本申请公开了这样的血管生成肽，即其引起靶细胞中细胞内钙释放，从而诱发原代培养的内皮细胞的增殖、迁移和毛细血管样管形成。所述血管生成肽可以用于预防和／或治疗血管生成相关病症，尤其是创伤愈合、治疗受试者的足腿溃疡，等。另外，所述血管生成肽可以用于化妆品，作为针对皮肤老化的化妆品组分，例如用于抗皱和皮肤美白。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及引起靶细胞中细胞内钙释放并从而诱发原代培养的内皮细胞的增殖、 迁移和毛细血管样管形成的血管生成肽。另外，所述血管生成肽可以用于预防和/或治疗 血管发生相关病症，尤其是创伤愈合、治疗受试者的足腿溃疡，等。另外，所述血管生成肽可 以用于化妆品，作为针对皮肤老化的化妆品组分，例如用于抗皱和皮肤美白。
技术介绍
血管发生——从已有血管系统长出新血管——是多种生理和病理状况下的 基本过程，所述生理和病理状况包括创伤愈合、胚胎发育、慢性炎症和肿瘤进展和转移 (J. Folkman, Nat. Med. 1 (1995)，pp. 27-31 ；W. Risau, Nature 386 (1997)，pp. 671-674)。在 血管发生过程中会发生复杂的细胞过程，包括内皮细胞的细胞外基质降解、增殖、迁移和形 态分化以形成管。该整个过程受调节新血管形成的局部因子的协调(F.BUSS0lin0，et al.， Trends Biochem. Sci. 22 (1997)，pp. 251-256)，血管生成平衡的变化可以介导“血管生成开 关”。对血管生成开关的干扰可以引起严重的血管问题。钙在由多种细胞外刺激诱发的信号传递事件中以及对大量不同细胞功能的协调 过程中起到关键作用(M. J. Berridge, Nature 361(1993)，pp. 315-325 ；K. Kiselyov, et al. , Cell Signal 15(2003), pp. 243-253).细胞内Ca2+增加是人内皮细胞的粘附、溶胶 原活性、迁移和增殖以及体内毛细血管生长必不可少的(E. C. Kohn, et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92 (1995)，pp. 1307-131)。实际上，血管内皮生长因子(VEGF)——一种受 体酪氨酸激酶(RTK)配体一一和1-磷酸鞘氨醇(SlP)——一种G蛋白偶联受体(GPCR)配 体——通过调节细胞内Ca2+水平诱导新血管形成(M. i^aehling，et al.，FASEB J. 16(2002)， pp. 1805-1807 ；Μ. Guidoboni, et al.，Cancer Res. 65(2005), pp. 587—595)。因此，对内皮 细胞中的Ca2+动员特性进行研究可能提供重要的信息，用于全面地理解血管发生涉及的生 理过程。合成肽组合文库位置扫描策略(PS-SPCL)已经被用于分离具有血管生成潜力的 肽(R. A. Houghten, et al.，Nature 354(1991)，pp. 84-86)。而且，所述 PS-SPCL 方法已被 成功地应用于筛选参与多种生物过程的有用肽，由此鉴定出数种肽，如，白细胞介素-8特 异性拮抗物(S. Hayashi, et al.，J Immunol. 154(1995)，pp. 814-824)、激活的 T 细胞的 核因子的抑制物(J. Aramburu, et al, Science 285(1999)，pp. 2129-2133)和免疫调节肽 (Y. S. Bae, et al.，Blood 97 (2001)，pp. 2854-2862)。
技术实现思路
