一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂，包括质量份的原料：草炭10～14份、农作物秸秆粉40～56份、矿物质13～20份，以草炭、农作物秸秆粉和矿物质的质量总量计，该甲基营养型芽孢杆菌菌剂还包括250‑450mL/kg的甲基营养型芽孢杆菌发酵液。本发明专利技术还公开了一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂的制备方法，本发明专利技术添加的甲基营养型芽孢杆菌，对人畜无毒害，可调节作物微生物生态区系，改善作物品质。另外，本发明专利技术选用草炭和农作物秸秆粉为复合载体，既可以减少草炭使用量，又可以同时消纳大量的农作物秸秆，减少因秸秆焚烧带来的环境污染等问题。

Methyl nutrient Bacillus inoculum and preparation method thereof

The invention discloses a Bacillus methylotrophicus agent, including the quality of a material: 10 to 14 portions of peat and crop straw powder 40 ~ 56, 13 ~ 20 minerals, with the total quality of peat, crop straw powder and mineral, Bacillus methylotrophicus fermentation liquid of the methylotrophic bacillus coli agent also includes 250 450mL/kg. The invention also discloses a preparation method of Bacillus methylotrophicus agent, the invention adds Bacillus methylotrophicus, no toxicity to human and livestock, adjust crop microbial flora, improving crop quality. In addition, the invention is made of peat and straw powder as composite carrier, it can not only reduce the amount of peat, and can also consume large amount of crop straw, reduce the environmental pollution caused by straw burning and other issues.

【技术实现步骤摘要】
一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂及其制备方法
本专利技术属于微生物肥料领域，具体地说，涉及一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂及其制备方法。
技术介绍
甲基营养型芽孢杆菌是一类嗜温、好氧、产芽孢的杆状细菌，该菌广泛存在于自然界及植物根茎等内部器官中，安全无毒，且具有广谱的抗菌活性和极强的抗逆能力。近年来，国内学者对甲基营养型芽孢杆菌在植物生防、促生等方面应用研究较多，MunusamyMadhaiyan等人(MunusamyMadhaiyan,SelvarajPoonguzhali,Soon-WoKwon,etal.Bacillusmethylotrophicussp.nov.,amethanolutilizing,plant-growthpromotingbacteriumisolatedfromricerhizospheresiol[J].IJSEM,2010,60(10):2490-2495)从水稻根际土壤中分离筛选出一株甲基营养型芽孢杆菌，该菌不仅能促进水稻生长，而且也能抑制水稻青枯病的发生；周登博等人(周登博，井涛，谭昕等，6种基质拮抗菌发酵液对香蕉枯萎病及相关防御酶的影响[J]，热带作物学报，2013,34(5)：947-951)从土壤中分离的一株甲基营养型芽孢杆菌菌株4-L-16，对香蕉枯萎病有显著的防治效果。吕倩等人(吕倩，胡江春，王楠等，南海深海甲基营养型芽孢杆菌SHB114抗真菌脂肽活性产物的研究[J]，中国生物防治学报，2014,30(1)：113-120)在南海深海分离出一株甲基型营养型芽孢杆菌，该菌对黄瓜炭疽病菌、立枯丝核菌、黄瓜枯萎病菌等具有较强的抑制作用。可见，甲基营养型芽孢杆菌在防治病害发生、促进作物生长，改善农产品品质等方面显示出广阔的应用前景。