鸭RIG-1多克隆抗体及其制备方法技术

本发明专利技术提供了如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和如SEQ ID NO:3所示的多肽以及利用这些多肽制备鸭RIG‑1多克隆抗体的方法及所得多克隆抗体。本发明专利技术所得抗体可达到进行Western Blot检测和免疫组化检测的要求，可定性和定量检测鸭组织中的RIG‑1。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体涉及鸭RIG-1多克隆抗体及其制备方法。
技术介绍
天然免疫系统是动物抵御病原入侵的第一道防线，模式识别受体(pattern-recognition receptors，PRRs)是天然免疫系统的重要成分，在动物机体的抗病毒免疫反应中发挥重要作用。一系列模式识别受体(pattern-recognition receptors，PRRs)对病原体的识别启动了机体的抗病毒免疫机制。PRRs主要包括膜结合受体，如Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)，另一类是细胞内模式识别受体，包括核苷酸寡聚化域样受体(nucleotide binding oligomerization domain-like receptors，NLRs)和维甲酸诱导基因I样受体(the retinoic acid inducible gene-I-like receptors，RLRs)。维甲酸诱导基因1(RIG-1)是RLRs家族的重要成员，属于胞内识别受体，能有效地识别逃避细胞膜上TLRs识别而入侵到细胞质中的病毒RNA，通过信号通路级联放大作用诱导细胞因子、趋化因子和干扰素(Interferon,IFN)等的产生。从目前的研究来看，RIG-1可能是水禽类动物或鸽子能抵抗流感病毒的原因之一。然而，现有的相关研究还不多。虽然有少量研究发现在一些物种上的RIG-1对于禽流感病毒和法氏囊病病毒具有一些联系，但由于缺乏相应的对RIG-1天然蛋白的检测手段，阻碍了进一步的研究。因此，寻求一种能够用于鸭组织RIG-1的定性和定量检测的多克隆抗体，对于研究鸭的抗病毒免疫系统及开发相应医药用产品而言显得极为迫切。
技术实现思路
针对现有技术的缺点，本专利技术的目的之一在于提供一种分离的多肽，该多肽的序列如SEQ ID NO:1所示。本专利技术的另一目的在于提供提供一种分离的多肽，该多肽的序列如SEQ ID NO:2所示。本专利技术的另一目的在于提供提供一种分离的多肽，该多肽的序列如SEQ ID NO:3所示。本专利技术的另一目的在于提供编码上述任一多肽的多核苷酸序列。本专利技术的另一目的在于提供一种制备鸭RIG-1多克隆抗体的方法，该方法包括使用上述任一种分离的多肽免疫哺乳动物。如本专利技术的一个实施例所示，本专利技术所得的多克隆抗体可以用于Western Blot检测和免疫组化检测，可以用于后续更为深入的研究和相应产品的开发。在一个具体实施例中，所述方法包括如下步骤：(1)人工合成多肽，所述多肽的序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示；(2)纯化多肽； (3)使用所得多肽免疫哺乳动物，并从哺乳动物中纯化抗体，得到所述多克隆抗体。值得指出的是，本专利技术对于人合成所述多肽的方法并无特别的限制。本专利技术实施例中的合成方法仅仅提供其中的一种具体方法，本领域技术人员可以在本专利技术的基础上，对各步骤参数进行合理的调整。本专利技术的另一个目的在于提供由上述方法制备得到的多克隆抗体。本专利技术的有益效果：本专利技术所得抗体可达到进行Western Blot检测和免疫组化检测的要求，可定性和定量检测鸭组织中的RIG-1。附图说明图1为血清Western Blot实验和Block验证实验结果图；图2为兔血清RIG-1多克隆抗体纯化图；图3为纯化抗体蛋的Western Blot检测结果；图4为免疫组化实验结果，其中，(1)图A～D为1日龄法氏囊组织，B、D分别为A、C的阴性对照，A、B放大倍数为200，C、D放大倍数为400；(2)图E～H为4周龄法氏囊组织，F、H分别为E、G的阴性对照，E、F放大倍数为200，G、H放大倍数为400；(3)图I～J为4周龄脾脏组织，J、L分别为I、K的阴性对照，I、J放大倍数为200，K、L放大倍数为400。具体实施方式下面通过实施例对本专利技术进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本专利技术进行进一步的说明，不能理解为对本专利技术保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
