重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，所述活载体疫苗包含H9亚型禽流感病毒HA基因和传染性法氏囊病病毒VP2基因，并稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白和传染性法氏囊病病毒VP2蛋白。本发明专利技术还公开了上述重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗的应用。本发明专利技术的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，在免疫动物体内，可以诱导良好的免疫应答，具有血清Ⅲ型MDV疫苗株的弱毒特征，可作为禽流感、传染性法氏囊病和马立克氏病三价活载体疫苗，具有很好的应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种稳定表达H9亚型禽流感病毒HA基因与传染性法氏囊VP2基因的重组火鸡疱疹病毒(rHVT)活载体疫苗及其应用。

技术介绍

[0002]禽流感是由禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)引起禽类感染的一种急性接触性传染病。禽流感病毒属于正粘病毒科A型流感病毒属，根据OIE的分类标准，依病毒的毒力和致病力强弱不同，可将禽流感病毒分为高致病力禽流感病毒和低致病力禽流感病毒，H9N2病毒属于低致病性亚型禽流感病毒。
[0003]H9N2流感病毒是目前在全球范围流行的一种低致病性禽流感病毒，可以感染包括鸡、鸭、鹌鹑等禽类。H9N2亚型禽流感病毒与其他病原体共同感染可以引起产蛋量减少、死亡率增高，造成了巨大的经济损失。目前主要通过免疫的方式防止鸡感染H9N2，目前使用的H9N2疫苗是灭活疫苗，包括单苗、多价灭活苗等类型。然而，由于灭活疫苗不能有效刺激细胞免疫与粘膜免疫，导致使用灭活疫苗免疫后并不能完全阻止H9N2感染，导致病毒在免疫压力下，持续变异，不利于H9N2病毒的防控。
[0004]传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的，损害鸡的免疫器官，引起免疫抑制疾病。IBDV在全世界范围内流行，疫苗免疫是防控IBD的主要手段。目前常用的疫苗为重组活疫苗、减毒活疫苗与灭活疫苗。目前变异型IBDV在国内与国外广泛流行，给禽养殖行业带来巨大的经济损失，急需研制针对变异型IBDV的新型疫苗。
[0005]马立克氏病(MD)是一种由马立克氏病病毒(MDV)引起的鸡的淋巴增殖性疾病。由于火鸡疱疹病毒(HVT)与MDV病毒具有一定的进化亲缘关系，而且HVT对鸡没有致病性，HVT一直被广泛用于预防MDV强毒(vMDV)感染。但目前仍缺乏安全高效的预防MDV强毒感染的活疫苗。

