一种微生物菌剂及其在畜禽养殖上的应用制造技术

本发明专利技术具体公开了一种微生物菌剂，具体是公开了由一株猪源地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH‑02制备的微生物菌剂及在畜禽养殖上的应用。本发明专利技术的该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO．15454，保藏日期为2018年3月15日。本发明专利技术的地衣芽孢杆菌YHSH‑02是从野猪肠道中分离获得的，能产生丰富的脂肽类杆菌素，抗菌蛋白等，能抑制大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌；本发明专利技术从野猪肠道获得的地衣芽孢杆菌YHSH‑02是一株防治效率高、防治范围广的能显著促生长的生物防治潜力菌株，在无抗养殖中具有良好的应用开发前景。

A Microbial Microbial Agent and Its Application in Livestock and Poultry Breeding

The invention discloses a microbial inoculum in particular, and discloses in particular a microbial inoculum prepared from a Bacillus licheniformis Bacillus licheniformis YHSH 02 and its application in livestock and poultry breeding. The strain of the invention has been stored in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation and Management Committee, No. 3 Hospital, Beichen West Road, Chaoyang District, Beijing, with the storage number CGMCC NO. 15454 and the storage date being March 15, 2018. The lichen Bacillus YHSH_02 is isolated from the intestinal tract of wild boar and can produce abundant lipopeptide bacilli, antimicrobial proteins, etc. It can inhibit Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecalis, Enterobacter cloacae, Pseudomonas aeruginosa, Proteus bacillus, Staphylococcus aureus, Salmonella and Clostridium; the lichen Bacillus obtained from the intestinal tract of wild boar. Bacillus YHSH_02 is a potential strain of biological control with high control efficiency and wide control range, which can significantly promote growth. It has good application and development prospects in non-resistant aquaculture.

