储存稳定的中性金属蛋白酶的用途和制备制造技术

本发明专利技术提供含有至少一种中性金属蛋白酶的方法和组合物，所述中性金属蛋白酶具有改善的储存稳定性。在一些实施方式中，中性金属蛋白酶在清洗和其它应用中应用。在一些特别优选的实施方式中，本发明专利技术提供含有从芽孢杆菌属物种得到的中性金属蛋白酶(一种或多种)的方法和组合物。在一些更特别优选的实施方式中，中性金属蛋白酶是从解淀粉芽孢杆菌中得到的。在又进一步优选的实施方式中，中性金属蛋白酶是解淀粉芽孢杆菌中性金属蛋白酶的变体。又在其它实施方式中，中性金属蛋白酶是解淀粉芽孢杆菌中性金属蛋白酶的同系物。本发明专利技术在包括但不限于清洗、漂白和消毒的应用中具体应用。

【技术实现步骤摘要】
储存稳定的中性金属蛋白酶的用途和制备本申请是申请日为2006年10月12日的、专利技术名称为“储存稳定的中性金属蛋白酶的用途和制备”的中国专利申请200680045537.3(PCT/US2006/040695)的分案申请。本专利技术要求2005年10月12日提交的在审美国临时专利申请序列第60/726,448号的优先权。专利
本专利技术提供含有至少一种具有改善储存稳定性的中性金属蛋白酶的方法和组合物。在一些实施方式中，中性金属蛋白酶在清洗和其它应用中找到应用。在一些特别优选的实施方式中，本专利技术提供含有从芽胞杆菌属某种(Bacillussp)得到的中性金属蛋白酶(一种或多种)的方法和组合物。在一些更特别优选的实施方式中，中性金属蛋白酶从解淀粉芽胞杆菌(B.amyloliquefaciens)中得到。在又进一步优选的实施方式中，中性金属蛋白酶是解淀粉芽胞杆菌中性金属蛋白酶的变体。在又其它实施方式中，中性金属蛋白酶是解淀粉芽胞杆菌中性金属蛋白酶同系物。本专利技术在包括但不限于清洗、漂白和消毒的应用中找到具体用途。专利技术背景洗涤剂和其它清洗组合物一般包括活性成分的复合结合。例如，大多数清洗产品包括表面活性剂系统、用于清洗的酶、漂白剂、助洗剂、泡沫抑制剂(sudssuppressors)、悬污剂(soil-suspendingagents)、去污剂(soil-releaseagents)、荧光增白剂(opticalbrighteners)、软化剂、分散剂、染料传递抑制化合物、研磨剂、杀菌剂和香料。尽管目前洗涤剂的复杂性，但是仍有许多污迹难以完全除去。而且通常存在残余物积聚，其导致变色(例如变黄)，并且由于清洗不完全使美感降低。由于低(例如冷水)洗涤温度和较短洗涤循环的增加使用，这些问题被增加。而且，许多污迹由纤维材料复合混合物构成，所述纤维材料复合混合物主要包括碳水化合物和碳水化合物衍生物、纤维和细胞壁成分(例如植物材料、木材、泥土/基于粘土的土壤和果实)。这些污迹给清洗组合物的配制和使用提出了难以解决的挑战。另外，彩色衣服倾向于变旧，并表现出外观变差(appearanceloss)。一部分这种颜色的损失是由于洗烫过程中的磨损，特别是在自动洗衣机和烘干机中的磨损。此外，织物拉伸强度的损失似乎是由于使用、穿戴和/或洗涤以及干燥引起的机械和化学作用的不可避免的结果。因此需要一种有效率和有效果地洗涤彩色衣服以使这些外观损失最小化的工具(方法)。总之，尽管清洗组合物能力改善，但本领域仍需要去除污迹、保持织物色彩和外观、并且抑制染料传递的洗涤剂。另外，仍需要这样的洗涤剂和/或织物护理组合物(fabriccarecompositon)，其提供和/或恢复拉伸强度，以及提供织物的抗皱性能、抗起毛(anti-bobbling)性能和/或抗收缩性能，以及提供静电控制(staticcontrol)、织物柔软、保持期望的颜色外观和织物防磨损的特性和益处。特别地，仍需要包括能除去污迹的彩色组分的组合物，所述污迹的彩色组分通常仍附着到正被洗烫的织物上。另外，仍需要适合漂白纺织品的改善的方法和组合物。专利技术概述本专利技术提供含有至少一种具有改善储存稳定性的中性金属蛋白酶的方法和组合物。在一些实施方式中，中性金属蛋白酶在清洗和其它应用中找到应用。在一些特别优选的实施方式中，本专利技术提供含有从芽胞杆菌属某种得到的中性金属蛋白酶(一种或多种)的方法和组合物。在一些更特别优选的实施方式中，中性金属蛋白酶从解淀粉芽胞杆菌中得到。又在进一步优选的实施方式中，中性金属蛋白酶是解淀粉芽胞杆菌中性金属蛋白酶的变体。又在其它实施方式中，中性金属蛋白酶是解淀粉芽胞杆菌中性金属蛋白酶的同系物。本专利技术在包括但不限于清洗、漂白和消毒的应用中找到具体用途。本专利技术提供新型中性金属蛋白酶、编码所述中性金属蛋白酶的新型遗传物质、和从芽胞杆菌属某种特别是解淀粉芽胞杆菌获得的中性金属蛋白酶蛋白，以及从它们开发的变体蛋白。特别地，本专利技术提供从芽胞杆菌属某种特别是解淀粉芽胞杆菌获得的中性金属蛋白酶组合物、编码该蛋白酶的DNA、含有该编码中性金属蛋白酶的DNA的载体、用载体DNA转化的宿主细胞和通过宿主细胞产生的酶。本专利技术也提供清洗组合物(例如洗涤剂组合物)、动物饲料组合物(animalfeedcompositions)和纺织品以及皮革处理组合物，其包括从芽胞杆菌属的种特别是解淀粉芽胞杆菌获得的中性金属蛋白酶(一种或多种)。