【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制剂领域，具体涉及一种具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403及其应用。
技术介绍
1、牙周炎是一种由牙周致病菌引起的牙周支持组织慢性炎症，是最常见的口腔疾病之一，不仅影响牙周组织、诱导牙槽骨吸收导致牙齿脱落，严重还会影响全身健康。研究显示，牙周炎与口腔菌群息息相关，口腔菌群发生紊乱，就会引发口腔感染从而导致炎症。
2、牙周炎的基础治疗主要以机械的手段去除牙石、菌斑等局部刺激因素，然而单纯的机械治疗并不能彻底清除患处的菌斑，治疗后的位点短期内会发生牙周致病菌的再定植，且操作困难，易引起的反抗，存在一定的局限性。另外可以辅助局部或全身药物治疗，如采用阿莫西林、头孢氨苄、甲硝唑等抗生素类药物消除牙周致病菌，然而定期使用抗生素会导致口腔耐药菌株的产生。噬菌体是一种特异性感染细菌的病毒，是口腔微生态的重要组成部分，具有专一高效的杀菌能力，噬菌体疗法有望作为牙周辅助治疗的新策略。
3、噬菌体裂解酶是噬菌体产生的一种肽聚糖水解酶，当与靶细菌接触时可以快速水解其细胞壁中的肽聚糖成分而使细菌迅速裂解死亡。噬菌体裂解酶具有高度宿主特异性和强烈裂解活性，能识别并攻击宿主细胞壁的特定靶位点，导致细胞壁的局部破坏，最终使噬菌体颗粒从细菌细胞中释放出来。噬菌体裂解酶高度的特异性使其可针对特定的病原菌进行有效的治疗，而不会对其他微生物造成影响。近年来，噬菌体裂解酶作为一种新型的抗菌剂，被证实在体内外均有显著的杀菌作用，同时其生物膜清除能力也十分显著。由于裂解酶对其宿主细菌耐药可能性低、安全水平高和易于设计的独特优
4、cn116555230a本专利技术公开了一种肠炎沙门菌噬菌体裂解酶、制备方法及应用。该专利技术制备得到的肠炎沙门菌噬菌体裂解酶对不同来源不同血清型的沙门菌和大肠杆菌均有较高的裂解活性，对沙门菌及大肠杆菌表现出广谱杀菌活性，可以高效裂解不同来源不同血清型的沙门菌和大肠杆菌，有助于预防和治疗沙门菌及大肠杆菌所引起的疾病。
5、cn116355887a公开了一种链球菌前噬菌体裂解酶lys733及其应用。该专利技术专利技术从乳房链球菌hb-4基因组中克隆得到链球菌前噬菌体裂解酶lys733，采用原核表达方式，诱导表达出可溶的裂解酶。该专利技术所提供的链球菌前噬菌体裂解酶lys733对链球菌属内可致奶牛乳腺炎的无乳链球菌和停乳链球菌具有较为特异的抑菌效果，为预防和治疗无乳链球菌和停乳链球菌细菌感染的疾病奠定了基础。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403。本专利技术提供的具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403在体外对牙龈卟啉单胞菌，具核梭杆菌，伴放线放线聚集杆菌，粪肠球菌、变形链球菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌具有较好的裂解效果，能广谱裂解革兰氏阴性菌和阳性菌。
2、一种具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403，所述裂解酶lyspd403氨基酸序列如seq id no.1所示。
3、mtaleqldyvkkyfeplrgkkvefidfylqvlfpassmksehivfaksmklltstnekdtlkklrviayeqnrgldsnkdgviwkseidkkvqiymtkglaykenkfvcdktptsaktptsksvhpivslirkweyysgenatsstigefyvsddpsihgfiaepygpssiqsgqdkripvgeynlrwyisstygknkykkkniilkngfpnvynenvsaqrgilihignfgkdtvgcllpgnglmkrtingkevivgvsdsagafvklidyleskgienvklvisenyekidk(seq id no.1)。
4、优选的，所述裂解酶lyspd403的基因序列如seq id no.2所示。
5、atgacggccctggaacagctggattatgttaaaaaatactttgaaccgctgcgtggtaaaaaagttgaattcattgacttctatctgcaggtgctgttcccggcatcgagcatgaaatcagaacacatcgttttcgcgaaatcaatgaaactgctgacctcaaccaatgaaaaagataccctgaaaaaactgcgcgttattgcctacgaacagaatcgtggcctggattcgaacaaagacggcgttatctggaaaagcgaaatcgacaaaaaagtgcagatctatatgaccaaaggtctggcgtataaagaaaataaattcgtttgtgacaaaacgccgaccagcgcaaaaaccccgacgtcgaaatcagttcacccgatcgtgtcactgattcgcaaatgggaatattattcaggcgaaaatgcgacgtcaagcacgattggcgaattttatgtttcggacgatccgtcaatccacggcttcattgcggaaccgtatggtccgagcagcattcagagcggccaggataaacgtattccggtgggtgaatataacctgcgttggtatatttcatcaacctacggcaaaaacaaatacaaaaaaaaaaatatcattctgaaaaatggttttccgaacgtttacaacgaaaacgtttcagcccagcgcggtatcctgattcatatcggtaattttggcaaagacaccgtgggctgcctgctgccgggtaatggcctgatgaaacgtacgattaatggtaaagaagtgattgtgggtgtgtcagacagcgcaggtgcgttcgtgaaactgatcgactacctggaatcgaaaggcattgaaaatgttaaactggttatcagcgaaaactacgaaaaaattgacaaa(seq id no.2)。
6、本专利技术提供了上述的超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403的制备方法，包括如下步骤：
7、(1)、构建表达所述超广谱裂解活性的裂解酶的重组表达载体；
8、(2)、将步骤(1)中的重组表达载体转化入大肠杆菌感受态细胞，筛选得到表达所述超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403基因的工程菌；
9、(3)、对步骤(2)所得工程菌进行诱导表达，获得重组基因表达产物；
10、(4)、将步骤(3)所得重组基因表达产物经镍柱纯化分离，再用hepes缓冲液透析处理，得到所述超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403。
11、优选的，所述步骤(1)中的重组表达载体为原核表达载体pet28b-lyspd403。
12、优选的，所述步骤(2)中的大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌bl21(de3)。
13、优选的，所述步骤(3)中诱导表达所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有超广谱裂解活性的裂解酶LysPd403，其特征在于，所述裂解酶LysPd403氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的具有超广谱裂解活性的裂解酶LysPd403，其特征在于，所述裂解酶LysPd403的基因序列如SEQ ID NO.2所示。
3.如权利要求1或2所述的超广谱裂解活性的裂解酶LysPd403的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的重组表达载体为原核表达载体pET28b-LysPd403。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中诱导表达所用的诱导剂为异丙基β诱导-硫代半乳糖苷，诱导浓度为0.3-0.5mmol/L，诱导时间为14-16h，诱导表达温度为15-20℃。
7.如权利要求1或2所述的具有超广谱裂解活性的裂解酶LysPd403在裂解革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌中的
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阴性菌为牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、伴放线放线聚集杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌。
9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阳性菌为粪肠球菌、变形链球菌。
10.如权利要求1或2所述的具有超广谱裂解活性的裂解酶LysPd403在口腔抗感染药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403，其特征在于，所述裂解酶lyspd403氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.如权利要求1所述的具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403，其特征在于，所述裂解酶lyspd403的基因序列如seq id no.2所示。
3.如权利要求1或2所述的超广谱裂解活性的裂解酶lyspd403的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的重组表达载体为原核表达载体pet28b-lyspd403。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌bl21(de3)。
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【专利技术属性】
技术研发人员：危宏平，姚芳芳，杨航，李宇红，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：
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