人β-NGF的重组表达载体及含该载体的重组细胞株制造技术

本发明专利技术公开了一种可稳定、高效表达人β-NGF的重组表达载体，含有该重组表达载体的重组真核细胞，以及一种生产重组人β-NGF的方法。本发明专利技术所述重组表达载体包含启动子、β球蛋白基因内含子、人β-NGF基因、内部核糖体进入位点序列和筛选标记基因，在宿主细胞中的整合、表达效率较高。含该重组表达载体的重组真核细胞表达与天然β-NGF活性相当的重组人β-NGF，且经多次传代后仍能稳定表达；所表达的β-NGF分泌到培养基中，易分离、纯化，大大降低了生产下游的难度和成本，具有很好的临床应用前景和商业价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，特别涉及一种重组人β -NGF的分泌型表达载体以及含该载体的重组细胞株。
技术介绍
神经生长因子(NGF)是神经营养因子中最早被发现、目前研究最为透彻的一种神经细胞生长调节因子，具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能，它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。NGF在人体内主要分布于脑、神经节、虹膜、心脏、脾、胎盘等组织及成纤维细胞、平滑肌、骨骼肌、胶质细胞、雪旺氏细胞等。NGF与受体结合，通过受体介导的内吞机制产生内在化，形成由轴膜包绕、含有NGF、并保持其生物活性的小泡，经轴突沿微管逆行转运至胞体，经醋氨酸蛋白激酶、脂眈肌醇钙、内源性环腺昔酸等第二信使体系的转导，启动一系列级联反应，对靶细胞的某些结构或功能蛋白基因表达进行调控而发挥其生物效应。大鼠体内试验结果表明:NGF可改善由己二酮和丙烯胺造成的大鼠中毒性周围神经病所致的肢体运动功能障碍，缩短神经-肌肉动作电位潜伏期，并提高神经-肌肉动作电位幅度。组织病理学检查结果表明，NGF有减轻动物胫神经的髓鞘肿胀发生率和降低变性胫神经纤维数量等作用。以上结果提示=N本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达人β?NGF的重组表达载体，其特征在于，依次包含以下可操作性相连的元件：启动子、β球蛋白基因内含子、人β?NGF基因、内部核糖体进入位点序列和筛选标记基因；所述β球蛋白基因内含子序列如SEQ?ID?No.1所示，人β?NGF基因序列如SEQ?ID?No.2所示，内部核糖体进入位点序列如SEQ?ID?No.3所示。

【技术特征摘要】
1.一种表达人β-NGF的重组表达载体，其特征在于，依次包含以下可操作性相连的元件:启动子、β球蛋白基因内含子、人β-NGF基因、内部核糖体进入位点序列和筛选标记基因；所述β球蛋白基因内含子序列如SEQ ID N0.1所示，人β-NGF基因序列如SEQ IDN0.2所示，内部核糖体进入位点序列如SEQ ID N0.3所示。2.如权利要求1所述的重组表达载体，其特征在于，所述启动子为CMV启动子、PGK启动子、RSV启动子或SV40启动子中的任意一种。3.如权利要求1或2所述的重组表达载体，其特征在于，所述筛选标记基因为二氢叶酸还原酶基因、新霉素抗性基因、博来霉素抗性基因或潮霉素抗性基因。4.一种重组真核细胞，其特征在于，所述真核细胞含有权利要求1所述的重组表达载体；或者所述真核细胞的基因组中整合有以下可操作性相连的元件:启动子、β球蛋白基因内含子、人β-NGF基因、内部核糖体进入位点序列和筛选标记基因；所述β球蛋白基因内含子序列如SEQ ID N0.1所示，人β -N...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛博夫，马墨，丽贝卡·梅尔本，朱林，
申请(专利权)人：薛博夫，
类型：发明
国别省市：