在可选的实施方式中，本专利技术提供从本文描述的野生型中性金属蛋白酶衍生的突变体(即变体)中性金属蛋白酶。这些突变体中性金属蛋白酶同样可应用于多种应用。本专利技术提供从芽胞杆菌属的种特别是解淀粉芽胞杆菌获得的分离的中性金属蛋白酶。在进一步实施方式中，中性金属蛋白酶包括如在SEQIDNOS：3、4或18列出的氨基酸序列。在另外的实施方式中，本专利技术提供分离的中性金属蛋白酶，其包括与包含SEQIDNOS：3、4或18的中性金属蛋白酶具有至少45％的氨基酸同一性。在一些实施方式中，分离的中性金属蛋白酶与包含SEQIDNOS：3、4或18的中性金属蛋白酶具有至少50％同一性、优选至少55％、更优选至少60％、又更优选至少65％、甚至更优选至少70、更优选至少75％、仍更优选至少80％、更优选85％、又更优选90％、甚至更优选至少95％以及最优选99％的同一性。本专利技术也提供与从解淀粉芽胞杆菌获得的金属蛋白酶具有免疫交叉反应性的分离的中性金属蛋白酶，以及包含这些中性金属蛋白酶的组合物。在可选的实施方式中，中性金属蛋白酶与包含SEQIDNOS：3、4或18所列出的氨基酸序列的中性金属蛋白酶具有免疫交叉反应性。在进一步的实施方式中，中性金属蛋白酶与解淀粉芽胞杆菌的中性金属蛋白酶的片段(即部分)和/或包含SEQIDNOS：3、4或18所列出的氨基酸序列的中性金属蛋白酶具有交叉反应性。实际上，本专利技术意欲包括解淀粉芽胞杆菌金属蛋白酶的片段(例如表位)，其在动物(包括但不限于人)中刺激免疫应答，和/或被任何类的抗体所识别。本专利技术进一步包括金属蛋白酶上的表位，其与解淀粉芽胞杆菌金属蛋白酶表位交叉反应。在一些实施方式中，金属蛋白酶表位被抗体所识别，但是在动物(包括但不限于人)中不刺激免疫应答，而在其它实施方式中，金属蛋白酶表位在至少一种动物种类(包括但不限于人)中刺激免疫应答，并且被任何类的抗体所识别。本专利技术也提供鉴别和评估交叉反应表位的方法和组合物。在一些实施方式中，本专利技术提供SEQIDNOS：3、4或18所列出的氨基酸序列。在可选的实施方式中，序列包括在SEQIDNOS：3、4或18的至少一个氨基酸位置的取代。在一些特别优选的可选实施方式中，序列包括在SEQIDNO：18的至少一个氨基酸位置的取代。在一些优选的实施方式中，本专利技术提供中性金属蛋白酶变体，所述变体含有包括至少一个氨基酸取代的氨基酸序列，该取代在与含有SEQIDNOS：3、4或18所列出的氨基酸序列的解淀粉芽胞杆菌中性金属蛋白酶中位置相同的位置进行。在一些另外优选的实施方式中，本专利技术提供中性金属蛋白酶变体，所述变体含有包括至少一个氨基酸取代的氨基酸序列，该取代在与含有SEQIDNO：18所列出的氨基酸序列的解淀粉芽胞杆菌中性金属蛋白酶中位置相同的本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的具有提高的储存稳定性的中性金属蛋白酶，其中所述中性金属蛋白酶是芽孢杆菌中性金属蛋白酶。

【技术特征摘要】
2005.10.12 US 60/726,4481.分离的中性金属蛋白酶变体，其中，在与SEQIDNO:18所示的中性金属蛋白酶中的位置等同的位置上，所述蛋白酶与SEQIDNO:3或SEQIDNO:18的不同在于：(a)选自下述的多个突变：S023W/G024M,T004V/S023W/G024W,S023W/G024Y/A288V,T004L/S023W/G024Y,N046Q/N050F/T054L,N050Y/T059R/S129Q,S023W/G024W,A273H/S285P/E292G,S023Y/G024Y,S023Y/G024W,T004S/S023Y/G024W,N046Q/T054K,S023W/G024Y,T004V/S023W,T059K/S066N,N046Q/N050W/T054H/T153A,T004V/S023W/G024Y,L282M/Q286P/A289R,N046Q/R047K/N050Y/T054K,L044Q/T263W/S285R,T004L/S023W/G024W,R047K/N050F/T054K,A273H/S285R,N050Y/T059K/S066Q,T054K/Q192K,N046Q/N050W,L282M/Q286K,T059K/S066Q,T004S/S023W,L282M/Q286R/A289R/K011N,L282M/A289R,N046Q/N050W/T054H,T059K/S129Q,T004S/S023N/G024Y/F210L,T004V/S023W/G024M/A289V,L282M/Q286K/A289R/S132T,N050W/T054H,L282M/Q286R,L282F/Q286K/A289R,T059R/S066Q,R047K/N050W/T054H,S265P/L282M/Q286K/A289R,L282M/Q286R/T229S,L282F/Q286K,T263W/S285R,S265