一种重组虎纹克胰肽载体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种重组虎纹克胰肽载体及其制备方法和用途。重组虎纹克胰肽载体包括1或1个以上拷贝虎纹克胰肽，虎纹克胰肽的碱基序列如SEQ?ID?NO:9所示。其制备方法为：获得虎纹克胰肽基因；以获得的虎纹克胰肽基因为模板，进行扩增，酶切，连接，得到1个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体；将1个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体进行酶切连接，再以连接产物为扩增模板，进行第二次扩增，所得到的扩增产物与载体双酶切后进行连接得到2个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体；重复上述步骤，依次得到2个以上拷贝数的虎纹克胰肽重组载体。本发明专利技术的重组虎纹克胰肽载体表达量高、制备方法简单，与天然提取的虎纹克胰肽在生物活性上无明显差异。

【技术实现步骤摘要】
一种重组虎纹克胰肽载体及其制备方法和用途
本专利技术涉及基因工程技术，尤其涉及一种重组虎纹克胰肽载体及其制备方法和用途。
技术介绍
胰蛋白酶抑制剂是一种抑制丝氨酸蛋白酶活性的蛋白质或其他分子，在体内调控很多重要的生理过程，是维持体内环境稳定的重要因素；胰蛋白酶抑制剂的来源广泛，抗原性相对较弱，毒性低。因此，胰蛋白酶抑制剂在疾病的临床诊断、治疗等方面有广阔的应用前景，广泛应用于急性胰腺炎、外科手术、脑血管疾病、妇产科疾病、休克以及抗肿瘤治疗。虎纹克胰肽，即虎纹捕鸟蛛蛋白酶抑制剂(HWTX-XI)，是第一个从蜘蛛毒素中分离的具有Kunitz型结构模体的胰蛋白酶抑制剂，是至今为止发现的胰蛋白酶抑制活性最强的天然多肽，其抑制活性比BPTI高两个数量级(BPTI即牛胰蛋白酶抑制剂，或称为抑肽酶， aprotinin，被广泛的应用于临床)，而且HWTX-XI具有较高的稳定性、没有明显毒性和易于基因工程表达等优势，表明HWTX-XI在治疗与胰蛋白酶相关的疾病中有较好的应用前景。目前天然虎纹克胰肽的来源有限，故急需一种能高效生产虎纹克胰肽且活性与天然虎纹克胰肽一致的方法。专利技术内容本专利技术要解决本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种虎纹克胰肽重组载体，包括1个或1个以上拷贝的虎纹克胰肽的重组载体，所述虎纹克胰肽的碱基序列如SEQ?ID?NO:9所示。

【技术特征摘要】
1.一种虎纹克胰肽重组载体，包括I个或I个以上拷贝的虎纹克胰肽的重组载体，所述虎纹克胰肽的碱基序列如SEQ ID N0:9所示。2.一种制备权利要求I所述虎纹克胰肽重组载体的方法，其特征在于，包括如下步骤， 获得虎纹克膜妝基因； 获得I个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体以获得的虎纹克胰肽基因为第一次扩增模板，进行第一次扩增，双酶切，与重组载体连接，得到I个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体； 优选地，还可以包括以下步骤，获得2个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体将I个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体进行双酶切，回收小片段，加入酶后连接，再以连接产物为扩增模板，进行第二次扩增，所得到的扩增产物与载体双酶切后进行连接得到2个拷贝数的虎纹克胰肽重组载体； 优选地，还可以重复上述步骤，依次得到2个以上拷贝数的虎纹克胰肽重组载体。3.根据权利要求2的方法，其特征在于，所述获得虎纹克胰肽基因为得到成熟虎纹克胰肽的原始碱基序列；再通过引物引入突变位点，扩增得到突变的虎纹克胰肽基因序列。4.根据权利要求3的方法，其特征在于，所述引物还引入了切割位点序列。5.根据权利要求4的方法，其特征在于，切割位点序列为根据密码子规则编码的氨基酸序列，优选地，所述切割位点序列编码单个氨基酸或两个氨基酸或6个氨基酸，更优选地，单个氨基酸为R或W或M或D或E或K ;两个氨基酸为D-P或N-G ;三个氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：任宏伟，凡复，林昳，郑和东，郑宇，
申请(专利权)人：厦门北大之路生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：