一种基因定向克隆用TC载体及其制备和使用方法技术

本发明专利技术公开了一种基因定向克隆用TC载体及其制备和使用方法，该载体两个末端的3’端各突出一个碱基，其中一个3’端突出碱基为C碱基，另一个3’端突出碱基为T碱基。其制备方法包括a、填充序列的引物设计，由此得到引物1和引物2；b、在引物1和引物2引发下，以供体载体作DNA模板进行PCR扩增，得到PCR产物，即填充序列；c、将该填充序列克隆到目标载体，从而形成前TC载体；d、内切酶酶切该前TC载体并回收载体片段就可得到TC载体。其使用方法包括a、制备TC载体；b、设计一对待定向克隆基因的PCR引物；c、用这对引物和Taq酶扩增待定向克隆基因并将产物连接于TC载体即可获得定向克隆重组载体。本发明专利技术提高了从通用目的载体出发进行的重组载体的构建的工作效率，可减低实验成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体地说是一种便于基因定向克隆的基因工程载体TC载体及其制备以及基因定向克隆的方法。
技术介绍
目前定向克隆技术主要有以下几种方法(I)通过一种限制性核酸内切酶消化载体，也用这种酶(或同尾酶)消化外源基因片段，然后将载体与外源基因片段通过T4 DNA连接酶催化连接，重组克隆包含方向不定(两种方向)的外源基因片段。借助于限制性核酸内切酶消化或其他方法从无定向克隆中筛选外源片段方向符合目的要求的克隆。这种方法缺点是载体两个末端自我连接严重，后期筛选过程工作量大，并且存在较大不确定性，很可 能会得不到所需方向克隆；(2)通过两种不同的限制性核酸内切酶消化载体，也用这两种酶消化外源基因片段，然后将载体与外源基因片段通过T4 DNA连接酶催化连接，重组载体即为定向克隆。该方法缺点是步骤繁琐，工作量大，有时会很难找到合适的限性核酸内切酶位点而确定实验方案；(3)在(I)的基础上，增加外源基因片段与载体之间连接处的特殊序列，使正反向克隆中某向克隆具有或不具有某稀有限制性核酸内切酶的识别、切割位点，因而可以借助于该稀有限制性核酸内切酶筛选方向克隆的筛选。这种改进只是在一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因定向克隆用TC载体，其特征在于，该载体两个末端的3’端各突出一个碱基，其中一个3’端突出碱基为C碱基，另一个3’端突出碱基为T碱基。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李继刚，李秀敏，杨忠祥，夏洁函，
申请(专利权)人：河北大学，
类型：发明
国别省市：