本发明专利技术涉及一种抗恩拉霉素多克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液72ml、0.2moL/L磷酸二氢钠28ml于250mL三角瓶中，配成pH7．2的磷酸盐缓冲溶液(PBS)戊二醛溶液。本发明专利技术所述方法制备的抗原数量多、成本过低，经济效益好，可工业化生产，实用性强。
A preparation method of anti enduracidin polyclonal antibody
The invention relates to a preparation method of an anti enduracidin polyclonal antibody, which comprises the following steps: taking 0.2moL/L two sodium hydrogen phosphate solution 72ml, 0.2moL/L in 28ml sodium dihydrogen phosphate 250mL Erlenmeyer flask, with pH7.2 phosphate buffer solution (PBS) glutaraldehyde solution. The antigen prepared by the method of the invention has the advantages of high quantity, low cost, good economic benefit, industrialized production and strong practicability.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种拉恩拉霉素多克隆抗体的制备方法。
技术介绍
恩拉霉素又名恩霉素、安来霉素和持久霉素，该药是日本武田药品研究所于1966年由土壤中分离出来的放线菌经发酵产生的一种由不饱和脂肪酸和十二种氨基酸结合而成的多肽类抗生素，该药因具有很强的抗G+菌的作用，用作饲料添加剂能促进畜禽生长和提高饲料效率，且长期使用不易产生耐药性，与其它抗生素亦无交叉耐药，化学性能稳定，无致突、致畸、致癌作用，不易被吸收，残留极少，适口性好等优势，现已成为当前最具发展前景的兽用抗生素添加剂。我国于1988年农业部批准进口，但随着国内外养殖量的日益增加，饲养者为了追求产量，往往超量应用兽药、抗生素添加剂，造成动物性产品中有害化学残留物质日趋严重，这不仅加大了动物产品威胁人类健康的风险，也直接重创了我国动物产品出口贸易。因此，进出口动物性食品中的该药物的残留问题日益倍受关注，这就使建立恩拉霉素残留的快速测定方法并应用于畜禽产品的安控制具有重要性和必要性。目前，酶免疫测(EIA)中酶联免疫吸附测定法(EusA)，因其较传统的微生物检测法、理化检测法具有简洁、快速、廉价、特异性强、灵敏度高等优点，已经被国内外广泛地应用于兽药残留的检测中，但至今国内外尚无有关恩拉霉素酶免疫检测技术报道，仅日本厚生省对该项残留物质有畜、水产性食品有常规检测技术报道。
技术实现思路
本专利技术提出一种可快速检测恩拉霉素的恩拉霉素多克隆抗体的制备方法。一种抗恩拉霉素多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：（1）取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液72ml、0.2moL/L磷酸二氢钠28ml于250mL三角瓶中，配成pH7．2的磷酸盐缓冲溶液(PBS)戊二醛溶液；（2）用移液管吸取0．25mL戊二醛，将其配成100mL溶液，得0．25％的戊二醛溶液；（3）透析袋处理液：配制含碳酸钠10g/L及乙二胺四乙酸二钠(EDTA)lmoL/L的碱性EDTA溶液；（4）1％琼脂糖配制：取15g琼脂糖，加100mLpH7．1磷酸盐缓冲液内，置水浴充分溶解，加入1mLl％硫柳汞，待冷至45～50℃时，滴加到洁净载玻片上，待凝固放人带盖的瓷盘中备用；（5）用孔径3mm的打孔在器在琼脂载玻片上下平行打孔，孔距2．