技术实现思路

[0006]本专利技术要解决目前缺乏能同时预防H9亚型禽流感病毒、传染性法氏囊病毒和马立克氏病毒感染的安全有效疫苗的技术问题，提供一种重组火鸡疱疹病毒(HVT)活载体疫苗，该疫苗不仅稳定表达H9亚型禽流感病毒主要抗原蛋白HA，而且稳定表达传染性法氏囊病毒VP2抗原蛋白，在免疫动物体内，可以诱导良好的体液免疫与细胞免疫应答，适用于作为禽流感、传染性法氏囊病和马立克氏病的三价活载体疫苗。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:
[0008]在本专利技术的一个方面，提供了一种重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，所述活载体疫苗包含H9亚型禽流感病毒HA基因和传染性法氏囊病病毒VP2基因，并稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白和传染性法氏囊病病毒VP2蛋白。
[0009]所述重组火鸡疱疹病毒的基因组含有表达低致病性H9亚型禽流感病毒HA蛋白的基因、表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的基因及CMV真核启动子。
[0010]在一个具体实施方式中，所述重组火鸡疱疹病毒(rHVT)稳定表达H9亚型禽流感病毒HA基因与传染性法氏囊病病毒VP2基因。
[0011]在一个具体实施方式中，所述重组火鸡疱疹病毒(rHVT)利用CMV启动子与polyA尾同时表达H9亚型禽流感病毒HA基因与传染性法氏囊病病毒VP2基因。
[0012]在一个具体实施方式中，所述重组火鸡疱疹病毒(rHVT)中，H9亚型禽流感病毒HA基因的插入位置为火鸡疱疹病毒的UL区域；传染性法氏囊病病毒VP2基因的插入位置为火鸡疱疹病毒的US区域。
[0013]优选的，所述H9亚型禽流感病毒HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述H9亚型禽流感病毒HA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0014]优选的，所述传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述传染性法氏囊病病毒VP2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0015]在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗在制备预防和/或治疗禽流感、传染性法氏囊病、和马立克氏病的疫苗中的应用。
[0016]本专利技术的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，是利用火鸡疱疹病毒为活载体，构建表达禽流感病毒与传染性法氏囊病毒的主要免疫保护性抗原基因的重组活载体疫苗，在靶动物体内，该类重组活载体疫苗，可以诱导良好的体液免疫与细胞免疫应答，可以弥补常规灭活疫苗不能有效激活细胞免疫的缺陷。本专利技术获得的活载体疫苗(rHVT
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H9
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VP2)具有血清Ⅲ型MDV疫苗株的弱毒特征，可作为禽流感、传染性法氏囊病和马立克氏病三价活载体疫苗，具有很好的应用前景。
附图说明
[0017]图1是本专利技术实施例2的PCR检测rHVT
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VP2中的HA与VP2基因结果图；
[0018]图2是本专利技术实施例2的rHVT
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VP2表达HA蛋白的免疫荧光图；
[0019]图3是本专利技术实施例2的rHVT
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VP2表达VP2蛋白的免疫荧光图；
[0020]图4是本专利技术实施例3的rHVT
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VP2免疫鸡产生H9抗体效价结果图；
[0021]图5是本专利技术实施例3的rHVT
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H9
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VP2免疫鸡产生IBDV抗体效价结果图。
具体实施方式
[0022]本专利技术利用火鸡疱疹病毒为活载体，构建表达H9亚型禽流感病毒HA基因与传染性法氏囊病毒VP2基因的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗(rHVT
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VP2)，在靶动物体内，该类重组活载体疫苗，可以诱导良好的体液免疫与细胞免疫应答，可以弥补常规灭活疫苗不能有效激活细胞免疫的缺陷。本专利技术的活载体疫苗具有血清Ⅲ型MDV疫苗株的弱毒特征，可作为禽流感、传染性法氏囊病毒和马立克氏病三价活载体疫苗。
[0023]所述rHVT
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VP2能稳定地表达禽流感病毒HA蛋白于其细胞膜上。
[0024]本专利技术rHVT
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VP2表达的HA与VP2蛋白，包括本领域所公认的任何禽流感病毒的HA与VP2蛋白，包括但不限于HA与VP2蛋白，还包括其它禽类病原的主要保护抗原基因。
[0025]本专利技术的HA蛋白也包括其类似物或突变蛋白，或其片段。术语“类似物”和“突变蛋白”指参照分子的生物活性衍生物，或这些衍生物保留所需活性(如免疫反应性)的片段。通常，术语“类似物”指具有天然多肽序列和结构，以及相对于天然分子的一个或多个氨基酸
添加、取代(通常性质保守)和/或缺失的化合物，只要修饰不破坏免疫原性的活性。术语“突变蛋白”指具有一种或多种肽模拟物(“类肽”)的肽。优选类似物或突本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述活载体疫苗包含H9亚型禽流感病毒HA基因和传染性法氏囊病病毒VP2基因，并稳定表达H9亚型禽流感病毒HA蛋白和传染性法氏囊病病毒VP2蛋白。2.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述H9亚型禽流感病毒HA基因在病毒活载体中的插入位置为火鸡疱疹病毒的UL区域。3.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述传染性法氏囊病病毒VP2基因在病毒活载体中的插入位置为火鸡疱疹病毒的US区域。4.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述H9亚型禽流感病毒HA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。5.如权利要求1所述的重组火鸡疱疹病毒活载体疫苗，其特征在于，所述H9亚型禽流感病毒HA基因的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：李泽君，刘芹防，张志飞，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所，
类型：发明
国别省市：