治疗心肌病的基因治疗载体制造技术

本发明专利技术涉及一种基因治疗载体，该基因治疗载体用于治疗或预防对其有需要的主体的肥厚型心肌病。本发明专利技术的基因治疗载体包括编码心脏肌节蛋白的核酸序列和与该核酸序列可操作地连接的心肌细胞特异性启动子。本发明专利技术还涉及一种包含基因治疗载体的细胞。还提供了包括上述基因治疗载体和/或含上述载体的细胞的药物组合物。另一个方面，本发明专利技术涉及一种通过将本发明专利技术的基因治疗载体引入需要治疗的主体中，来治疗或预防主体的肥厚型心肌病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种基因治疗载体，该基因治疗载体用于治疗或预防对其有需要的主 体的肥厚型心肌病。本专利技术的基因治疗载体包括编码心脏肌节蛋白的核酸序列和与所述核 酸序列可操作地连接的心肌细胞特异性启动子。本专利技术还涉及一种包含上述基因治疗载体 的细胞。本专利技术还提供了药物组合物，该药物组合物包括上述基因治疗载体和/或含上述 载体的细胞。另一方面，本专利技术涉及一种通过将本专利技术的基因治疗载体引入需要治疗的主 体体内，来治疗或预防主体的肥厚型心肌病的方法。
技术介绍
虽然在由环境因素（诸如尼古丁、高胆固醇血症或糖尿病）引起的心脏疾病的预 防以及在心脏病症的对症治疗中取得了相当大的进展，但仍然需要能改善对遗传性心肌病 的治疗的方法。遗传因素造成的心肌病是肥厚型心肌病（HCM)、扩张型心肌病（DCM)和致心 律失常型右室心肌病（ARVC)。 HCM是最普遍的心肌病，其特征是，在没有另一心脏病或全身性疾病（自身能在给 定患者中明显产生一定程度的肥厚）的情况下，原因不明地出现左心室肥厚。HCM与收缩 最初正常，但舒张功能受损相关（Elliott et al·，2008, Eur Heart J 29:270-276 ;Gersch et al·，2011，J Thorac Cardiovasc Surg 142:el53-203) C3HCM具有特别高的患病率，在普 通人群中的患病率约为 1:500 (Maron et al·，1995, Circulation 92:785-789)，并且是导 致年轻人，尤其是运动员发生突发心脏死亡的首要原因。虽然HCM是一种危及生命的疾病， 但迄今为止还不能进行治愈性治疗（Carrier et al·，2010, Cardiovasc Res 85:330-338; Schlossarek et al·，2011，J Mol Cell Cardiol 50:613-20)。 HCM是一种常染色体的显性疾病，已知由至少10种编码心脏肌节组分的基因的 多于1000种不同的突变引起，其中该至少10种编码心脏肌节组分的基因编码诸如，心脏 肌球蛋白结合蛋白C (MYBPC3)、β -肌球蛋白重链（MYH7)、心肌肌钙蛋白T (TNNT2)、心肌肌 钙蛋白I (ΤΝΝΙ3)、室性肌球蛋白必需轻链I (MYL3)、室性肌球蛋白调节轻链2 (MYL2)、心脏 α-肌动蛋白（ACTC)、α-原肌球蛋白（TPM1)、肌联蛋白（TTN)、四加半LIM蛋白I(FHLl) (Richard et al.,2003,Circulation 107:2227-2232 ；Schlossarek et al.,2011,J Mol Cell Cardiol 50:613-20 !Friedrich et al·, 2012, Hum Mol Genet 21:3237-54)。大多数 突变是编码全长的突变多肽的错义突变。众所周知的例外是MYBPC3和FHL1，它们主要表现 为产生C-端截短的蛋白的移码突变。 HCM中最常发生突变的基因是编码心脏肌球蛋白结合蛋白C(cMyBP-C)的 MYBPC3(Bonne et al.,1995,Nature Genet II:438-440 ；ffatkins et al.,N Engl J Med.，2011，364:1643 - 56)。cMyBP-C是肌节A带的主要成分，它在肌节A带中与肌球 蛋白、肌动蛋白和肌联蛋白相互作用（Schlossarek et al·，2011，J Mol Cell Cardiol 50:613-20)。