本发明专利技术涉及一种抗猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)感染的重组融合抗原基因、重组融合抗原蛋白及含有其的亚单位疫苗组合物，其是将PRRSV的具有截短N’端诱饵表位的糖蛋白GP5、连接序列以及膜蛋白M融合为重组基因序列并进行密码子优化后，所得的重组融合抗原基因利用重组杆状病毒表达系统进行体外表达，不仅可提升其重组融合抗原蛋白的产量，所得的重组融合抗原蛋白在应用于亚单位疫苗组合物时，可向经免疫的动物提供较佳的疫苗保护力又不具排毒与返毒风险。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种动物用的重组融合抗原基因、重组融合抗原蛋白及含有其的亚单位疫苗组合物，特别是涉及一种抗猪繁殖与呼吸综合症病毒感染的重组融合抗原基因、重组融合抗原蛋白及其在亚单位疫苗组合物的应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合症(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome；PRRS)于1987年首度在北美发现，之后数年陆续于全球养猪场爆发，对于养豬产业造成极大损失，因此如何防治PRRS成为全球养猪产业亟待解决的问题。各年龄层的猪只皆可能感染PRRS，除了造成猪只繁殖障碍之外，还会发生呼吸道症状并死亡。PRRS由猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus；PRRSV)感染所造成，此病毒隶属动脉病毒科(Arteriviridae)，含正向(+)单链RNA基因组，具有包膜，其病毒直径约为50-70nm。PRRSV的基因组总长为15kb，共有10个开放读码框(ORFs)。其中ORF5能够翻译出26kDa的糖化蛋白GP5，而ORF6则可翻译出19kDa的非糖化膜蛋白(unglycosylatedmembraneprotein；M)。目前市售PRRSV疫苗主要有三类，包括活毒减毒疫苗、死毒疫苗以及由大肠杆菌生产的亚单位疫苗。活毒减毒疫苗虽可同时诱发细胞性与体液性免疫反应，但其中和抗体力价偏低，保护效力不足且有排毒与返毒风险。死毒疫苗虽无返毒风险但只能诱发体液性免疫反应，需免疫两次才可达到保护效果，且对异源性病毒完全失去保护力。此外，目前并无确切数据显示由大肠杆菌生产的亚单位疫苗具备保护效力。有鉴于PRRSV为RNA病毒，其演化突变速度相当迅速，亟需开发一种安全、不有排毒与返毒风险且具免疫保护力的疫苗，以克服现有的疫苗的种种缺点。
技术实现思路
本专利技术的一方面是提供一种分离的核酸，其包含如序列编号(SEQIDNO.)：1所示的重组融合抗原基因，其中此重组融合抗原基因是将猪繁殖与呼吸综合症病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus；PRRSV)的具有截短N’端诱饵表位(truncatedN’-terminaldecoyepitope)的糖蛋白GP5、连接序列以及膜蛋白M融合为重组序列并进行密码子优化。其次，本专利技术的另一方面是提供一种重组病毒载体，其包含如SEQIDNO.：1所示的重组融合抗原基因。再者，本专利技术的又一方面是提供一种重组融合抗原蛋白，其包含如SEQIDNO.：1所示的重组融合抗原基因经重组杆状病毒表达系统表达的重组融合抗原蛋白，由此提升其重组融合抗原蛋白的表达量。本专利技术的再一方面是提供一种抗PRRSV感染的亚单位疫苗组合物，其包含如SEQIDNO.：1所示的重组融合抗原基因经重组杆状病毒表达系统表达的重组融合抗原蛋白及医药学上可接受的载剂，以提供较佳的疫苗保护力又不具排毒与返毒风险。根据本专利技术的上述方面，提出一种分离的核酸，其包含如序列编号(SEQIDNO.)：1所示的重组融合抗原基因。根据本专利技术的上述方面，另提出一种重组病毒载体，其包含如SEQIDNO.：1所示的重组融合抗原基因。根据本专利技术的上述方面，又提出一种重组融合抗原蛋白，其包含如SEQIDNO.：1所示的重组融合抗原基因经重组杆状病毒表达系统表达的重组融合抗原蛋白。根据本专利技术的上述方面，再提出一种抗PRRSV感染的亚单位疫苗组合物，其包含如SEQIDNO.：1所示的重组融合抗原基因经重组杆状病毒表达系统表达的重组融合抗原蛋白及医药学上可接受的载剂。