P/L282M/Q286K,T263H/A273H/S285R,T059R/S129V,S032T/T263H/A273H/S285R,T059R/S066Q/S129Q,T004S/G024W,T004V/S023W/G024M,T059K/S066Q/S129Q,L282M/Q286K/A289R/I253V,T004V/S023Y/G024W,T059R/S066N/S129Q,N050F/T054L,T004S/S023N/G024W,T059R/S066N,T059R/S066N/S129V,Q286R/A289R,N046Q/R047K/N050F/T054K,S265P/L282M/Q286P/A289R,S265P/L282M/Q286R/A289RQ062K/S066Q/S129I,S023N/G024W,N046Q/R047K/N050W/T054H,R047K/T054K,T004L/G024W,T014M/T059R/S129V,T059R/S066Q/N092S/S129I,R047K/N050W/T054K,T004V/G024W,N047K/N050F/T054K,S265P/L282F/Q286K/N061Y,L282F/Q286K/E159V,T004V/S023Y/G024M,S265P/L282F/A289R/T065S,T059K/F063L/S066N/S129V,T004L/S023W,N050F/T054H,T059R/S066Q/S129V,V190I/D220E/S265W/L282F,T004S/S023Y/G024M,T004L/S023N/G024Y,T059K/S066N/S129I,T059R/S066N/S129I,L282M/Q286R/A289R/P162S,N046Q/N050F/T179N,T059K/Y082C/S129V,T059K/S129I,N050Y/T054K,T059K/S066Q/V102A/S129Q,T059R/S066Q/S129I,T059W/S066N/S129V/S290R,T059R/S129I,T059K/S066Q/S129I,T059K/S066Q/S129V,S265P/L282M/Q286R/A289R/T202S/K203N,T004V/S023N/G024W,S265P/Q286K,S265P/L282F/A289R,D220P/S265W,L055F/T059W/S129V,T059R/S129Q/S191R,N050W/T054K,T004S/S023W/G024M,R047K/N050F/T054H,T059K/S066N/K088E,T059K/S066Q/S129I/V291L,L282M/Q286R/A289R,T059R/S066N/F085S/S129I,L282F/Q286P/A289R,L282F/Q286R/A289R,G099D/S265P/L282F/Q286K/A289R,N046Q/N050F,N050Y/T059W/S066N/S129V,T009I/D220P/S265N,V190F/D220P/S265W,N157Y/T263W/A273H/S285R,T263W/A273H/S285R,T263W/S285W,T004V/S023Y,N046Q/R047K/N050W,N050W/T054L,N200Y/S265P/L282F/Q286P/A289R,T059R/S066Q/P264Q,T004V/G024Y,T004L/G024Y,N050Y/S191I,N050Y/T054L,T004L/S023W/G024Y/N155K,F169I/L282F/Q286R/A289R,L282M/Q286K/A289R,F130L/M138L/E152W/D183N,N046Q/R047K/N050Y/T054H,T004V/G024M,N050Y/T059W/S066Q/S129V,S023N/G024Y,T054H/P162Q,T004S/S023W/G024Y,N050Y/T054H,L282F/Q286R/A289R/F169I,R047K/N050W,V190F/D220P,L282M/F173Y,T004L/S023Y,N050W/A288D,V190I/D220P/S265Q,S265P/L282F/Q286P/A289R,S265P/L282F/Q286R/A289R,N046Q/N050Y/T054K,T059W/S066Q,T263W/A273H/S285WT263W/A273H/S285P,S023Y/G024M,T004L/S023N/G024W,T004V/S023N/G024Y,T059W/S066N/S129Q,T004S/S023Y,T004S/S023N/G024M,T059W/S066N/A070T,T059W/S066Q/S129Q,T263W/A273H,A273H/285P,N046Q/R047K/N050Y/T054L,N046Q/R047K/N050Y,R