生物防治植物害虫领域。具体而言，本专利技术涉及一株甲基营养芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）KACC13105及其应用。
技术介绍
甜菜夜蛾（SpodopteraexiguaHübner）（鳞翅目：夜蛾科）是我国农牧业生产中的一种重要害虫，尤其对蔬菜、棉花等经济作物为害最重。目前，甜菜夜蛾的危害已遍及20多个省、市和自治区，而对其的防治仍依赖于化学合成农药。由于化学合成农药的滥用和不合理使用，甜菜夜蛾对较多种类的杀虫剂已经产生抗药性，且带来了诸多负面影响，如食品安全（农药残留超标）与环境污染等。微生物农药因其“环境友好”特性，在国内外获得了又一次发展的机遇。《国家中长期科学与技术发展规划纲要（2006-2020）》和《国家“十二五”科学和技术发展规划》已经将农业生物药物与生态农业作为优先发展方向。据统计，2011年全球生物农药市场价值达13亿美元，2017年有望达到32亿美元；而中国市场由于农药管理制度日趋严格，公众对天然产品需求日益增长，已经成为生物农药发展最快的市场之一。因此，加快微生物农药的研究与开发，已经成为未来绿色农药发展的趋势。
技术实现思路
本专利技术的目的为提供一株甲基营养芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）KACC13105及其应用。该菌株易于规模化发酵生产，其发酵产物经提取分离后对甜菜夜蛾等植物害虫具有较好的杀虫活性，可用于制备微生物杀虫剂，发展前景良好。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术所提供的菌株为甲基营养芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）KACC13105，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏日期：2016年12月09日，保藏编号为：CGMCCNo.13437。甲基营养芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）KACC13105的保存方法：采用LB固体培养基保存。LB固体培养基：1%胰蛋白胨，0.5%酵母提取物，1%NaCl，1.5%琼脂，蒸馏水，pH调至7.0。本专利技术的另一个目的是提供一种甲基营养芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）KACC13105的发酵方法，其特征是，1）将保存的甲基营养芽孢杆菌KACC13105接种于LB固体平板表面，30℃培养2-4天，作为规模发酵培养的菌种，待用；2）将菌种接种于无菌的、盛有LB液体培养基的锥形瓶中，30℃120rpm摇床培养10-20天，得到发酵产物待用；所述发酵培养基为：1%胰蛋白胨，0.5%酵母提取物，1%NaCl，蒸馏水，pH调至7.0。上述发酵产物可以进一步提取，具体包括以下步骤：1）采用有机溶剂提取，提取液减压蒸馏得浸膏；所述有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇或者正丁醇中的一种或几种，优选乙酸乙酯；2）然后浸膏进行柱层析分离，所述柱层析可采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相柱层析及大孔吸附树脂柱层析中的一种或几种，优选硅胶柱层析；3）然后以氯仿-甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比10:1梯度的洗脱组分I与体积比5:1梯度的洗脱组分Ⅱ用于制备微生物杀虫剂；所述氯仿-甲醇洗脱梯度为100:1至1:1。本专利技术所具有的优点：甲基营养芽孢杆菌KACC13105，分离于青岛胶州湾湿地采集的盐生植物碱蓬样品，属于碱蓬内生细菌，且具有较高的耐盐碱性。所述菌株发酵产物对甜菜夜蛾具有较好的杀虫活性，在浓度为0.4mg/mL时，致死率为84.3±1.2%。所述菌株发酵产物经发酵培养、提取分离得到，可以利用微生物进行不同规模的发酵，具有生产工艺简单、周期短、产品成本低等优点。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。实施例1：甲基营养芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）KACC13105菌株鉴定微生物学特性：菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，28℃培养两天。菌落形态为圆形或椭圆形，乳白带微黄色，边缘凸起不透明；显微镜检发现菌体呈杆状，能运动，产芽孢；革兰氏染色呈阳性（以大肠杆菌为对照），观察染色后芽孢呈椭圆形。分子生物学特性：该菌株的16SrDNA基因序列测定结果如下：GGCTGGCTCCTAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCGCCCTATTTGAACGGCACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGTCA本文档来自技高网...

【技术保护点】
甲基营养芽孢杆菌（

【技术特征摘要】
1.甲基营养芽孢杆菌（Bacillusmethylotrophicus）KACC13105，所述菌株的保藏编号为CGMCCNo.13437。2.权利要求1所述的甲基营养芽孢杆菌KACC13105在制备防治植物害虫的发酵产物中的用途。3.如权利要求2所述的用途，其特征是，所述植物害虫为甜菜夜蛾、小菜蛾与粉纹夜蛾中的一种或几种。4.权利要求1所述的甲基营养芽孢杆菌KACC13105的发酵方法，其特征是：1）将保存的甲基营养芽孢杆菌KACC13105接种于LB固体平板表面，30℃培养2-4天，作为规模发酵培养的菌种，待用；2）将菌种接种于无菌的、盛有LB液体培养基的锥形瓶中，30℃、120rpm摇床培养10-20天，得到发酵产物待用；所述发酵培养基为：1%胰蛋白胨，0.5%酵母提取物，1%NaCl，蒸馏水，p...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜丰玉，牛赡光，肖琳，周远明，王学军，
申请(专利权)人：青岛秾贝尔生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37