一种目的蛋白制备方法及其用途技术

本发明专利技术涉及一种目的蛋白制备方法及其用途。其制备方法为：目的蛋白核苷酸序列片段的获得；目的蛋白重组表达载体的构建；目的蛋白的诱导表达；目的蛋白的纯化；纯化产物的切割；所述目的蛋白核苷酸序列片段的前面插入单体切割的识别位点；所述目的蛋白通过PCR扩增得到，通过引物引入单体切割的识别位点；其中的目的蛋白可以是人神经生长因子，胸腺肽、虎纹克胰肽、虎纹镇痛肽等等。采用本发明专利技术的制备方法制备得到的目的蛋白表达量高、易于纯化、降低了目的蛋白二硫键复性与构象折叠的难度，基因表达产物即为目的蛋白单体，不带额外氨基酸残基，既保证了目的蛋白产物良好的生物学活性，也省去了多拷贝的切割成本，纯化简单，易于大量生产。

【技术实现步骤摘要】
一种目的蛋白制备方法及其用途
本专利技术涉及基因工程技术，特别涉及一种目的蛋白制备方法及其用途。
技术介绍
神经生长因子(NGF)是1951年是由诺贝尔生理学和医学奖获得者R. Levi-Montalcini和S. Cohen在小鼠肉瘤细胞内发现的[1，2]。NGF在神经元的发育、生长、分化以及轴突的生长、递质的合成及细胞的凋亡等阶段均起着重要作用。它促进发育中 的交感、感觉神经元的分化和成熟。维持成年交感神经元的正常功能。经典的NGF是从小鼠颌下腺中分离所得的分子量为140000的糖蛋白，由a、P、Y三种肽链按a 20 Y2的比例构成，在NGF三种亚基中，^亚单位是NGF的活性区，因而习惯上所谓的NGF就是指其3亚单位，由两个118个氨基酸组成的单链通过非共价键结合而成二聚体，与人体NGF的结构具有高度的同源性，生物效应也无明显的种间特异性[3，4]。天然NGF蛋白主要是从成年雄性小鼠颌下腺分离和纯化而得的，方法包括，利用Varon等(1967，1972)的方法通过辅助修饰分离出7s NGF复合物；利用Smith等(1968)的方法分离出7s NGF中的P-NGF亚单位，即用0. 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种目的蛋白的制备方法，其特征是：包括如下步骤，目的蛋白核苷酸序列片段的获得；目的蛋白重组表达载体的构建；目的蛋白的诱导表达；目的蛋白的纯化；纯化产物的切割；所述目的蛋白核苷酸序列片段的前面插入单体切割的识别位点；所述目的蛋白通过PCR扩增得到，通过引物引入单体切割的识别位点；优选的，目的蛋白是人神经生长因子，胸腺肽、虎纹克胰肽、虎纹镇痛肽。

【技术特征摘要】
1.一种目的蛋白的制备方法，其特征是包括如下步骤， 目的蛋白核苷酸序列片段的获得； 目的蛋白重组表达载体的构建； 目的蛋白的诱导表达； 目的蛋白的纯化； 纯化产物的切割； 所述目的蛋白核苷酸序列片段的前面插入单体切割的识别位点； 所述目的蛋白通过PCR扩增得到，通过引物引入单体切割的识别位点； 优选的，目的蛋白是人神经生长因子，胸腺肽、虎纹克胰肽、虎纹镇痛肽。2.权利要求I的制备方法，其特征在于，在纯化之前还包括鉴定蛋白表达的步骤。3.权利要求I或2的制备方法，其特征在于，所述目的蛋白重组表达载体构建中的目的蛋白基因是一个或一个以上拷贝； 任选地，所述目的蛋白基因的一个以上拷贝数通过将含有一个以上拷贝目的蛋白基因的表达盒与表达载体构建来实现； 任选地，当得到一个拷贝数的重组表达载体时，在此基础上经过酶切连接等方法重组得到两个拷贝数的重组表达载体； 依次类推，得到两个以上拷贝数的各重组表达载体。4.权利要求I或2的制备方法，其特征在于，所述的单体切割的识别位点是根据密码子规则编码的氨基酸序列，优选地，单体切割的识别位点序列编码为单个氨基酸或两个氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：任宏伟，章永磊，邹有土，凡复，汤黎娜，
申请(专利权)人：厦门北大之路生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：