一种银杏内酯C的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种银杏内酯C的制备方法，其特征在于包含下列步骤：将银杏叶粗提物用大孔反相吸附树脂进行柱层析分离，即可；其中，所述的大孔反相吸附树脂的参数如下：粒径为50～100μm，孔径为树脂骨架为聚苯乙烯-二乙烯苯。本发明专利技术的制备方法不仅产物收率高，且可以达到很高的产物纯度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种银杏内酯C的制备方法。
技术介绍
银杏(Ginkgo biloba L.)为银杏科银杏属植物，大约出现于二亿年前，在冰川世纪几近灭种，仅在我国幸存，被达尔文称为“活化石”。随着对银杏叶研究的深入， 现已证明银杏叶的活性成分主要是黄酮和内酯类化合物。其中内酯类化合物有银杏内酯 A(BN52020)、银杏内酯 B(BN52021)、银杏内酯 C(BN52022)、银杏内酯 M(BN52023)、 银杏内酯J(BN52024)及白果内酯。研究表明，银杏内酯均为强血小板活化因子 (platelet-activating factor, PAF)受体拮抗剂。它们独特的药理作用和治疗价值已引起世界范围制药界的极大兴趣。随着对银杏叶中有效药用成分的逐渐明确，单一有效成分新药成为近十年来开发的目标。银杏内酯是仅在银杏叶中发现的一类具有特殊结构及显著药理活性的重要成分， 迄今尚未发现存在于其他任何植物中，更重要的是它们具有独特的药理作用和治疗价值。目前，银杏叶仍是工业生产中提取银杏内酯化合物的主要原料。银杏内酯的提取分离方法报道较多，但由于银杏叶中这类化合物含量很低，且具有特定结构，因此提取分离步骤费时且得率低。何捃等人发表的《DA201型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中银杏内酯A、B、C和白果内酯的研究》(何捃，何照范等.DA201型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中银杏内酯A、B、C和白果内酯的研究.中草药.2004. 12(35))中采用大孔吸附树脂 DA201提纯，并通过两次结晶的办法得到纯度为95%的银杏内酯C，此方法的缺点在于树脂的提取收率低，只有75%，且银杏内酯C的纯度不高，结晶后的纯度只有95%。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有的银杏内酯C的提取分离方法中，收率和纯度都很低的缺陷，而提供了一种银杏内酯C的制备方法。本专利技术的制备方法不仅产物收率高，且可以达到很高的产物纯度。本专利技术人经过大量研究，发现采用一种特别选择的大孔反相吸附树脂对银杏叶粗提物进行分离，可得到很高收率的银杏内酯C。本专利技术人还进一步优化了吸附洗脱条件，使得银杏内酯C的收率大于80%，且纯度大于90%，并且可通过两次结晶使得银杏内酯C的纯度达到98%以上。因此本专利技术涉及一种银杏内酯C的制备方法，其包含下列步骤将银杏叶粗提物用大孔反相吸附树脂进行柱层析分离，即可；所述的大孔反相吸附树脂的参数如下粒径为50 100 μ m，孔径为90 110A，树脂骨架为聚苯乙烯-二乙烯苯。其中，所述的孔径较佳的为100 A。所述的粒径较佳的为70 80 μ m。所述的大孔反相吸附树脂更佳的为苏州纳微生物科技有限公司生产的大孔反相吸附脂，型号为匪PS100，其粒径为50 ΙΟΟμπι， 孔径为100人，树脂骨架为聚苯乙烯-二乙烯苯。所述的大孔反相吸附树脂在使用前，较佳的先进行预处理，预处理的方法可为本领域常规的预处理该类树脂的方法。优选的方法如下用酸水溶液冲洗树脂，再用去离子水洗到中性，即可。其中，所述的酸水溶液中的酸可为无机酸，如盐酸，其摩尔浓度较佳的为 0. 5 2N，优选1 1. 5N。酸水溶液较佳的为酸的丙酮水溶液，丙酮的体积浓度较佳的为 60 % 80 %，优选70 %。酸水溶液的用量较佳的为2 5个柱体积，优选2 3个柱体积。 