进行合成肽文库筛选以得到作用于内皮细胞的生物活性合成肽，本专利技术人已鉴定 出在体外(in vitro)和离体(ex vivo)条件下强力诱导血管生成活性的新型肽。而且，本 专利技术人提供了这样的证据，即SraLRY-NH2的血管生成活性受到内皮细胞中VEGF-A诱导的 介导。本专利技术的一个实施方案提供了一种选定的长度为6-15个氨基酸的血管生成肽序 列，所述血管生成肽序列具有如下活性促进细胞迁移、血管发生或胶原合成，或者抑制黑 色素形成。所述血管生成肽包括基本六肽以及由1-9个氨基酸组成的连接肽。任选地，所 述血管生成肽通过以-NH2取代C末端羧基而被修饰。所述血管生成肽的血管生成活性受 到血管内皮生长因子(VEGF)上调的介导。本专利技术的另一个实施方案提供了一种用于治愈创伤、促进胶原合成或抑制黑色素 合成的包含血管生成肽的组合物。所述组合物是一种用于创伤愈合的药物组合物，其包含 作为活性成分的血管生成肽和可药用载体。所述组合物是一种用于改善老化皮肤状况的化 妆品组合物，其包含作为活性成分的血管生成肽和化妆品可用载体。所述化妆品组合物是 具有抗皱和皮肤美白活性的活性组合物。又一实施方案提供了一种促进哺乳动物中血管发生的方法，所述方法包括对有需 要的受试者给予有效量的血管生成肽。再一实施方案提供了一种治愈受试者的创伤的方法，包括如下步骤对有需要的 所述受试者给予创伤愈合有效量的血管生成肽或其肽模拟物。在另一方面中，本专利技术涉及一种改善皱纹的方法，包括对有需要的受试者给予有 效量的血管生成肽或其肽模拟物。在又一方面中，本专利技术涉及一种减少皮肤色素沉着的方法，包括对有需要的受试 者给予有效量的血管生成肽或其肽模拟物。在另一方面中，本专利技术涉及一种鉴定抗血管生成分子的方法，包括如下步骤提供 一种内皮细胞；将所述细胞与候选拮抗化合物相接触；以及如果所述候选拮抗化合物抑制 上述多肽或其肽模拟物的血管生成活性，则将所述候选拮抗化合物鉴定为拮抗化合物。附图说明通过下文对本专利技术的描述、参照的其附图和其随附的权利要求书，将可以更全面 地理解本专利技术的这些目标和其他目标。通过本文下文给出的详细描述以及附图将可以更全面地理解本专利技术，所述附图仅 仅是以示例的方式给出，因此不是对本专利技术的限制，其中图1A-1F示出针对使MS-I细胞的细胞内钙升高的肽进行的初始PS-SPCL筛查， 其中每幅图示出了已知氨基酸在所述六肽的6个位置中的每一位置上的肽库(peptide pool)得到的结果。所述6个位置由19个L-氨基酸中的一个分别定义(例如01、02)。剩 余的5个位置由所述19个L-氨基酸(不包括半胱氨酸(cystein))的混合物(X)组成。 所述文库由114个肽库组成；PS-SPCL总共由47，045，881种不同肽构成。如“材料和方法” 中所述，使用Fura-2/AM通过荧光分析测定[Ca2^i升高。该结果表示3次独立实验中的一 次。图2A-2C示出SFKLRY-NH2 (SEQ ID NO :2)诱导HUVEC增殖、迁移和管形成。将细 胞以不同浓度的SraLRY-NH2 (SEQ ID NO 2) (0. 1-10 μ Μ)处理。在孵育48小时后，以液体 闪烁计数器对DNA合成的活性计数。竖条代表3次独立实验的平均值士S. D.。乍< 0. 05。 (B)不同剂量Si7KLRY-NH2 (SEQ ID NO 2)引起的HUVEC迁移率。在创伤后，将HUVEC以标 明浓度的SraLRY-NH2 (SEQ ID NO 2) (0. 1-10 μ Μ)孵育16小时，然后对超出参考线的迁移HUVEC计数。值代表了进行2次重复的3次独立实验(平均值士S. D.)。乍< 0. 05。(C) SFKLRY-NH2 (SEQ ID NO 2)对HUVEC管形成的影响。将HUVEC接种于减少生长因子的基质 胶(Matrigel)上并以 SFKLRY-NH2 (本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种血管生成肽序列，选自长度为６－１５个氨基酸且包含氨基酸序列Ｘ１ＦＸ２ＬＲＸ３作为基本部分的肽： Ｘ↓［１］ＦＸ↓［２］ＬＲＸ↓［３］ 其中Ｘ１是丝氨酸或苏氨酸； Ｘ２是赖氨酸、精氨酸或异亮氨酸；并且 Ｘ３是苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、精氨酸或组氨酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：李泰勋，
申请(专利权)人：诺娃细胞科技公司，
类型：发明
国别省市：KR
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