一种注射用银杏二萜内酯的含量测定方法技术

本发明专利技术涉及一种注射用银杏内酯的含量检测方法，特别是涉及一种应用HPLC-ELSD法同时测定注射用银杏内酯中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯K的含量的方法。该方法采用C18色谱柱，以四氢呋喃-水-甲醇(正丙醇)为流动相，采用梯度洗脱的方式测定内酯含量。本发明专利技术技术简便、快速、准确，为注射用银杏二萜内酯的质量控制提供了一定的科学依据。

【技术实现步骤摘要】
一种注射用银杏二萜内酯的含量测定方法本申请要求于2014年03月16日提交中国专利局、申请号为201410104189.9、专利技术名称为：“一种注射用银杏二萜内酯的含量测定方法”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
本专利技术涉及中药领域，特别涉及一种中药注射剂的含量测定方法。
技术介绍
注射用银杏二萜内酯由江苏康缘药业股份有限公司生产的银杏二萜内酯葡胺注射液改剂型而成，具有稳定性更好，便于储存及运输的特点，为临床应用提供方便。注射用银杏二萜内酯原料的主要成分是银杏二萜内酯A、B、C、K。研究表明，银杏二萜内酯是很强的血小管活化因子(PAF)拮抗剂，具有抗血小板聚集作用、保护中枢神经系统、对缺血损伤的保护作用、抗动脉粥样硬化和抗炎等药理作用。现有研究中，还没有同时对银杏内酯A、B、C、K进行含量测定的方法。为保证注射用银杏二萜内酯的质量、为患者提供安全、有效的药品，本领域技术人员创造本专利技术技术。本专利技术技术简便、快速、准确，为注射用银杏二萜内酯的质量控制提供了一定的科学依据。
技术实现思路
一种注射用银杏二萜内酯的含量的测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)制备银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯K混合对照品溶液；(2)取注射用银杏二萜内酯样品，加水溶解，定量；再精密量取一定的样品，加入盐酸，再加入甲醇稀释、定容，得供试品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用C18色谱柱，流动相为四氢呋喃-水-甲醇或四氢呋喃-水-正丙醇或甲醇-水或乙腈-水或异丙醇-水，梯度洗脱，流速0.5～1.5mL·min-1，柱温20℃～50℃；蒸发光检测器以氮气为载气，流速1.0～5.0L·min-1，漂移管温度90～120℃；(4)取注射用银杏二萜内酯样品，按照步骤(2)的方法配制成溶液，在步骤(3)的条件下测定银杏内酯A、B、C、K的含量。优选的，步骤(1)中混合对照品溶液是按照如下方法制备：将银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品、银杏内酯K对照品适量，加甲醇制成每1mL溶液含银杏内酯A0.32mg、银杏内酯B0.52mg、银杏内酯C0.05mg、银杏内酯K0.04mg的混合对照品溶液。优选的，供试品溶液按照以下方法制备：取注射用银杏二萜内酯，加水使溶解，定量转移至25mL容量瓶中，定容至刻度；精密量取2mL，置于10mL量瓶中，加6moL·L-1盐酸2mL，静置3.5小时，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。本专利技术所述注射用银杏二萜内酯的处方工艺是：(1)取葡甲胺加注射用水溶解，加热至80℃，缓缓加入银杏内酯，加热搅拌至溶解，加入甘露醇，搅拌溶解，加注射用水补足，用10％柠檬酸溶液调pH值8.0～9.0；(2)在25℃条件下，加活性炭，适当搅拌20分钟；(3)粗滤过滤，除去活性炭，至溶液澄清；(4)精滤过滤液，使用0.22μm微孔滤膜精滤，备用；(5)灌装、西林瓶半加塞；(6)冷冻干燥预冻温度-40℃，预冻时间4小时；升华干燥温度-10℃，升华干燥时间16小时；解吸干燥温度20℃，解吸干燥时间8小时；(7)压塞、轧盖。依照上述处方工艺，制备注射用银杏二萜内酯不含银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯K的阴性样品溶液。本专利技术提供了一种同时测定注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯K含量的方法。该方法包括以下步骤：混合对照品溶液制备；供试品溶液制备；样品应用HPLC-ELSD法进行含量测定。所述混合对照品溶液是取银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品、银杏内酯K对照品适量，加甲醇制成。所述供试品溶液是取注射用银杏二萜内酯样品，加水溶解，定量；再精密量取一定的样品，加入盐酸，再加入甲醇稀释、定容，制成。所述HPLC-ELSD法的条件为：色谱柱采用C18色谱柱，流动相为四氢呋喃-水-甲醇或四氢呋喃-水-正丙醇或甲醇-水或乙腈-水或异丙醇-水，梯度洗脱，流速0.5～1.5mL·min-1，柱温20℃～50℃；蒸发光检测器以氮气为载气，流速1.0～5.0L·min-1，漂移管温度90～120℃。具体实验例为进一步说明本专利技术的实验效果，专利技术人进行了相关实验研究。实验中所用仪器与试药包括：Agilent1200型高效液相色谱仪，Alltech2000ES蒸发光散射检测器，银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品、银杏内酯K对照品(均购自中国食品药品检定研究院)，注射用银杏二萜内酯(江苏康缘药业股份有限公司提供)。