【技术实现步骤摘要】
一种微生物菌剂及其在畜禽养殖上的应用
本专利技术属于微生物
，涉及一种微生物菌剂及其在畜禽养殖上的应用，具体是由地衣芽孢杆菌BacilluslicheniformisYHSH-02发酵制备而成的一种微生物菌剂及其在畜禽养殖上的应用。
技术介绍
虽然抗生素等添加剂能够有效预防畜禽疾病，但抗生素的滥用引起病菌产生耐药性、环境污染及药物残留等不利影响，加之人们对食品安全的要求，近年来，欧洲己有许多国家禁止使用抗生素作为饲料添加剂，各国学者着力于研究抗生素的理想替代品。微生态制剂作为一种饲料添加剂，不仅能够防病治病，促进动物生长，而且具有无污染、无残留及无抗药性的特点，是抗生素无法比拟的。地衣芽孢杆菌是常用微生态制剂之一，芽孢杆菌是一类好氧或兼性厌氧菌，可产生芽孢，能够耐酸耐碱、耐高温和高压，具有较高的稳定性。它们在动物消化道内的繁衍及代谢，能够产生多种维生素、氨基酸、有机酸、蛋白质和多种有效的酶等，参与机体的新陈代谢，有助于动物对饲料中营养物质的消化吸收，从而促进动物生长;同时还具有生物拮抗功能，通过消耗肠道中的游离氧来维持肠道的厌氧环境，可以有效抑制动物肠道有害菌的繁殖，维持消化道菌群平衡。目前市场上己有大量芽孢杆菌制剂，但目前芽孢杆菌饲料添加剂在促生长防病方面效果不够显著，还是不能完全替代抗生素，而价格却高于抗生素，成为了取替抗生素的瓶颈。养殖业滥用抗生素问题已严重影响了养殖业健康发展并对人体健康和环境均构成威胁。各国政府纷纷出台措施禁止以促生长为目的的抗生素在饲料添加剂中应用。2015年9月1日，农业部发布2292号公告，明确提出4类抗生素严禁在食用动物中使用。禁用饲用抗生素之后急需找到能够替代抗生素的无毒、无公害、且能够促进养殖动物健康、快速生长的饲料添加剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种微生物菌剂，具体是提供一种由一株可拮抗多种畜禽病原菌，能显著促生长的猪源地衣芽孢杆菌发酵而成的一种微生物菌剂；经过试验，该菌在0-7%的盐度中都能生长良好，并且对多种畜禽养殖病原菌如大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌具有显著抑制作用，该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNO．15454，保藏日期为2018年3月15日。另一方面，本专利技术目的是提供一种地衣芽孢杆菌在制备拮抗畜禽养殖病原菌并促进畜禽生长的生物制品中的应用。其中，所述的应用，其特征在于，所述的生物制品为发酵菌液或菌粉。其发酵菌液或菌粉可按现有发酵技术制备，本专利技术提供制备方法为:一、取出地衣芽孢杆菌BacilluslicheniformisYHSH-02菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，37℃培养48小时。在平板下挑取单个菌落接种50毫升LB培养基中，在培养箱中37℃震荡培养24小时。种子采用5%的接种量，接种至装液量为2LLB培养基的5L大三角瓶中，37℃震荡培养20-28小时，检测其菌液浓度，活菌含量超过20亿/毫升，即可作为地衣芽孢杆菌液体菌种；二、将步骤一培养的地衣芽孢杆菌液体菌种作为种子，接种至600L发酵培养基，接种量为10%，开搅拌120r/min，每分钟通气量液气比1：0.8，37℃培养24-36小时，待芽孢含量不低于150亿CFU/ml，即可结束发酵，无菌灌装得到成品地衣芽孢杆菌菌剂；或得到发酵液后加上糊精进行喷雾干燥，得到地衣芽孢杆菌粉剂，其粉剂芽孢含量不低于100亿CFU/g；其中所述LB培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；其中所述发酵培养基：豆粕粉70g/L，鱼粉10g/L，玉米浆粉10g/L，葡萄糖5g/L，可溶性淀粉10g/L，硫酸镁0.3g/L，硫酸锰0.05g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，碳酸钙5g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。本专利技术的效果：本专利技术的地衣芽孢杆菌YHSH-02是从野猪肠道中分离获得的，能产生丰富的脂肽类杆菌素，抗菌小肽等，能抑制大肠杆菌，铜绿假单胞菌，粪肠球菌，阴沟肠杆菌，绿脓杆菌，变形杆菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，梭状芽孢杆菌等多种畜禽养殖病原菌的生长，并能促进畜禽的快速生长，缩短养殖时间，降低养殖成本，真正做到无抗养殖。本专利技术地衣芽孢杆菌液具有免疫增强作用，属实际无毒类物质，安全度大。本专利技术从野猪肠道获得的地衣芽孢杆菌YHSH-02是一株防治效率高、防治范围广的并具有显著促生作用的生物防治潜力菌株，在无抗养殖中具有良好的应用开发前景。以本专利技术的地衣芽孢杆菌YHSH-02复配之后的饲料添加剂饲喂白羽肉鸡，42天出栏时体重与市场芽孢组，抗性素组（维吉尼亚霉素）比较均有显著差异。比维吉尼亚霉素增重156克/只，增重6.02%；比市场芽孢菌组增重115克/只，增重4.36%；市场芽孢组比维吉尼亚霉素增重41克/只，增重1.58%，差异不显著。并且经过多次重复试验过可以确定完全替代抗生素的使用，并保持成活率不低于97%，且同等养殖饲料与成本下，可比抗生素组个体可增重5%以上，可以做到“无抗”养殖，这对于中国养殖业会具有重大意义。本专利技术微生物菌剂（地衣芽孢杆菌YHSH-02）在减少断奶仔猪腹泻率与死淘率试验中效果显著，试验组的死淘率只有1.6%，而对照组的死亡率达到10.4%,其僵猪率达到了9.6%，因此其死淘率达到了20%，具有显著经济效益。具体实施方式实施例1地衣芽孢杆菌的分离2014年12月，地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)菌株是在湖南省隆回县滩头镇野外的野生野猪的肠道内容物中分离得到的。具体方法是：取野生野猪的肠道内容物加入盛有10mL灭菌水的三角瓶中，震荡培养30min(200r/min)，然后取悬浮液1mL置于9mL无菌水中，制成10-2稀释悬浮液，依次类推，制成10-5，10-6稀释悬液；在其中各吸取100uL，加到营养肉汤培养基平板，MRS培养基，PDA培养基上，用涂布棒涂布均匀，每个处理重复3次。将上述培养皿，置于37℃恒温培养箱中培养1-2d（PDA培养基置30℃下培养）。挑选单菌落转接到对应的培养基上培养，长出菌落后，用接种环进行划线分离纯化，纯化菌株于4℃保存。总共分离得到218个形态有差异单菌落。其中的分离、纯化获得的YHSH-02菌株在营养肉汤培养基上单细胞繁殖生长形成的菌落为杏仁白色，湿润有光泽，略有放射状条纹，培养48小时后，培养基上有明显产棕色色素；细胞形状为杆状，细胞大小为0.6um-0.8um×1.5um-3.5um；两端钝圆，形成芽孢，芽孢近椭圆形，中生，具有周生鞭毛，能运动。不形成伴孢晶体；好氧与厌氧都能生长；可液化明胶，水解淀粉，V-P反应、接触酶反应，酪素分解反应，牛奶胨化反应为阳性；卵黄反应，吲哚反应，苯丙氨酸脱氨反应，酪氨酸分解反应，牛奶凝固反应为阴性；能利用葡萄糖，木糖，L-阿拉伯糖，甘露糖等。最适PH为5.5-8.7，最适生长温度为25-38℃，0-7%的盐度中都能生长良好，生长温度范围15-55℃，通过16srDNA鉴定为地衣芽孢杆菌。实施例2本地本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种微生物菌剂，其特征在于，此微生物菌剂是由地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis YHSH‑02发酵制备而成，其中，该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO．15454，保藏日期为2018年3月15日。

【技术特征摘要】
1.一种微生物菌剂，其特征在于，此微生物菌剂是由地衣芽孢杆菌BacilluslicheniformisYHSH-02发酵制备而成，其中，该菌种已在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNO．15454，保藏日期为2018年3月15日。2.根据权利要求1所述的一种微生物菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋常德，黄进，张国睿，
申请(专利权)人：佛山市艳晖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44