日本血吸虫重组多表位抗原及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种日本血吸虫重组多表位抗原，该重组多表位抗原包含：SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.4四个表位多肽中任意两个以上表位多肽以任意顺序相互串联形成的氨基酸序列。本发明专利技术还公开了上述日本血吸虫重组多表位抗原在制备诊断血吸虫病的产品中的应用。本发明专利技术的日本血吸虫重组多表位抗原，作为诊断抗原诊断羊血吸虫病的敏感性可高达97.8％，特异性为100％，具有较高的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种日本血吸虫重组多表位抗原及其应用。
技术介绍
日本血吸虫病是我国一种重要的人畜共患寄生虫病。经过半个多世纪的努力，我国血防工作取得举世瞩目的成就，但血防工作仍然面临严峻的考验。2014年初，全国仍有血吸虫病人近20万例，钉螺面积365468hm2。流行病学调查显示，患病牛羊等大家畜是我国血吸虫病的主要传染源，在一些血吸虫病流行区域，羊群数量大，羊感染率往往高于其他动物，且其喜好活动在青草茂盛地点，也是钉螺适宜滋生地带，羊群活动范围大，粪便分散且不易清除，整个群体对血吸虫抵抗力低，在血吸虫病传播中扮演非常重要的角色。随着以控制传染源为主的综合防治策略的深入展开，人、牛作为传染源在血吸虫病传播中的作用将日益下降，但其他家畜(尤其羊)由于难以实施查治病、粪便管理等防治措施，在血吸虫病传播中的作用将日益凸显，极有可能成为未消灭钉螺地区疫情回升的重要隐患。诊断是血防工作的中心环节，疫情分析、防控措施制定等都需要准确诊断家畜血吸虫病。现有的诊断方法基本分为三类：病原学检测，血清学检测，分子生物学方面检测。病原学检测是确诊血吸虫病的“金标准”，随着大规模化疗的开展，病原学检测方法的检出率越来越低，且费工费时，操作繁琐。血清学检测提高了检测的敏感性，但其特异性，重复性等都不稳定，不能用于疗效考核。分子生物学检测，因其代价相对昂贵，应用于人血吸虫病诊断较多，家畜相对较少。日本血吸虫病血清学检测方法中最重要的试剂是检测用抗原，血防工作者一直致力于开发能制备简便、质量稳定的重组抗原以代替虫卵抗原。目前已经有上百个日本血吸虫基因重组抗原应用于血吸虫病的诊断，但效果均没有达到期望的效果。由于单个基因重组抗原敏感性差，所以混合抗原和多表位抗原是诊断用血吸虫重组抗原的研究方向。
技术实现思路
本专利技术要解决目前缺乏用于诊断血吸虫病的多表位抗原的技术问题，提供一种日本血吸虫重组多表位抗原，该重组多表位抗原可应用于血吸虫病的诊断，诊断效果良好，具有较高的敏感性和特异性。此外，还需要提供一种上述日本血吸虫重组多表位抗原的应用。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:在本专利技术的一个方面，提供了一种日本血吸虫重组多表位抗原，该重组多表位抗原包含：下述四个表位多肽中任意两个以上表位多肽以任意顺序相互串联形成的氨基酸序列，(1)SEQIDNO.1所示的SjRAD23表位多肽；(2)SEQIDNO.2所示的SjRAD23表位多肽；(3)SEQIDNO.3所示的SjPGM表位多肽；(4)SEQIDNO.4所示的Sj23表位多肽。优选的，所述重组多表位抗原包含：SEQIDNO.3所示SjPGM表位多肽和SEQIDNO.4所示Sj23表位多肽相串联形成的氨基酸序列，该氨基酸序列如SEQIDNO.21所示。更优选的，所述重组多表位抗原的基因序列包含SEQIDNO.22所示的核苷酸序列。优选的，所述重组多表位抗原包含：SEQIDNO.3所示SjPGM表位多肽、SEQIDNO.1所示SjRAD23表位多肽和SEQIDNO.4所示Sj23表位多肽相串联形成的氨基酸序列，该氨基酸序列如SEQIDNO.23所示。更优选的，所述重组多表位抗原的基因序列包含SEQIDNO.24所示的核苷酸序列。优选的，所述重组多表位抗原包含：SEQIDNO.2所示SjRAD23表位多肽、SEQIDNO.3所示SjPGM表位多肽和SEQIDNO.4所示Sj23表位多肽相串联形成的氨基酸序列，该氨基酸序列如SEQIDNO.25所示。更优选的，所述重组多表位抗原的基因序列包含SEQIDNO.26所示的核苷酸序列。在本专利技术的另一方面，还提供了上述日本血吸虫重组多表位抗原在制备诊断血吸虫病的产品中的应用。在本专利技术的另一方面，还提供了一种诊断血吸虫病的试剂盒，包含上述日本血吸虫重组多表位抗原。优选的，所述日本血吸虫重组多表位抗原包含SEQIDNO.21、SEQIDNO.23、或SEQIDNO.25所示氨基酸序列。本专利技术的日本血吸虫重组多表位抗原，作为诊断抗原诊断羊血吸虫病的敏感性可高达97.8％，特异性为100％，适于制备诊断血吸虫病的产品试剂。附图说明下面结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明。