5mm；（6）分别称取20mgEr盛于100mL锥形瓶中和20mgBsA置于5号试管中，并向试管中加入配好的PBs溶液约3mL，待BSA完全溶解后转移到有Er的锥形瓶中，再用PBs洗涤试管且将BsA完全移入锥形瓶，待Er溶解后，向锥形瓶中加入l，4-二氧六环10mL，混匀。将磁力搅拌子放入反应器后把锥形瓶放在一个含少量水的大烧杯中，再将烧瓶置于25℃水浴，开启搅拌器，约5min后，保持搅拌状态；（7）向反应器内逐滴加O．25％戊二醛溶液5mL，滴加完毕后仍保持搅拌状态，反应4h以上；然后将反应液装入透析代中用碱性透析液(碳酸钠10g/L，EDTAlmoL/L)透析72h，每4h换液一次，透析后离心，上清液冷冻干燥，4℃保存。；（8）抗原和弗氏完全佐剂或不完全佐剂以1：1的比例乳化；（9）包被抗原的合成反应过程同上，只需将BsA换成0VA即可。优选地，所述包被抗原的合成反应过程同上，只需将BsA换成0VA即可。本专利技术所述方法制备的抗原数量多、成本过低，经济效益好，可工业化生产，实用性强。具体实施方式实施例1。一种抗恩拉霉素多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：（1）取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液72ml、0.2moL/L磷酸二氢钠28ml于250mL三角瓶中，配成pH7．2的磷酸盐缓冲溶液(PBS)戊二醛溶液；（2）用移液管吸取0．25mL戊二醛，将其配成100mL溶液，得0．25％的戊二醛溶液；（3）透析袋处理液：配制含碳酸钠10g/L及乙二胺四乙酸二钠(EDTA)lmoL/L的碱性EDTA溶液；（4）1％琼脂糖配制：取15g琼脂糖，加100mLpH7．1磷酸盐缓冲液内，置水浴充分溶解，加入1mLl％硫柳汞，待冷至45～50℃时，滴加到洁净载玻片上，待凝固放人带盖的瓷盘中备用；（5）用孔径3mm的打孔在器在琼脂载玻片上下平行打孔，孔距2．5mm，（6）分别称取20mgEr盛于100mL锥形瓶中和20mgBsA置于5号试管中，并向试管中加入配好的PBs溶液约3mL，待BSA完全溶解后转移到有Er的锥形瓶中，再用PBs洗涤试管且将BsA完全移入锥形瓶，待Er溶解后，向锥形瓶中加入l，4-二氧六环10mL，混匀。将磁力搅拌子放入反应器后把锥形瓶放在一个含少量水的大烧杯中，再将烧瓶置于25℃水浴，开启搅拌器，约5min后，保持搅拌状态；（7）向反应器内逐滴加O．25％戊二醛溶液5mL，滴加完毕后仍保持搅拌状态，反应4h以上；然后将反应液装入透析代中用碱性透析液(碳酸钠10g/L，EDTAlmoL/L)透析72h，每4h换液一次，透析后离心，上清液冷冻干燥，4℃保存。；（8）抗原和弗氏完全佐剂或不完全佐剂以1：1的比例乳化；实施例2。一种抗恩拉霉素多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：（1）取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液72ml、0.2moL/L磷酸二氢钠28ml于250mL三角瓶中，配成pH7．2的磷酸盐缓冲溶液(PBS)戊二醛溶液；（2）用移液管吸取0．25mL戊二醛，将其配成100mL溶液，得0．25％的戊二醛溶液；（3）透析袋处理液：配制含碳酸钠10g/L及乙二胺四乙酸二钠(EDTA)lmoL/L的碱性EDTA溶液；（4）1％琼脂糖配制：取15g琼脂糖，加100mLpH7．1磷酸盐缓冲液内，置水浴充分溶解，加入1mLl％硫柳汞，待冷至45～50℃时，滴加到洁净载玻片上，待凝固放人带盖的瓷盘中备用；（5）用孔径3mm的打孔在器在琼脂载玻片上下平行打孔，孔距2．5mm，（6）分别称取20mgEr盛于100mL锥形瓶中和20mgBsA置于5号试管中，并向试管中加入配好的PBs溶液约3mL，待BSA完全溶解后转移到有Er的锥形瓶中，再用PBs洗涤试管且将BsA完全移入锥形瓶，待Er溶解后，向锥形瓶中加入l，4-二氧六环10mL，混匀。将磁力搅拌子放入反应器后把锥形瓶放在一个含少量水的大烧杯中，再将烧瓶置于25℃水浴，开启搅拌器，约5min后，保持搅拌状态；（7）向反应器内逐滴加O．