技术实现思路
所做出的 一些非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。本专利技术的实施除非另外说明，将使用本领域技术人员已知的化学、生物化学和免疫学的常规方法。这些技术在文献中有完整的解释。参见，如《基础免疫学》(Fundamental Virology)，第二版，第I和II卷(B.N.Fields和D.M.Knipe编)；《实验免疫学手册》(Handbook of Experimental Immunology)，第I-IV卷(D.M.Weir和C.C.Blackwell编，Blackwell Scientific Publications)；T.E.Creighton，《蛋白质：结构和分子特性》(Proteins：Structures and Molecular properties)(W.H.Freeman and Company，1993)；A.L.Lehninger，《生物化学》(Biochemistry)(Worth Publishers，Inc.最新版)；Sambrook等，《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning：a Laboratory Manual)，第二版，1989；《酶学方法》(Methods in Engymology)(S.Colowick和N.Kaplan编，Academic Press，Inc.)。实施例1多肽的合成 设计并在体外合成3段多肽序列，分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:1所示。具体步骤如下；1、树脂的称取：将称取好的树脂放入反应柱里面，然后用DCM溶胀半个小时。DCM加的量为树脂高度的2～3倍，也就是把树脂充分溶胀完全。可以微量鼓气。2、去保护：先把DCM抽干，然后用DMF洗涤3遍，去除DCM， 然后用20％六氢吡啶去保护，5+10即共两遍，第一遍5分钟，第二遍10分钟，中间用DMF洗涤一遍。3、去保护后洗涤：用DMF洗涤6遍。4、偶联：按照3倍量投氨基酸，如0.2mmol的树脂，我们投氨基酸的量为0.2mmol*3＝0.6mmol乘以其分子量就是要称取的质量。此外我们还要称取激活剂。5、偶联时检测：用滴管取树脂(少许，约15粒左右，只要检测可以辨认即可)与小试管中，分别滴加2滴A液、2滴B液、2滴C液，放到加热3分钟。然后取出来看树脂是否透明，如溶液颜色深影响观察，可以倒掉溶液，加少许DMF洗净，再观察。若树脂检测透明，即可以偶联下一个氨基酸。若树脂不透明，延长反应时间，若还不透明，可以进行复投。一定要保证每一步都反应完全再偶联下一个氨基酸。6、偶联后洗涤：偶联完毕后，DMF洗涤3遍。7、以上是偶联一个氨基酸的步骤，接下来依稀依次类推，也就是重复第3步骤——第6步过程直到最后一个氨基酸偶联完毕。8、最后一个氨基酸偶联好后，再去保护，去保护完后收缩，DMF洗涤3遍，DCM3遍，甲醇3遍，抽干肽树脂。9、称取完成的干肽树脂，装入15ml或50ml的离心管中，加入裂解液(每克10倍ml)如：1g肽树脂加10ml的裂解液。反应2个小时，每10～15分钟摇荡一下，让其充分反应，可放入摇床中。温度最好控制再25本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽的序列如SEQ ID NO:1所示。

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽的序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽的序列如SEQ ID NO:2所示。3.一种分离的多肽，其特征在于，所述多肽的序列如SEQ ID NO:3所示。4.分离的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列编码权利要求1-3任一项所述的多肽。5.一种制备鸭RIG-1多克隆抗体的方法，其特征在于，所述方...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘贺贺，罗俊，张涛，王继文，李亮，韩春春，甘心梦，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51