图1是本专利技术实施例1重组原核表达质粒rBSjPGM-BSj23/pET-28a(+)、rBSjPGM-BSjRAD23-1-BSj23/pET-28a(+)、rBSjRAD23-2-BSjPGM-BSj23/pET-28a(+)的构建示意图；图2是本专利技术实施例1重组原核表达质粒rBSjPGM-BSj23/pET-28a(+)、rBSjPGM-BSjRAD23-1-BSj23/pET-28a(+)、rBSjRAD23-2-BSjPGM-BSj23/pET-28a(+)双酶切鉴定结果图；图3是本专利技术实施例1重组原核表达质粒rBSjPGM-BSj23/pET-28a(+)、rBSjPGM-BSjRAD23-1-BSj23/pET-28a(+)、rBSjRAD23-2-BSjPGM-BSj23/pET-28a(+)PCR鉴定结果图；图4是本专利技术实施例1SDS-PAGE分析IPTG诱导重组原核质粒rBSjPGM-BSj23/pET-28a(+)、rBSjPGM-BSjRAD23-1-BSj23/pET-28a(+)、rBSjRAD23-2-BSjPGM-BSj23/pET-28a(+)的表达及纯化结果图。具体实施方式下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《精编分子生物学实验指南》(F.M.奥斯伯,R.E.金斯顿,J.G.塞德曼等主编，马学军,舒跃龙的译.北京：科学出版社，2004)中所述的方法进行。本专利技术应用生物信息学方法预测和筛选了日本血吸虫辐射敏感蛋白(SjRAD23)、磷酸甘油酸酯变位酶(SjPGM)的抗原表位多肽，共筛选到三个表位多肽，其中SjRAD23两个，SjPGM一个，应用PCR技术扩增筛选出的表位多肽对应的核酸序列，同时扩增日本血吸虫23KDa表膜蛋白大亲水区(LHD-Sj23),运用基因工程重组技术将该核苷酸扩增片段组合并重组到载体pET-28a(+)，构建重组多表位原核表达质粒。将重组原核表达质粒BSjPGM-BSj23/pET-28a(+)、BSjPGM-BSjRAD23-1-BSj23/pET-28a(+)和BSjRAD23-2-BSjPGM-BSj23/pET-28a(+)转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达并且纯化到重组蛋白。纯化得到的重组多表位抗原rBSjPGM-BSj23、rBSjPGM-BSjRAD23-1-BSj23和rBSjRAD23-2-BSjPGM-BSj23在羊血吸虫病的诊断中显示了良好的效果，获得较高敏感性和特异性，表明该重组多表位抗原具有较高的应用价值。实施例1日本血吸虫重组多表位抗原的表达和纯化1材料1.1质粒和菌株：pET-28a(+)原核表达质粒为本实验室留存，大肠杆菌DH5a,BL21(DE3)等购自北京全式金生物技术公司。1.2酶类及其它相关试剂:卡那霉素、IPTG、X-gal、谷胱甘肽、尿素等购自上海生工生物工程公司。DN本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种日本血吸虫重组多表位抗原，其特征在于，该重组多表位抗原包含：下述四个表位多肽中任意两个以上表位多肽以任意顺序相互串联形成的氨基酸序列，(1)SEQ ID NO.1所示的SjRAD23表位多肽；(2)SEQ ID NO.2所示的SjRAD23表位多肽；(3)SEQ ID NO.3所示的SjPGM表位多肽；(4)SEQ ID NO.4所示的Sj23表位多肽。

【技术特征摘要】
1.一种日本血吸虫重组多表位抗原，其特征在于，该重组多表位抗原包含：下述四个表位多肽中任意两个以上表位多肽以任意顺序相互串联形成的氨基酸序列，(1)SEQIDNO.1所示的SjRAD23表位多肽；(2)SEQIDNO.2所示的SjRAD23表位多肽；(3)SEQIDNO.3所示的SjPGM表位多肽；(4)SEQIDNO.4所示的Sj23表位多肽。2.根据权利要求1所述的日本血吸虫重组多表位抗原，其特征在于，所述重组多表位抗原包含：SEQIDNO.3所示SjPGM表位多肽和SEQIDNO.4所示Sj23表位多肽相串联形成的氨基酸序列，该氨基酸序列如SEQIDNO.21所示。3.根据权利要求1所述的日本血吸虫重组多表位抗原，其特征在于，所述重组多表位抗原包含：SEQIDNO.3所示SjPGM表位多肽、SEQIDNO.1所示SjRAD23表位多肽和SEQIDNO.4所示Sj23表位多肽相串联形成的氨基酸序列，该氨基酸序列如SEQIDNO.23所示。4.根据权利要求1所述的日本血吸虫重组多表位抗原，其特征在于，所述重组多表位...

【专利技术属性】
技术研发人员：林矫矫，吕超，傅志强，洪炀，陆珂，韩倩，曹晓丹，王涛，贾秉光，张祖航，宰金丽，窦雪峰，沈元曦，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31