【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制剂领域，具体涉及一种具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419及其应用。
技术介绍
1、牙周炎是发生于牙齿支持组织，由菌斑生物膜引起的慢性感染性炎症性疾病，是口腔最常见的疾病之一。主要以牙周附着丧失、牙槽骨吸收、牙齿松动及脱落为临床症状，是成人牙齿脱落的主要原因。牙周炎的基础治疗方法是用机械的手段清除牙齿周围的牙石、菌斑从而控制炎症，常常辅以局部或全身用药，但牙周致病菌的频繁定植和口腔耐药菌的出现对常规牙周炎的治疗方法提出了挑战。
2、噬菌体是一种可以感染细菌、真菌、放线菌等微生物的病毒，具有高度的特异性和破坏生物膜的能力。噬菌体疗法就是利用噬菌体的宿主专一性感染或裂解细菌从而治疗细菌感染的一种治疗方法。近年来随着抗生素耐药性的不断增强及超级细菌的出现，噬菌体疗法重新成为研究热点，并且成功用于治疗多种细菌感染性疾病。噬菌体疗法虽然在口腔领域中尚未得到广泛应用，但已有大量实验分离出与牙周致病菌相关的噬菌体用于牙周炎的治疗，为牙周炎的新疗法提供临床思路。噬菌体裂解酶又称内溶素，是一类细胞壁水解酶，通过消化细菌细胞壁中的肽聚糖从而释放组装好的噬菌体颗粒裂解细菌，可以解决传统活噬菌体存在宿主范围窄、噬菌体抗性等缺陷。目前用于牙周炎的报道较少，但已有一些研究证明噬菌体裂解酶对于控制口腔疾病起重要作用。有研究表明噬菌体裂解酶对变异链球菌和远缘链球菌有快速显著的杀菌作用。通过测定噬菌体裂解酶的基因组序列，确定它是第1个以变形链球菌为宿主的噬菌体，可作为预防及治疗口腔疾病的抗菌剂。
3、cn11135
4、cn114848804a公开了一种裂解酶lysp53在制备抗致龋菌产品中的应用。该专利技术提供的裂解酶lysp53对以变形链球菌为代表的致龋菌具有良好的抑制效果，并在口腔环境中能保持较高的酶活性，同时对致龋菌表现了良好抗菌性、特异性及生物相容性。该专利技术通过将裂解酶lysp53应用于抗致龋菌产品中，发现具有良好的抗龋作用且对其他口腔共生菌几乎没有杀灭效果，对口腔常见共生菌不产生负面影响，有利于维护口腔正常菌群稳态，在口腔护理领域具有重要的应用价值及广阔的市场前景。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于，提供一种具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419。本专利技术提供的具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419在体外对牙龈卟啉单胞菌，具核梭杆菌，伴放线放线聚集杆菌，粪肠球菌、变形链球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和鼠伤寒沙门氏菌具有较好的裂解效果，能广谱裂解革兰氏阴性菌和阳性菌。
2、一种具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419，所述裂解酶lyspd419氨基酸序列如seq id no.1所示。
3、mfitqakfklvfpqavkgiyptiaayaeeygldtkqkeamflaqcghetagftrfaenlnysadgllrvfpkyfnkhtaqqyarkpeaianrvyanrmnngdeasgdgwkyrgrgiiqvtgkknyqafeswvgervtpeslssdmdlcvlagfwywsvngldkisdivavtklinggtnglsdrkalyvnllg(seq id no.1)。
4、优选的，所述裂解酶lyspd419的基因序列如seq id no.2所示。
5、atgtttattacccaggcgaaattcaaactggtgtttccgcaggcggtgaaaggtatttatccgacgatcgcggcctacgcggaagaatacggtctggacacgaaacagaaagaagcgatgtttctggcgcagtgtggccatgaaaccgcaggctttacgcgcttcgcggaaaatctgaattactcagcggacggtctgctgcgcgttttcccgaaatatttcaacaaacatacggcccagcagtatgcacgcaaaccggaagcgatcgccaaccgcgtttacgcgaaccgtatgaataatggcgacgaagcctcaggtgatggttggaaatatcgtggtcgtggtattatccaggtgacgggcaaaaaaaattaccaggcattcgaaagctgggtgggtgaacgcgttacgccggaatcactgtcgagcgatatggacctgtgtgtgctggcgggtttttggtattggagcgtgaatggcctggacaaaatttcagacattgtggccgttacgaaactgatcaatggtggtaccaacggtctgagcgaccgtaaagccctgtatgttaacctgctgggc(seq id no.2)。
6、本专利技术还公开了上述的超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419的制备方法，包括如下步骤：
7、(1)、构建表达超广谱裂解活性的裂解酶的重组表达载体；
8、(2)、将步骤(1)中的重组表达载体转化入大肠杆菌感受态细胞，筛选得到表达超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419基因的工程菌；
9、(3)、对步骤(2)所得工程菌进行诱导表达，获得重组基因表达产物；
10、(4)、将步骤(3)所得重组基因表达产物经镍柱纯化分离，再用hepes缓冲液透析处理，得到所述超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419。
11、优选的，所述步骤(1)中的重组表达载体为原核表达载体pet28b-lyspd419。
12、优选的，所述步骤(2)中的大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌bl21(de3)。
13、优选的，所述步骤(3)中诱导表达所用的诱导剂为异丙基β-d-硫代半乳糖苷，诱导浓度为0.3-0.5mmol/l，诱导时间为14-16h，诱导表达温度为15-20℃。
14、本专利技术还公开了了上述具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419在裂解革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌中的应用。
15、优选的，所述革兰氏阴性菌为牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、伴放线放线聚集杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和鼠伤寒沙门氏菌。
16、优选的，所述革兰氏阳性菌为粪肠球菌、变形链球菌。
17、本专利技术还公开了上述具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419在口腔抗感染药物中的应用。
18、牙龈卟啉单胞菌，porphyromonas gingivalis，是一种革兰氏阴性细菌，通常被认为是牙周疾病的主要病原体本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有超广谱裂解活性的裂解酶LysPd419，其特征在于，所述裂解酶LysPd419氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的具有超广谱裂解活性的裂解酶LysPd419，其特征在于，所述裂解酶LysPd419的基因序列如SEQ ID NO.2所示。
3.如权利要求1或2所述的超广谱裂解活性的裂解酶LysPd419的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的重组表达载体为原核表达载体pET28b-LysPd419。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中诱导表达所用的诱导剂为异丙基β-D-硫代半乳糖苷，诱导浓度为0.3-0.5mmol/L，诱导时间为14-16h，诱导表达温度为15-20℃。
7.如权利要求1或2所述的具有超广谱裂解活性的裂解酶LysPd419在裂解革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌中的
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阴性菌为牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、伴放线放线聚集杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和鼠伤寒沙门氏菌。
9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述革兰氏阳性菌为粪肠球菌、变形链球菌。
10.如权利要求1或2所述的具有超广谱裂解活性的裂解酶LysPd419在口腔抗感染药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419，其特征在于，所述裂解酶lyspd419氨基酸序列如seq id no.1所示。
2.如权利要求1所述的具有超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419，其特征在于，所述裂解酶lyspd419的基因序列如seq id no.2所示。
3.如权利要求1或2所述的超广谱裂解活性的裂解酶lyspd419的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的重组表达载体为原核表达载体pet28b-lyspd419。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的大肠杆菌感受态细胞为大肠杆菌bl21(de3)。
6.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员：危宏平，姚芳芳，杨航，李宇红，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：
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