本发明专利技术提供了包含与OX40L多肽一起的免疫原性多肽或抗原并在体内或体外共表达的载体，所述载体用作基因佐剂。免疫原性多肽与OX40L多肽一起引发动物或人的免疫反应，所述免疫反应大于由免疫原性多肽单独引发的免疫反应。在一个具体的实例中，本发明专利技术提供了编码狂犬病病毒G免疫原性多肽和犬OX40L基因佐剂的载体，所述载体在犬中引发抗狂犬病病毒的强免疫反应。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达狂犬病病毒和OX40蛋白的重组痘病毒载体及从其制造的疫苗其它申请的交叉参考本申请要求2012年2月14日提交的美国临时专利申请61/598,610的优先权，将所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。专利
本专利技术总地来说涉及病毒疫苗和使用所述疫苗的方法。更具体地，本专利技术涉及病毒载体，所述病毒载体可包含一种或多种基因佐剂，从而导致对由载体(有利地病毒载体)中的基因所表达的抗原的增强的免疫反应。背景狂犬病是可在所有温血动物物种中发生并且由狂犬病病毒引起的疾病。在几乎所有情况下狂犬病病毒感染后临床特征的爆发导致感染物种的死亡。狂犬病病毒是弹状病毒科的非分段型负链RNA病毒。狂犬病病毒病毒体由两个主要结构组分组成：核衣壳或核糖核蛋白(RNP)和以围绕RNP核心的双层膜形式存在的包膜。所有弹状病毒的感染性组分是RNP核心，其由与两个次要蛋白质即RNA依赖性RNA聚合酶(L)和磷蛋白(P)组合的核衣壳(N)蛋白包裹的RNA基因组组成。围绕RNP核心的膜由两种蛋白质：跨膜糖蛋白(G)和位于膜的内部位置的基质(M)蛋白组成。也称为突起蛋白(spikeprotein)的G蛋白负责狂犬病病毒的细胞粘附和膜融合，并且还是宿主免疫系统的主要靶。已鉴定G蛋白的位置330至340上的氨基酸区域(称为抗原性位点III)负责该病毒的毒力，特别地位置333上的Arg残基。所有狂犬病病毒株都具有该毒力决定抗原位点III。用于伴侣动物的常规狂犬病疫苗包含灭活的狂犬病病毒+佐剂，其在本领域是公知的，并且在性质上是多样的。佐剂可以例如包括不溶于水的无机盐、脂质体、胶束或乳剂，即弗氏佐剂。其它佐剂可见于Vogel和Powell,1995，上文中提及的。尽管不存在单一的佐剂作用机制，但基本特征是相比于由单独的疫苗抗原诱发的反应而言它们有显著增强对疫苗抗原的免疫反应的能力(Nossal,1999,同上；Vogel和Powell,1995,同上)。在这一点上，一些佐剂在增强体液免疫反应上更有效；其它佐剂在增强细胞介导的免疫反应上更有效(Vogel和Powell,1995,同上)；还有另一组的佐剂增强抗疫苗抗原的体液免疫反应和细胞介导的免疫反应二者(Vogel和Powell,1995,同上)。总之，佐剂通常似以5种方式中的至少一种方式发挥它们的作用：1)促进抗原在淋巴结中的摄取、运输和呈递，2)延长抗原呈递，3)先天免疫细胞上表达的信号病原体识别受体(signalpathogen-recognitionreceptors)(PRR)，4)对细胞引起损伤或应激，这为免疫反应发出信号，和5)诱导优先的Th1或Th2反应(SchijnsVE等人2007)。抗原的免疫原性还可通过使用基因佐剂例如存在于免疫细胞膜上的受体的配体来增强。DNA疫苗的基因佐剂已进行了综述(参见，例如，Calarota&Weiner,ExpertRevVaccines.2004Aug；3(4Suppl):S135-49,Calarota&Weiner,ImmunolRev.2004Jun；199:84-99andKutzler&Weiner,JClinInvest.2004Nov；l14(9):1241-4)，然而病毒疫苗(特别地基于痘病毒的病毒疫苗)的基因佐剂仍未获得详尽研究。已显示肿瘤坏死因子超家族(TNFSF)的几个成员及其对应受体(TNFRSF)提供了免疫反应的至关重要的共刺激信号(WattsTH.AnnuRevImmunol2005；23:23–68)。OX40Ligand(OX40L)，也称为gp34、CD252、CD134L或TNFSF4，为TNF超家族的成员。人OX40L与其小鼠对应物共有46％的氨基酸序列同一性。与其它TNA超家族成员类似，膜结合的OX40配体以同三聚体的形式存在。OX40L结合TNF受体超家族的成员OX40(CD134)。OX40在活化的T细胞上表达，而其配体OX40L在活化的抗原呈递细胞(APC)例如B细胞和树突细胞(DC)上被诱导[WattsTH.2005同上,SugamuraK,等人,NatRevImmunol2004；4(6):420–31]。OX40–OX40L相互作用可促进CD4+T细胞的增殖、分化和特别地存活(RogersPR,等人,Immunity2001；15(3):445–55；SongJ,等人,NatImmunol2004；5(2):150–8)。