一种噬菌体展示表达圆环病毒抗原疫苗的制备方法技术

本发明专利技术提供一种噬菌体展示表达圆环病毒抗原疫苗的制备方法，包括以下步骤：提取猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)RNA，反转录，聚合酶链式反应(PCR)扩增获取猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因开放阅读框片段，并铆定定向插入T4噬菌体；利用免疫筛选的方法获取具有ORF2基因的T4噬菌体；经纯化后重新侵染X-Blue ST1(CCTCC M 2014397)宿主细胞；发酵培养获得的X-BlueST1宿主细胞，诱导表达灭活后培养物作为抗原；ELISA标定抗原效价，并用生理盐水倍比稀释抗原终浓度为107U/ml；1:2.5的比例加入疫苗佐剂，即为疫苗。本发明专利技术利用噬菌体表达猪圆环病毒Ⅱ型抗原并制备疫苗，避免了弱毒疫苗毒力返强风险，且采用发酵培养利于大规模工业化生产，成本远低于通过细胞培养的方式生产疫苗。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供，包括以下步骤：提取猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)RNA，反转录，聚合酶链式反应(PCR)扩增获取猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因开放阅读框片段，并铆定定向插入T4噬菌体；利用免疫筛选的方法获取具有ORF2基因的T4噬菌体；经纯化后重新侵染X-Blue ST1(CCTCC M 2014397)宿主细胞；发酵培养获得的X-BlueST1宿主细胞，诱导表达灭活后培养物作为抗原；ELISA标定抗原效价，并用生理盐水倍比稀释抗原终浓度为107U/ml；1:2.5的比例加入疫苗佐剂，即为疫苗。本专利技术利用噬菌体表达猪圆环病毒Ⅱ型抗原并制备疫苗，避免了弱毒疫苗毒力返强风险，且采用发酵培养利于大规模工业化生产，成本远低于通过细胞培养的方式生产疫苗。CCTCC M 201439720140901【专利说明】
本专利技术属于生物
，特别涉及一种噬菌体展示表达圆环病毒抗原疫苗的制 备方法。
技术介绍
猪圆环病毒感染是由圆环病毒引起的猪的一种急性传染病。主要特征为消瘦、体 质下降、贫血、黄疸、腹泻、发育不良、呼吸困难、母猪繁殖障碍的。伴有广泛的病理化本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种噬菌体展示表达圆环病毒抗原疫苗的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：提取猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)病毒培养液RNA，反转录，聚合酶链式反应(PCR)扩增获取猪Ⅱ型圆环病毒ORF2开放阅读框基因片段，制成改造后的ORF2基因片段，然后将所述猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因片段铆定定向插入T4噬菌体；利用所述T4噬菌体侵染X‑Blue ST1CCTCC M2014397宿主细胞，原核表达OFR2基因重组蛋白，并免疫动物制备多抗，利用制备的猪圆环病毒Ⅱ型多抗对插入ORF2基因片段的所述噬菌体进行免疫筛选，获取阳性克隆斑，扩增并测序鉴定插入序列的正确性；获取具有正确插入ORF2基因的T4噬菌体；经纯化后...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李明义，高江明，刘阳，李晓林，单学强，张伦，冯晶晶，李佳棋，孙化露，葛栋，郭春丽，
申请(专利权)人：山东信得科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37