也正因如此，甲基营养型芽孢杆菌被越来越多的企业看中，作为生产生物菌剂的功能菌所用。生物菌剂的主要成分是活的有益微生物，由于液体发酵液有效活菌数下降快、不易保存，且物流运输不方便，所以除生物叶面肥外，一般生物菌剂均经过合适的载体吸附后，制备成为粉剂菌剂或颗粒菌剂。但由于活菌保活对载体的特性有一定的要求，需要载体细度大，具有一定空隙，并含有一定的有机质，所以长久以来菌剂生产大多选择草炭作为吸附载体。随着生物菌剂产业的不断扩大，草炭的开采量逐年增加，对环境造成一定破坏的同时单价也在逐年提高，因此，选择合适的替代载体成为生物菌剂生产环节的迫切需求。秸秆含有丰富的N、P、K、有机质及其他中微量元素，且资源丰富、价格低廉、易得，适合作为菌剂载体。近年来，随着秸秆囤积量的增加及因秸秆焚烧带来的大气污染等问题的频繁出现，如何将秸秆资源化应用于生物菌剂生产中，这也成为生物肥料产业各界的关注热点。目前，市场上销售的或专利中涉及到的甲基营养型芽孢杆菌菌剂，其吸附载体多为草炭，而草炭为不可再生资源，长期大量开采终有枯竭的时候。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术针对上述的问题，提供了一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂及其制备方法，该菌剂一方面调节作物微生物生态区系，改善作物品质，另一方面减少草炭使用量，降低废弃农作物秸秆囤积量，缓解因秸秆焚烧带来的环境污染等问题。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂，包括质量份的原料：草炭10～14份、农作物秸秆粉40～56份、矿物质13～20份，以草炭、农作物秸秆粉和矿物质的质量总量计，该甲基营养型芽孢杆菌菌剂还包括250-450mL/kg的甲基营养型芽孢杆菌发酵液。进一步地，甲基营养型芽孢杆菌发酵液含有效活菌数大于或等于5.5×108/ml。进一步地，甲基营养型芽孢杆菌发酵液通过以下步骤制备得到：1.1)将保存在-4℃环境下的甲基营养型芽孢杆菌菌株接种至牛肉蛋白胨平板上30℃培养48h；挑取单菌落接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30℃培养24h后的液体即为所需接种液；1.2)将步骤1.1)中的接种液接种于装有种子培养基的300L种子罐中，接菌量为10％，接菌后进行发酵；初始pH值6.9-7.1、温度28-35℃、转速180-220r/min；1.3)当种子罐发酵9-10小时，菌体生长处于对数期，此时将种子罐中的发酵液加入到装有发酵培养基的3000L发酵罐中继续发酵，控制条件同种子罐，培养28-30小时，当菌体芽孢形成90-95％时，结束发酵，即得甲基营养型芽孢杆菌发酵液；其中，所述牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，琼脂15-20g，pH7.2-7.6；所述种子培养基：葡萄糖10g/L、蛋白胨2g/L、MgSO40.5g/L、酵母膏2g/L、牛肉膏2g/L；所述发酵培养基：玉米粉30.0g/L，豆饼粉20.0g/L，MgSO40.2g/L，NaH2PO40.5g/L，CaCl2.2H2O0.1g/L，K2HPO40.5g/L，pH7.0；各培养基灭菌条件为：0.1-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。进一步地，农作物秸秆粉为木薯茎秆、甘蔗叶、菠萝茎叶、玉米秸秆、香蕉叶、荔枝枝叶、龙眼枝叶中的一种或几种的混合物经粉碎，并过80目筛后所得的秸秆粉。进一步地，矿物质为沸石粉、蛭石粉、硅藻土、白炭黑、轻质碳酸钙中的一种或几种的混合物。本专利技术还公开了一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：1)制备甲基营养型芽孢杆菌发酵液；2)称量：按照质量百分比称量以下组分：草炭10～14份、农作物秸秆粉40～56份、矿物质13～20份，以草炭、农作物秸秆粉和矿物质的质量总量计，该甲基营养型芽孢杆菌菌剂还包括250-450mL/kg的甲基营养型芽孢杆菌发酵液；3)将称量好的草炭、甲基营养型芽孢杆菌发酵液倒入混拌机里进行吸附，混合均匀后，往混拌机中逐步添加农作物秸秆粉进行稀释混匀，最后加入矿物质，搅拌均匀后将物料进行粉碎，过100目筛，调整物料水分含量及pH值，即得甲基营养型芽孢杆菌菌剂。