25％戊二醛溶液5mL，滴加完毕后仍保持搅拌状态，反应4h以上；然后将反应液装入透析代中用碱性透析液(碳酸钠10g/L，EDTAlmoL/L)透析72h，每4h换液一次，透析后离心，上清液冷冻干燥，4℃保存；（8）抗原和弗氏完全佐剂或不完全佐剂以1：1的比例乳化后即得。一种抗恩拉霉素多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：（1）取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液72ml、0.2moL/L磷酸二氢钠28ml于250mL三角瓶中，配成pH7．2的磷酸盐缓冲溶液(PBS)戊二醛溶液；（2）用移液管吸取0．25mL戊二醛，将其配成100mL溶液，得0．25％的戊二醛溶液；（3）透析袋处理液：配制含碳酸钠10g/L及乙二胺四乙酸二钠(EDTA)lmoL/L的碱性EDTA溶液；（4）1％琼脂糖配制：取15g琼脂糖，加100mLpH7．1磷酸盐缓冲液内，置水浴充分溶解，加入1m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗恩拉霉素多克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液72ml、0.2moL/L磷酸二氢钠28ml于250mL三角瓶中，配成pH7．2的磷酸盐缓冲溶液(PBS)戊二醛溶液；（2）用移液管吸取0．25mL戊二醛，将其配成100mL溶液，得0．25％的戊二醛溶液；（3）透析袋处理液：配制含碳酸钠10g/L及乙二胺四乙酸二钠(EDTA)lmoL/L的碱性EDTA溶液；（4）1％琼脂糖配制：取15g琼脂糖，加100mLpH7．1磷酸盐缓冲液内，置水浴充分溶解，加入1mLl％硫柳汞，待冷至45～50℃时，滴加到洁净载玻片上，待凝固放人带盖的瓷盘中备用；（5）用孔径3mm的打孔在器在琼脂载玻片上下平行打孔，孔距2．5mm；（6）分别称取20mgEr盛于100mL锥形瓶中和20mgBsA置于5号试管中，并向试管中加入配好的PBs溶液约3mL，待BSA完全溶解后转移到有Er的锥形瓶中，再用PBs洗涤试管且将BsA完全移入锥形瓶，待Er溶解后，向锥形瓶中加入l，4‑二氧六环10mL，混匀；将磁力搅拌子放入反应器后把锥形瓶放在一个含少量水的大烧杯中，再将烧瓶置于25℃水浴，开启搅拌器，约5min后，保持搅拌状态；（7）向反应器内逐滴加O．25％戊二醛溶液5mL，滴加完毕后仍保持搅拌状态，反应4h以上；然后将反应液装入透析代中用碱性透析液(碳酸钠10g/L，EDTAlmoL/L)透析72h，每4h换液一次，透析后离心，上清液冷冻干燥，4℃保存；（8）抗原和弗氏完全佐剂或不完全佐剂以1：1的比例乳化；（9）包被抗原的合成反应过程同上，只需将BsA换成0VA即可。...
【技术特征摘要】
1.一种抗恩拉霉素多克隆抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液72ml、0.2moL/L磷酸二氢钠28ml于250mL三角瓶中，配成pH7．2的磷酸盐缓冲溶液(PBS)戊二醛溶液；（2）用移液管吸取0．25mL戊二醛，将其配成100mL溶液，得0．25％的戊二醛溶液；（3）透析袋处理液：配制含碳酸钠10g/L及乙二胺四乙酸二钠(EDTA)lmoL/L的碱性EDTA溶液；（4）1％琼脂糖配制：取15g琼脂糖，加100mLpH7．1磷酸盐缓冲液内，置水浴充分溶解，加入1mLl％硫柳汞，待冷至45～50℃时，滴加到洁净载玻片上，待凝固放人带盖的瓷盘中备用；（5）用孔径3mm的打孔在器在琼脂载玻片上下平行打孔，孔距2．5mm；（6）分别称取20mgEr盛于100mL锥形瓶中和20mgBsA置于5号试管中，并向试管中加入配好...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝青，
申请(专利权)人：陕西玉航电子有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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