已显示OX40的连接增强抗病毒的离体人CD8+T细胞记忆反应，所述病毒包括HIV-1、Epstein–Barr病毒(EBV)和流感病毒(SerghidesL,等人,JImmunol.2005；175(10):6368–77；)。利用表达OX40L的金丝雀痘病毒和HIV-1金丝雀痘疫苗、vCP1452共免疫小鼠在频率和细胞因子表达方面增强了HIV-1特异性CD8+T细胞反应(LiuJ.等人,Vaccine.2009；275077–5084)。然而，OX40L不增强由HIV-1金丝雀痘疫苗引发的抗体反应，这表明表达OX40L的金丝雀痘载体可增强HIV-1金丝雀痘疫苗的细胞但非体液免疫原性。(LiuJ.等人,2009,同上)。在本公开内容中，与先前SerghidesL,等人,2005(同上)的工作(其中在体外研究中组合使用腺病毒表达的OX40L与流感病毒肽)或由LiuJ.等人,2009描述的工作(其中共施用表达OX40L的金丝雀痘病毒和表达HIV-1的金丝雀痘病毒)相反，OX40L与狂犬病毒G蛋白一起通过相同重组体共表达。令人惊讶地，与由LiuJ.等人,2009(同上)报导的工作中不存在体液免疫原性的增强相反，OX40L的该共表达导致峰值抗狂犬病病毒中和抗体滴度增加至2至3倍。伴侣动物的有基因佐剂的狂犬病疫苗是高度期待的，因为其可避免或减小与有常规化学佐剂的疫苗相伴的负面结果(例如注射部位的反应、不适、疼痛、非特异性免疫反应、增加的癌症风险等)。例如，在猫中，已报导疫苗相关肉瘤的发展与一些有佐剂的疫苗的施用相关。因此，存在对有效并且安全的病毒疫苗(特别在以足以引发保护性反应的量表达靶抗原、表位、免疫原、目标肽或多肽方面)的需要。专利技术概述本专利技术的目的可以是提供重组载体或病毒以及用于产生这样的病毒的方法，和提供组合物和/或疫苗以及用于治疗和预防感染的方法之中的任一个或全部。本专利技术提供了重组载体，例如重组病毒，例如重组痘病毒，所述重组载体包含并表达至少一个外源核酸分子，并且所述至少一个外源核酸分子可包含编码来自狂犬病病毒的目标免疫原或表位例如狂犬病病毒G蛋白的核酸分子。本专利技术还包括许多种抗原，所述抗原已使用痘病毒或其它适当的病毒表达载体而在动物宿主中成功地进行体内表达，以诱发免疫和/或保护性免疫反应，所述适当的病毒载体包括腺病毒、腺伴随病毒(AAV)、副粘液病毒、马立克氏病病毒(MDV)、新城疫病毒(NDV)、传染性腔上囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)等。实例包括但不限于犬瘟热病毒、口蹄疫病毒(FMDV,属于Merial的US7527960)、流感病毒(各自属于Merial的US7384642,US7910112,US6713068和本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种组合物，其包含：a)包含编码如下两者的多核苷酸的表达载体：i.选自下述的一种或多种多肽：狂犬病病毒G蛋白、流感病毒、FMDV、BTV、PCV2、PRRSV、WNV、尼帕病毒、Hendra病毒、白血病病毒、利什曼原虫病毒、FIV、FIPV、FCV、AHSV、VSV及其在免疫原性上有效的变体或片段；和ii.OX40L多肽或其具有可比较的佐剂性的变体或片段；和b)药学上或兽医学上可接受的媒介物、稀释剂或赋形剂。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.02.14 US 61/598,6101.一种疫苗组合物，其包含以下a)和b)、基本上由以下a)和b)组成、或者由以下a)和b)组成：a)重组痘病毒载体，其包含四个狂犬病病毒G蛋白基因以及一个犬类OX40L基因，上述基因各自在需要其的动物中体内表达；和b)药学上或兽医学上可接受的赋形剂；其中所述狂犬病病毒G蛋白基因中的两个是经典的基因，且所述狂犬病病毒G蛋白基因中的两个是经密码子优化的基因，并且其中所述经典的和经密码子优化的狂犬病病毒G蛋白基因均编码由SEQIDNO:1中所示的序列组成的狂犬病病毒G多肽。2.权利要求1的疫苗组合物，其中所述动物为犬科动物。3.权利要求1或2的疫苗组合物，其中所述经密码子优化的狂犬病病毒G蛋白基因中的至少一个由SEQIDNO:5中所示的序列组成。4.权利要求1或2的疫苗组合物，其中所述OX40L基因编码SEQIDNO:12中所示的OX40L多肽。5.权利要求1或2的疫苗组合物，其中所述重组痘病毒载体为金丝雀痘病毒。6.权利要求5的疫苗组合物，其中所述载体为金丝雀痘病毒ALVAC。7.权利要求6的疫苗组合物，其中所述载体包含SEQIDNO:23中...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·莫巴特逊，J·M·民克，F·戴维，
申请(专利权)人：梅里亚有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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