047K/N050Y,T263H/S285W,R047K/N050F,N046Q/R047K/N050F/T054H,S023N/G024M,T004S/G024Y,R047K/N050Y/T054H,T059W/S066N/S129I,R047K/T054L,T004S/S023W/G024W,M138L/E152F/T146S,D220P/S265N,T004S/G024M,T004V/S023N,N046Q/N050F/T054K,N046Q/N050Y/T054H,Q062H/S066Q/S129Q,T059W/S129Q,T059W/S129V,N050F/T054K,R047K/N050F/T054L,V190I/D220P/S265W,N112I/T263H/A273H/S285R,T059W/S066N/S129V,T059W/S066Q/S129I,T059W/S129I,T263W/S285P,V190I/D220P,A289V/T263H/A273H,T263H/A273H/S285P,N90S/A273H/S285P,R047K/N050Y/T054L,T004S/S023N,T059R/S129Q,N046Q/R047K/T054H,T059W/S066Q/S129V,E152W/T179P,N050Y/S066Q/S129V,T202S/T263W/A273H,T263W/A273H/S285P,M138L/E152W/T179P,N046Q/R047K,N046Q/T054H/F176L,T004L/G024M,T004S/L282M,T263H/A273H,T263H/A273H/S285W,T004L/S023Y/G024M,L282F/Q286P,T004V/S023Y/G024Y,V190F/S265W,M138L/E152F,V190F/D220E/S265W,N046Q/N050F/T054H,N157Y/S285W,T004F/S023Y/G024M,T004V/S023N/G024M,L198I/D220E/S265Q,N046Q/N050Y/T054K/A154T,S016L/D220E/S265W,D220E/S265W,D220E/A237S/S265W,S066Q/S129Q,V190F/D220E/S265Q/T267I,L282M/F173Y/T219S,E152F/T179P,V190I/S265W,M138L/S066Q,M138L/E152W,T059W/S066Q/A070T/S129I,V190F/D220E/S265N,V190F/S265N,N046Q/N050Y,和M138L/E152F/T179P，或(b)(a)中所述的多个突变和选自如下的至少一个突变，其中所述变体与包含SEQIDNO:3或SEQIDNO:18的中性金属蛋白酶具有至少95％或至少98％氨基酸同一性：T004C,T004E,T004H,T004I,T004K,T004L,T004M,T004N,T004P,T004R,T004S,T004V,T004W,T004Y,G012D,G012E,G012I,G012K,G012L,G012M,G012Q,G012R,G012T,G012V,G012W,K013A,K013C,K013D,K013E,K013F,K013G,K013H,K013I,K013L,K013M,K013N,K013Q,K013S,K013T,K013V,K013Y,T014F,T014G,T014H,T014I,T014K,T014L,T014M,T014P,T014Q,T014R,T014S,T014V,T014W,T014Y,S023A,S023D,S023F,S023G,S023I,S023K,S023L,S023M,S023N,S023P,S023Q,S023R,S023S,S023T,S023V,S023W,S023Y,G024A,G024D,G024F,G024G,G024H,G024I,G024K,G024L,G024M,G024N,G024P,G024R,G024S,G024T,G024V,G024W,G024Y,K033H,Q045C,Q045D,Q045E,Q045F,Q045H,Q045I,Q045K,Q045L,Q045M,Q045N,Q045P,Q045R,Q045T,Q045W,N046A,N046C,N046E,N046F,N046G,N046H,N046I,N046K,N046L,N046M,N046P,N046Q,N046R,N046S,N046T,N046V,N046W,N046Y,R047E,R047K,R047L,R047M,R47Q,R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【专利技术属性】
技术研发人员：A·肖，L·华莱士，D·A·埃斯特拉，R·霍莫斯，SK·李，E·S·萨德洛夫斯基，H·欧，
申请(专利权)人：金克克国际有限公司，宝洁公司，
类型：发明
国别省市：美国;US