在人和小鼠中，仅在心脏中检测到（Fougerousse et al, 1998, Circ Res 82:130-133)，并且 cMyBP-C 参与调节心肌的收缩和舒张 （Pohlmann et al.，2007, Circ Res Circ Res 101，928-38 ;Schlossarek et al·，2011，J Mol Cell Cardiol 50:613-20)。 MYBPC3基因中约70 %的突变会导致移码，从而产生C-端截短的蛋白（Carrier et al.，1997，Circ Res 80:427-434)。截短的蛋白是不稳定的，而且从来没有在患者 的心肌组织中检测到（Marston et al.，2009，Circ Res 105:219-222 ;van Dijk et al.,2009,Circulation 119:1473-1483 ；van Dijk et al.,2012,Circ Heart Fail 5:36-46)。 因此，cMyBP-C蛋白水平降低是，单倍不足（haploinsufficiency)可能是HCM的 致病机理的一种论据。全长CMyBP-C的量不足可能会使粗肌丝成分的化学计量不平衡，并 且改变肌节的结构和功能。在携带错义突变或移码突变的HCM的小鼠和猫模型中也涉及单 倍不足（Meurs et al.，2005，Hum Mol Genet 14:3587-3593 ;Vignier et al.，2009，Circ Res 105:239-248)。此外，在猫和小鼠中，有证据表明存在cMyBP-C突变体（全长或截短的） (即使为低水平的）。因此，第二种可能的致病机理是，产生诱导显性负性作用的毒性多肽， 这很可能是通过与野生型（WT)基因产物进行竞争来实现的。 目前HCM的药物类治疗仅仅是经验性的，能缓解症状但不能治疗引起致病的遗传 原因。显然，基因类或RNA类治疗将是HCM的唯一根治性治疗。已经在与非遗传性心脏病相 关的疾病中成功测试了基因治疗方法（Jessup et al.，2011，Circulation 124:304-313)。 申请 US 2005/0276804 和 2007/0292438 公开了 cMyBP-C 与遗传性心脏疾病 有关。然而，US 2005/0276804提出降低视黄醇结合蛋白或视黄醇来治疗这些疾病。US 2007/0292438则局限于公开在多种基因中具有破裂的不同的小鼠模型。 申请 US 2004/0086876 和 US 2002/0127548 公开了对与 HCM 相关的人 MYBPC3 基 因中突变的诊断。此外，这些申请提出通过将编码非突变的cMyBP-C的核酸给药到患者来 治疗HCM。 Merkulov等人（2012, Circ Heart Fail, 5:635-644)公开了将小鼠 Mybpc3基因转 移到cMyBP-C-缺陷型（cMyBP-C 0小鼠的心肌中。作者认为cMyBP-C的缺失导致功能障 碍和肥厚。基因转移改善了收缩和舒张的收缩性功能，并使cMyBP-C-缺陷型（cMyBP-C /) 小鼠的左心室壁的厚度减小。 Vignier 等人（2009, Circ Res 105:239-248)开发 了携带 G>A 点突变的 Mybpc3-靶向敲入（KI)的小鼠模型，这产生了源自异常基因转录和剪接的不同的突变的 mRNA和蛋白。该文件表明，外源性应激，诸如肾上腺素应激或衰老，导致KI小鼠中的泛 素-蛋白酶体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达外源性核酸序列的基因治疗载体，包括：(a)编码功能性心脏肌节蛋白的核酸序列，以及(b)与所述核酸序列可操作地连接的心肌细胞特异性启动子，所述基因治疗载体用于治疗或预防哺乳动物主体的肥厚型心肌病的方法中，其中，所述主体在编码所述心脏肌节蛋白的基因中携带促使发生肥厚型心肌病的突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢西·卡里尔，托马斯·艾斯臣哈根，托马斯·沃伊特，茱莉娅·米尔里尼，奥立佛·穆勒，多琳·斯蒂姆波，朱莉娅·穆罗费力亚特，
申请(专利权)人：汉堡艾本德大学医学中心，鲁普莱希特卡尔斯海德堡大学，皮埃尔玛丽居里大学，肌肉学研究协会，
类型：发明
国别省市：德国;DE