进一步地，制备甲基营养型芽孢杆菌发酵液具体为：1.1)将保存在-4℃环境下的甲基营养型芽孢杆菌菌株接种至牛肉蛋白胨平板上30℃培养48h；挑取单菌落接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30℃培养24h后的液体即为所需接种液；1.2)将步骤1.1)中的接种液接种于装有种子培养基的300L种子罐中，接菌量为10％，接菌后进行发酵；初始pH值6.9-7.1、温度28-35℃、转速180-220r/min；1.3)当种子罐发酵9-10小时，菌体生长处于对数期，此时将种子罐中的发酵液加入到装有发酵培养基的3000L发酵罐中继续发酵，控制条件同种子罐，培养28-30小时，当菌体芽孢形成90-95％时，结束发酵，即得甲基营养型芽孢杆菌发酵液。进一步地，牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，琼脂15-20g，pH7.2-7.6；所述种子培养基：葡萄糖10g/L、蛋白胨2g/L、MgSO40.5g/L、酵母膏2g/L、牛肉膏2g/L；所述发酵培养基：玉米粉30.0g/L，豆饼粉20.0g/L，MgSO40.2g/L，NaH2PO40.5g/L，CaCl2.2H2O0.1g/L，K2HPO40.5g/L，pH7.0；各培养基灭菌条件为：0.1-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。进一步地，甲基营养型芽孢杆菌菌剂的水分含量少于或等于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括质量份的原料：草炭10～14份、农作物秸秆粉40～56份、矿物质13～20份，以草炭、农作物秸秆粉和矿物质的质量总量计，该甲基营养型芽孢杆菌菌剂还包括250‑450mL/kg的甲基营养型芽孢杆菌发酵液。

【技术特征摘要】
1.一种甲基营养型芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括质量份的原料：草炭10～14份、农作物秸秆粉40～56份、矿物质13～20份，以草炭、农作物秸秆粉和矿物质的质量总量计，该甲基营养型芽孢杆菌菌剂还包括250-450mL/kg的甲基营养型芽孢杆菌发酵液。2.根据权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌菌剂，其特征在于，所述的甲基营养型芽孢杆菌发酵液含有效活菌数大于或等于5.5×108/ml。3.根据权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌菌剂，其特征在于，所述甲基营养型芽孢杆菌发酵液通过以下步骤制备得到：1.1)将保存在-4℃环境下的甲基营养型芽孢杆菌菌株接种至牛肉蛋白胨平板上30℃培养48h；挑取单菌落接种至牛肉膏蛋白胨液体培养基中，30℃培养24h后的液体即为所需接种液；1.2)将步骤1.1)中的接种液接种于装有种子培养基的300L种子罐中，接菌量为10％，接菌后进行发酵；初始pH值6.9-7.1、温度28-35℃、转速180-220r/min；1.3)当种子罐发酵9-10小时，菌体生长处于对数期，此时将种子罐中的发酵液加入到装有发酵培养基的3000L发酵罐中继续发酵，控制条件同种子罐，培养28-30小时，当菌体芽孢形成90-95％时，结束发酵，即得甲基营养型芽孢杆菌发酵液；其中，所述牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，琼脂15-20g，pH7.2-7.6；所述种子培养基：葡萄糖10g/L、蛋白胨2g/L、MgSO40.5g/L、酵母膏2g/L、牛肉膏2g/L；所述发酵培养基：玉米粉30.0g/L，豆饼粉20.0g/L，MgSO40.2g/L，NaH2PO40.5g/L，CaCl2.2H2O0.1g/L，K2HPO40.5g/L，pH7.0；各培养基灭菌条件为：0.1-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。4.根据权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌菌剂，其特征在于，所述的农作物秸秆粉为木薯茎秆、甘蔗叶、菠萝茎叶、玉米秸秆、香蕉叶、荔枝枝叶、龙眼枝叶中的一种或几种的混合物经粉碎，并过80目筛后所得的秸秆粉。5.根据权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌菌剂，其特征在于，所述矿物质为沸石粉、蛭石粉、硅藻土、白炭黑、轻质碳酸钙中的一种或几种的混合物。6.一种甲基营养型芽孢杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹雨坤，邹立飞，余小兰，李勤奋，李光义，徐林，张静，王定美，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46