脑膜炎球菌疫苗制造技术

本发明专利技术涉及脑膜炎球菌疫苗。脑膜炎球菌疫苗可以通过包括fHbp的多个等位基因或变体来改进，以便提供对于该蛋白已知的多样性的更广覆盖度，和/或通过减少每剂量中OMV组分的量来改进。改进。改进。

【技术实现步骤摘要】
脑膜炎球菌疫苗
[0001]本申请是申请日为2015年7月16日的中国专利申请201580038773.1“脑膜炎球菌疫苗”的分案申请。


[0002]本专利技术在脑膜炎球菌疫苗接种的领域中。

技术介绍

[0003]脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)是一种革兰阴性荚膜细菌，其定居在大约10％人群的上呼吸道。针对血清群A、C、W135和Y的缀合物疫苗可用，但可用于保护免于血清群B的唯一疫苗通常是在2013年批准的BEXSERO
™
产品。该产品包括四种主要免疫原性组分：因子H结合蛋白，
‘
fHbp
’
；肝素结合蛋白，NHBA；奈瑟氏菌黏附素A，NadA；和外膜囊泡(OMV)。

技术实现思路

[0004]本专利技术的一个方面是免疫原性组合物，其包含与以下中的一种或多种组合的包含v1、v2和v3脑膜炎球菌fHbp中的所有三种的融合多肽：(i)NHBA多肽、(ii)NadA多肽和/或(iii)脑膜炎球菌外膜囊泡。
[0005]本专利技术的一个进一步方面是免疫原性组合物，其包含与以下中的一种或多种组合的脑膜炎球菌外膜囊泡：(i)NHBA多肽、(ii)NadA多肽和/或(iii)包含v1、v2和v3脑膜炎球菌fHbp中的所有三种的融合多肽；其中外膜囊泡(OMV)以5
‑
30μg/ ml的浓度存在。具体地，包含v1、v2和v3脑膜炎球菌fHbp中的所有三种的融合多肽是稳定化的和/或fHbp非结合融合多肽。又更具体地，v1 fHbp包含位置R41的突变，例如R41S突变。还更具体地，v2和v3 fHbp多肽在根据全长序列(SEQ ID NO:2和3)以及根据ΔG序列(SEQ ID NO:8和9)编号的以下位置包含一个或多个稳定化和/或因子H(fH)非结合突变：
[0006]本专利技术的一个进一步方面是免疫原性组合物，其包含具有式NH2—A
‑
[
‑
X
‑
L ]3‑
B—COOH的氨基酸序列的融合多肽，其中每个X是不同的变体fHbp序列，L是任选的接头氨基酸序列，A是任选的N末端氨基酸序列，且B是任选的C末端氨基酸序列。
[0007]本专利技术的一个进一步方面是保护哺乳动物诸如人免于脑膜炎球菌感染的方法，其包括施用根据本专利技术的免疫原性组合物。
附图说明
[0008]图1显示RCD曲线，其具有y轴上的比例(0.0至1.0)和x轴上的SBA滴度(0至256，以16的步幅(steps))。最上面曲线是组C；最快达到0.0的组是S。
[0009]图2提供引入v1、v2和v3 fHbp多肽以产生731 S和731 SNB融合蛋白的稳定化且因子H(fH)非结合的突变的示意图。
[0010]图3(a)
ꢀ‑ꢀ
(g)表明包含741
‑
231融合体(SEQ ID NO:10)和1/4OMV的组合物与BEXSERO
TM
相比引发更高的针对七种测试菌株(3a=v2，3b=v2，3c=v3，3d=v3，3e=v2，3f=v2，3g=v3)的GMT。
[0011]详述为了增强BEXSERO
™
产品，进一步增强BEXSERO
™
针对不同脑膜炎球菌菌株的覆盖度(在随着疫苗的使用扩散的潜在转变和突变的情况下)且还减少罕见的发热发生(当该疫苗与常规婴儿疫苗共同施用时有时可见[1])将是有利的。为了这些目的，本专利技术人以两种方式修饰BEXSERO
™
：(i)包括fHbp的多个等位基因或变体，以便提供对于该蛋白已知的多样性的更广覆盖度；和(ii)减少每个剂量中的OMV组分的量。如本文中所示，这两个修饰确实导致疫苗的改善。
[0012]因此，在第一个实施方案中，本专利技术提供免疫原性组合物，其包含与以下中的一种或多种组合的包含v1、v2和v3脑膜炎球菌fHbp中的所有三种的融合多肽：(i)NHBA多肽、(ii)NadA多肽和/或(iii)脑膜炎球菌外膜囊泡。