依据本专利技术一实施例，上述的医药学上可接受的载剂包含佐剂及/或免疫增效剂。在一个例示中，前述免疫增效剂可例如为CpG增效剂，其序列如SEQIDNO.：2所示。应用本专利技术的抗PRRSV感染的重组融合抗原基因及其重组融合抗原蛋白，其是将PRRSV的具有截短N’端诱饵表位的糖蛋白GP5、连接序列以及膜蛋白M融合为重组融合抗原基因并将此序列进行密码子优化后，再利用重组杆状病毒表达系统进行体外表达，可提升其重组融合抗原蛋白的产量。所得的重组融合抗原蛋白在应用于亚单位疫苗组合物时，可提供较佳的疫苗保护力又不具排毒与返毒风险，从而有效改善现有的PRRSV抗原产量低落、免疫保护力不佳以及具排毒与返毒风险等种种问题。附图说明为了使本专利技术的上述和其它目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，提供附图详细说明如下：图1A绘示根据本专利技术一实施例的重组病毒载体的载体图谱。图1B示出根据本专利技术一实施例的重组载体经限制酶作用后的电泳分析照片。图2示出根据本专利技术一实施例的重组病毒载体经PCR反应后的产物的电泳分析照片。图3示出根据本专利技术一实施例的Hi-5细胞表达重组融合抗原蛋白的SDS-PAGE分析照片。图4示出根据本专利技术一实施例的Hi-5细胞表达重组融合抗原蛋白的Western印迹分析照片。具体实施方式承前所述，本专利技术提供一种抗PRRSV感染的重组融合抗原基因及其重组融合抗原蛋白，其是将PRRSV的具有截短N’端诱饵表位的糖蛋白GP5、连接序列以及膜蛋白M融合为重组融合抗原基因并将此序列进行密码子优化后，再利用重组杆状病毒表达系统进行体外表达，可提升其重组融合抗原蛋白的产量。本专利技术此处所称的「重组融合抗原基因」是指如序列编号(SEQIDNO.)：1所示的重组融合抗原基因序列。在一实施例中，将PRRSV的糖蛋白GP5的N’端诱饵表位截短后的基因序列，利用连接(linker)序列与膜蛋白M的基因序列融合为重组序列(或称为6LdN5)。具体言之，PRRSV的糖蛋白GP5与膜蛋白M为病毒包膜(envelope)的主要成分，二者形成以双硫键结合的双聚体，其含量至少占总病毒蛋白的1/2。糖蛋白GP5与膜蛋白M均能诱发保护性免疫反应并诱发宿主产生中和抗体，但位于糖蛋白GP5的N-末端处的诱饵表位(decoyepitope)约30个氨基酸会减低中和抗体的产生及其反应性，因此本专利技术的特征之一就是截去糖蛋白GP5的N’端诱饵表位第1个氨基酸至第10个氨基酸，形成「截短N’端诱饵表位」的糖蛋白GP5，利用连接序列与膜蛋白M融合为重组序列，并对此重组序列进行密码子优化，由此不仅增加后续于重组杆状病毒表达系统中的产量，所得的重组融合抗原蛋白经过真核表达系统的后翻译修饰后，也具有正确的三级结构及折叠。本专利技术此处所称的「连接序列」用以连接糖蛋白GP5以及膜蛋白M，其长度不限，可例如为6个碱基至30个碱基，然而以9个碱基至24个碱基为较佳，又以9个碱基至15个碱基为更佳。在一个例子中，所述连接序列可为12个碱基。本专利技术此处所称的「密码子优化」指在不改变原氨基酸序列的前提下，根据重组杆状病毒表达系统对各氨基酸密码子的喜好，进行密码子优化，使重组蛋白可以进行正确的后翻译修饰，发挥免疫保护效果。其理由在于，大肠杆菌虽然是目前最普遍的蛋白质表达系统，具有生长周期快、产量高本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的核酸，其包含序列编号SEQ ID NO.：1所示的重组融合抗原基因。
【技术特征摘要】
1.一种分离的核酸，其包含序列编号SEQIDNO.：1所示的重组融合
抗原基因。
2.一种重组病毒载体，其包含SEQIDNO.：1所示的重组融合抗原基
因。
3.一种重组融合抗原蛋白，其包含SEQIDNO.：1所示的重组融合抗
原基因经重组杆状病毒表达系统表达的重组融合抗原蛋白。
4.一种抗猪繁殖与呼吸综合症病毒PRRSV感染的亚单位疫苗组合物，
其包含SEQIDNO.：1所示的重组融合抗原...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴美莉，庄秀琪，柯冠铭，
申请(专利权)人：屏东科技大学，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71
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