本专利技术中混合对照品溶液按照以下方法制备：取银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品、银杏内酯K对照品适量，加甲醇制成每1mL溶液含银杏内酯A0.32mg、银杏内酯B0.52mg、银杏内酯C0.05mg、银杏内酯K0.04mg的混合对照品溶液。本专利技术中供试品溶液按照以下方法制备：取注射用银杏二萜内酯5瓶，加水使溶解，定量转移至25mL容量瓶中，定容至刻度。精密量取2mL，置于10mL量瓶中，加6mol·L-1盐酸2mL，静置3.5小时，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。所述注射用银杏二萜内酯按照以下工艺制备：(1)取葡甲胺加注射用水溶解，加热至80℃，缓缓加入银杏内酯，加热搅拌至溶解，加入甘露醇，搅拌溶解，加注射用水补足，用10％柠檬酸溶液调pH值8.0～9.0；(2)在25℃条件下，加活性炭，适当搅拌20分钟；(3)粗滤过滤，除去活性炭，至溶液澄清；(4)精滤过滤液，使用0.22μm微孔滤膜精滤，备用；(5)灌装、西林瓶半加塞；(6)冷冻干燥预冻温度-40℃，预冻时间4小时；升华干燥温度-10℃，升华干燥时间16小时；解吸干燥温度20℃，解吸干燥时间8小时；(7)压塞、轧盖。精密量取10μL供试品溶液注入液相色谱仪，按照以下色谱条件进行检测色谱柱采用PhenomenexLunaC18(4.6mm×250mm，5.0μm)色谱柱；流动相为：四氢呋喃-水-甲醇或四氢呋喃-水-正丙醇或甲醇-水或乙腈-水或异丙醇-水，三相洗脱时以四氢呋喃为流动相A，以水为流动相B，以甲醇或正丙醇为流动相C，梯度洗脱程序见表1，两相洗脱时以水为流动相A，以甲醇或乙腈或异丙醇为流动相B，梯度洗脱程序见表2；流速为1mL·min-1；柱温为30℃；蒸发光检测器，以氮气为载气，流速3.0L·min-1，漂移管温度105℃，撞击器为“on”，增益8。表1梯度洗脱程序表2梯度洗脱程序在选择流动相过程中，为保证银杏二萜内酯A、B、C、K分离度，分别考察了四氢呋喃-水-甲醇、四氢呋喃-水-正丙醇、甲醇-水、乙腈-水、异丙醇-水等流动相系统，经比较采用四氢呋喃-水-甲醇系统或者四氢呋喃-水-正丙醇系统时各成分色谱峰形、分离度较佳，基线平稳，优选采用四氢呋喃-水-甲醇为流动相系统。由于银杏二萜内酯K和银杏二萜内酯A、B、C的极性相差较大，采用等度洗脱银杏二萜内酯K出峰时间比较晚，分离时间较长。而本方法采用梯度洗脱使银杏二萜内酯A、B、C、K能在20min内达到快速分离且分离度较好。因此，专利技术人优选的色谱条件为：色谱柱采用PhenomenexLunaC18(4.6mm×250mm，5.0μm)色谱柱；流动相为：四氢呋喃-水-甲醇或四氢呋喃-水-正丙醇，以四氢呋喃为流动本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种注射用银杏二萜内酯的含量的测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)制备银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯K混合对照品溶液；(2)取注射用银杏二萜内酯样品，加水溶解，定量；再精密量取一定的样品，加入盐酸，再加入甲醇稀释、定容，得供试品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用C18色谱柱，流动相为四氢呋喃‑水‑甲醇或四氢呋喃‑水‑正丙醇或甲醇‑水或乙腈‑水或异丙醇‑水，梯度洗脱，流速0.5～1.5mL·min‑1，柱温20℃～50℃；蒸发光检测器以氮气为载气，流速1.0～5.0L·min‑1，漂移管温度90℃～120℃；(4)取注射用银杏二萜内酯样品，按照步骤(2)的方法配制成溶液，在步骤(3)的条件下测定银杏内酯A、B、C、K的含量。

【技术特征摘要】
2014.03.16 CN 20141010418991.一种注射用银杏二萜内酯的含量的测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)制备银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和银杏内酯K混合对照品溶液；(2)取注射用银杏二萜内酯样品，加水溶解，定量；再精密量取一定的样品，加入盐酸，再加入甲醇稀释、定容，得供试品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用C18色谱柱，流动相为四氢呋喃-水-甲醇，梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0～13min，四氢呋喃为10％、水为30％、甲醇为60％，14～16min，四氢呋喃为10％、水为60％、甲醇为30％，流速0.5～1.5mL·min-1，柱温20℃～50℃；蒸发光检测器以氮气为载气，流速1.0～5.0L·min-1，漂移管温度90℃～120℃；(4)取注射用银杏二萜内酯样品，按照步骤(2)的方法配制成溶液，在步骤(3)的条件下测定银杏内酯A、B、C、K的含量。2.如权利要求1所述测定方法，其特征在于，步骤(1)为：将银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品、银杏内酯C对照品、银杏内酯K对照品适量，加甲醇制成每1mL含...

【专利技术属性】
技术研发人员：萧伟，王振中，毕宇安，孙永成，万琴，伍清龙，章晨峰，于丹，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32