[0013]此外，在第二个实施方案中，本专利技术提供免疫原性组合物，其包含与以下中的一种或多种组合的脑膜炎球菌外膜囊泡：(i)NHBA多肽、(ii)NadA多肽和/或(iii)包含v1、v2和v3脑膜炎球菌fHbp中的所有三种的融合多肽；其中外膜囊泡以5
‑
30μg/ ml的浓度存在。
[0014]类似地，组合这两个实施方案，本专利技术提供免疫原性组合物，其包含(i)包含v1、v2和v3脑膜炎球菌fHbp中的所有三种的融合多肽、(ii)NHBA多肽、(iii)NadA多肽和(iv) 5
‑
30
µ
g/ml脑膜炎球菌外膜囊泡。
[0015]因子H结合蛋白(fHbp)本专利技术的组合物可以包括免疫原性fHbp多肽。BEXSERO
™
产品包括fHbp多肽，且fHbp也称为'741'(参考文献2中的SEQ ID NO:2536；本文中的SEQ ID 1)、'NMB1870'、'GNA1870'[3
‑
5]、'P2086'、'LP2086'或'ORF2086'[6
‑
8]。该蛋白的3D结构是已知的[9，10]，且该蛋白具有通过短接头连接的两个β
‑
桶(β
‑
barrels)。许多出版物都报道了该蛋白在脑膜炎球菌疫苗中的保护效力，例如参见参考文献11
‑
15。该蛋白在所有血清群的多种菌株中以脂化形式表达。已将fHbp序列分为三种变体[3](在本文中称为v1、v2和v3)，并且已通常发现针对给定变体产生的血清针对表达该变体的菌株是杀细菌的，但其对表达其他两种变体之一的菌株无活性，即存在变体内交叉保护、但不存在变体间交叉保护(除了一些v2和v3交叉反应性)。
[0016]为了增加变体间交叉反应性，fHbp序列已被工程改造以含有针对所有三种变体的特异性[16]。然而，代替遵循该方法，本专利技术利用包含v1、v2和v3脑膜炎球菌fHbp中的所有三种的融合多肽。
[0017]v1 fHbpv1中来自菌株MC58的全长fHbp具有以下氨基酸序列(SEQ ID NO:1)：
成熟脂蛋白缺乏SEQ ID NO:1的前19个氨基酸(加下划线；提供SEQ ID NO:4，以Cys
‑
20开始)。BEXSERO
™
产品包括v1 fHbp的
‘
ΔG
’
形式，其中全长序列被截短最多达残基26(即去除聚甘氨酸区段，并且代替以Val
‑
27开始)，得到SEQ ID NO:7。
[0018]本专利技术所用的v1脑膜炎球菌fHbp将包含(i)与SEQ ID NO:7具有至少i%序列同一性和/或(ii)包含SEQ ID NO:7的片段的氨基酸序列。
[0019]i的值可以选自8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.免疫原性组合物，其包含含有v1、v2和v3脑膜炎球菌fHbp中的所有三种的融合多肽，并组合有：(i)NHBA多肽、(ii)NadA多肽和(iii)脑膜炎球菌外膜囊泡，其中v2由包含突变S32V和L123R的SEQ ID NO:8组成且v3由包含突变S32V和L126R的SEQ ID NO:9组成。2.权利要求1的免疫原性组合物，其中所述外膜囊泡(OMV)以5
‑
30μg/ml的浓度存在。3.任一前述权利要求的组合物，其中：
•ꢀ
在施用于小鼠之后，所述融合多肽可以引发可以识别以下中所有三种的抗体：(a)由SEQ ID NO:4组成的多肽、(b)由SEQ ID NO:5组成的多肽、(c)由SEQ ID NO:6组成的多肽；
•ꢀ
在施用于小鼠之后，所述NHBA多肽可以引发可以结合由氨基酸序列SEQ ID NO:13组成的多肽的抗体；和/或
•ꢀ
在施用于小鼠之后，所述NadA多肽可以引发可以结合由氨基酸序列SEQ ID NO:18组成的多肽的抗体。4.任一前述权利要求的组合物，其中所述fHbp融合多肽具有式NH2—A
‑
[
‑
X
‑
L ]3‑
B—COOH的氨基酸序列，其中每个X是不同的变体fHbp序列，L是任选的接头氨基酸序列，A是任选的N末端氨基酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：A比奥尔希，B布鲁内利，MM朱利亚尼，V马西尼亚尼，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：