Oya病毒RNA依赖的RNA聚合酶突变体、其表达载体和载体组合物及应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，尤其涉及一种Oya病毒RNA依赖的RNA聚合酶突变体、其表达载体和载体组合物及应用。所述Oya病毒RNA依赖的RNA聚合酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术通过将野生型RNA依赖的RNA聚合酶第756位氨基酸残基从赖氨酸(K)突变为谷氨酸(E)，获得的RNA依赖的RNA聚合酶突变体的酶活性明显降低，有利于降低Oya病毒复制能力和生长速率，进而显著降低Oya病毒毒力，为构建病毒减毒株和开发减毒活疫苗提供了新的思路和途径，对防控Oya病毒感染和传播具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，特别涉及一种oya病毒rna依赖的rna聚合酶突变体、其表达载体和载体组合物及应用。

技术介绍

1、oya病毒(oya virus，oyav)属于泛布尼亚病毒科正布尼亚病毒属，是simbu血清群的新成员，2000年在马来西亚猪肺组织中首次分离并命名，随后在东南亚和我国的蚊和蠓中分离到该病毒。该病毒的粒子呈球形，有包膜，基因组由三个相互独立的单链rna片段构成，分别为l、m和s片段。血清学调查显示，oyav在马来西亚猪场血清阳性率为93％，印度及四川的猪血清样本中也检测到oyav抗体阳性，并且印度人类样本中同样检测到oyav特异性igg抗体阳性，表明该病毒在人群中也有一定的感染率；细胞学实验表明，oyav在猪细胞系pk-15中滴度最高，可达1010.71tcid50/ml，在猴子细胞系vero ccl 81、ma-104，人类细胞系rd、ps、hela，以及bhk-21、mdbk、goatte中的滴度均在105tcid50/ml以上，表明oyav对众多哺乳动物物种具有感染性；流行病学调查结果表明，oyav广泛分布于我国南部地区及东南亚本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Oya病毒RNA依赖的RNA聚合酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一种突变L基因表达载体，其特征在于，所述表达载体插入有编码RNA依赖的RNA聚合酶突变体的突变L基因，所述RNA依赖的RNA聚合酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求2所述的突变L基因表达载体，其特征在于，所述突变L基因的DNA序列如SEQ ID NO.29所示。

4.根据权利要求2所述的突变L基因表达载体，其特征在于，所述表达载体为pCAGGS载体或pLCK载体。

5.一种载体组合物，其特征在于，所述载...

【技术特征摘要】

1.一种oya病毒rna依赖的rna聚合酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如seq idno.1所示。

2.一种突变l基因表达载体，其特征在于，所述表达载体插入有编码rna依赖的rna聚合酶突变体的突变l基因，所述rna依赖的rna聚合酶突变体的氨基酸序列如seq id no.1所示。

3.根据权利要求2所述的突变l基因表达载体，其特征在于，所述突变l基因的dna序列如seq id no.29所示。

4.根据权利要求2所述的突变l基因表达载体，其特征在于，所述表达载体为pcaggs载体或plck载体。

5.一种载体组合物，其特征在于，所述载体组合物包括如权利要求2-4任一项所述的突变l基因表达载体，还包括m基因表达载体和s基因表达载体，所述m基因表达载体插入有oya病毒m基因，所述m基因的dna序列如seq id no.30所示，所述s基因表达载体插入有oya病毒s基因，所述s基因的dna序列如seq id no.31所示。

6.根据权利要求5所述的载体组合物，其特征在于，所述突变l基因表达载体、所述m基因表达载体和所述s基因表达载体的质量比为1-3：1-2：1。

7.如权利要求1所述的oya病毒rna依赖的...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏菡，王静林，熊国典，王飞，袁志明，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：