更佳的预处理步骤如下将含IN盐酸的70%丙酮水溶液冲洗树脂，用量为;3BV，再用去离子水洗到中性。其中，所述的BV表示柱体积，为本领域常规单位。其中，所述的银杏叶粗提物可为本领域常规的经过溶剂提取和/或萃取等方法而制得的银杏叶粗提物。本专利技术中，所述的银杏叶粗提物可为醇提和/或酯溶剂萃取所得的粗提物，其中所述的醇可为乙醇，酯可为乙酸乙酯。较佳的，所述的银杏叶粗提物可由下列方法制得(1)将银杏叶用乙醇水溶液浸泡提取后离心，取上清液；(2)将步骤(1)所得物质用乙酸乙酯萃取。步骤(1)中，所述的银杏叶较佳的为干银杏叶。在浸泡提取前较佳的先将银杏叶用水洗，水洗的次数较佳的为1次。所述的乙醇水溶液的体积浓度较佳的为40% 80%， 更佳的为50% 70%。每次提取所用的乙醇水溶液与银杏叶的体积质量比较佳的为3 8L/Kg，更佳的为5L/Kg。所述的每次浸泡的时间较佳的为1 3小时，更佳的为2小时。浸泡的温度较佳的为60 80°C。所述的浸泡提取以及离心的次数较佳的为1 3次，更佳的为2次。得到上清液后，较佳的再进行浓缩除去乙醇，得浓缩液。步骤⑵中，在用乙酸乙酯萃取之前，较佳的先用无机酸调节步骤(1)所得的浓缩液的pH至2 6，优选3 4，其中无机酸优选盐酸。萃取的次数较佳的为1 3次，优选2 次。乙酸乙酯的用量较佳的为步骤(1)所得物质的1 3倍体积，优选1. 5倍体积。所述的萃取较佳的包含下列步骤先用乙酸乙酯萃取，弃去萃余相，再将萃取相中加入水，震荡混合后弃去水相，得酯相，即可。更佳的，将酯相浓缩，除去乙酸乙酯，即可。本专利技术中，所述的用大孔反相吸附树脂进行柱层析分离的方法和条件均可为本领域常规的用大孔反相吸附树脂进行柱层析分离的方法和条件，本专利技术人经过大量研究，摸索出以下特别优选的步骤和条件以体积浓度30% 35%的乙醇水溶液为洗脱剂，将银杏叶粗提物用大孔反相吸附树脂进行柱层析分离，即可。较佳的，在所述的柱层析分离中，收集银杏内酯C的纯度大于80% (优选大于 90%)的洗脱液，即可。其中，所述的柱层析分离的步骤较佳的如下将银杏叶粗提物上柱后，先用体积浓度20% 25%的乙醇水溶液进行洗脱除杂，再用体积浓度30% 35%的乙醇水溶液进行洗脱，收集银杏内酯C的纯度大于80% (优选大于90%)的洗脱液，即可。其中，所述的体积浓度20% 25%的乙醇水溶液的用量较佳的为4 6个柱体积，更佳的为5个柱体积，体积浓度30% 35%的乙醇水溶液的用量较佳的为3 5个柱体积，更佳的为4个柱体积。本专利技术中，银杏内酯C纯度的检测较佳的采用HPLC方法，以银杏内酯C标准品为对照。本专利技术中，在将银杏叶粗提物用大孔反相吸附树脂进行柱层析分离之前，较佳的， 先将银杏叶粗提物溶于体积浓度10% 15%的乙醇水溶液中，得银杏叶粗提物乙醇溶液， 再上柱进行柱层析分离。该银杏叶粗提物乙醇溶液的PH值较佳的为2 4，其pH值可由无机酸调节，所述的无机酸较佳的为盐酸。本专利技术中，在大孔反相吸附树脂柱层析分离结束后，较佳的还包含下列步骤将柱层析分离所得物质进行本领域常规的结晶步骤，得银杏内酯C晶体，即可。其中，所述的结晶步骤较佳的包含下列步骤(1’)将柱层析分离所得的洗脱液在20 40°C (优选25°C )下浓缩至无醇味，用无机酸调节所得的浓缩液的PH至2 4，其中无机酸优选盐酸，用乙酸乙酯萃取，得酯相，将酯相浓缩，除去乙酸乙酯，得到固体；(2')将步骤(1’)所得固体用无水乙醇溶解，溶解后加入蒸馏水，当出现浑浊后于 2 10°C (优选4°C )条件下静置10 M小时，得银杏内酯C粗晶体；(3’ )将步骤(2’ )所得银杏内酯C粗晶体用蒸馏水洗涤，再重复步骤(2’)，即可得银杏内酯C晶体。步骤(1’ )中，根据本领域常识，浓缩蒸出乙醇的速度不宜过快；萃取时乙酸乙酯的用量较佳的为浓缩液体积的1 3倍，更佳的为浓缩液体积的2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李继安，郭瑞峰，卢亮，
申请(专利权)人：上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：