高活性的肿瘤抑制剂及其制法和应用制造技术

本发明专利技术提供了高活性的肿瘤抑制剂及其制法和应用。具体地，本发明专利技术获得了YAP蛋白与TEAD的关键结合位点，筛选出YAP抑制活性最佳的多肽并对其进行改造，例如加入二硫键、对氨基酸进行替换、缺失和/或添加(如加入细胞穿透片段)，并最终筛选并验证获得了具有YAP蛋白活性抑制作用且稳定性良好的系列多肽。实验证明，本发明专利技术多肽能够有效抑制YAP蛋白与TEAD结合活性，从而对消化道肿瘤(尤其是肝癌)具有良好的治疗作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及肿瘤治疗领域，具体地，涉及新的YAP蛋白抑制多肽，用于治疗消化道肿瘤。
技术介绍
肝癌是全球高发病率的癌症种类之一，特别是在中国，由于病毒性肝炎高发，慢性病毒性肝炎的主要预后将发展成为肝硬化，以致肝癌。目前的医疗水平还没有掌握任何技术和方法可以治愈肝癌，最主要的治疗方法是采取外科手术局部切除肿瘤，极少数可以进行肝脏切除并接受肝脏移植。由于没有办法彻底清除潜在的病灶，接受手术后肝癌的复发率极高，据统计，3年内的复发率约40％，七年内超过90％。近年来，虽然已经开发了各种不同的肿瘤治疗药物和手段，但对于肝癌等恶性肿瘤，疗效并不理想。因此本领域迫切需要寻找一种有效的治疗消化道肿瘤，尤其是肝癌的方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种创新的消化道肿瘤治疗药物，所述药物为多肽，可极其有效地抑制YAP蛋白，进而抑制肿瘤。本专利技术提供了一种YAP蛋白抑制多肽及其用于治疗消化道肿瘤尤其是肝癌的用途。本专利技术第一方面，提供了一种分离的多肽，所示的多肽具有式A所示的结构：X0-Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-XA-XE-XF式A式中，X0或XA为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；Y1为AP、VP、或无；Y2为X1-X2-X2a，其中X1选自M、F、C或Hcy；X2为任意氨基酸残基(较佳地X2为C、Hcy、L、M、F)；以及X2a为L、Nle、C、Hcy、K或R；Y3为X3a-X3-X4，其中X3a为碱性氨基酸R或K；X3为任意氨基酸(较佳地X3为K、R、Hcy、C、Orn或Dab)；以及X4为任意氨基酸(较佳地为L、Nle、Hcy、C),且Y3中至少一个氨基酸为Hcy或C；Y4为P；Y5为X5，且X5为任意氨基酸(较佳地X5为A、D、或E)；Y6为S-X6a-X6，其中X6a为F、C、或Hcy；和X6为任意氨基酸残基(较佳地X6为C、Hcy、F、K或R)Y7为X7-P-X7a，其中X7为任意氨基酸残基(较佳地X7为C、Hcy、K、R或P)；以及X7a为C、Hcy或P；XE为无或细胞穿透元件；XF为无或K；且所述的多肽具有Yes相关蛋白(Yes-associatedprotein，YAP)活性抑制作用。在另一优选例中，所述细胞穿透元件的末端为K(lys)。在另一优选例中，XA为K。在另一优选例中，XE为无且XA为K。在另一优选例中，XA为无且XE为K。在另一优选例中，Y2和/或Y3中至少一个氨基酸为Hcy或C；和Y6或Y7中至少一个氨基酸为Hcy或C。在另一优选例中，Y2中至少一个氨基酸为Hcy或C。在另一优选例中，Y3中的X3a或X3为Hcy或C。在另一优选例中，Y5(或X5)为Hcy或C，或任意氨基酸残基。在另一优选例中，Y6中的X6a或X6为Hcy或C。在另一优选例中，Y7中的X7或X7a为Hcy或C。在另一优选例中，所述的XE为细胞穿透元件。在另一优选例中，所述的X1、X2、X2a、X3、X3a、X5、X6、X6a、X7和X7a之间任选地形成至少一对二硫键。在另一优选例中，所述的X1、X2、X2a、X3、X3a、X5、X6、X6a、X7和X7a之间任选地形成1或2对二硫键。在另一优选例中，所述的二硫键在选自X1、X2、X2a、X3、X3a的一个氨基酸与选自X5、X6、X6a、X7和X7a的一个氨基酸之间形成。在另一优选例中，所述的二硫键位于X1和X6a之间、X2和X6之间、X2a和X7之间、X3a和X7之间、X3和X7a之间。在另一优选例中，所述的二硫键位于X2与X6之间、X5与X7之间、X2与X7之间、或X5与X6之间。本专利技术第二方面，提供了一种分离的多肽，所述的多肽具有式V所示的结构：X0-Z-XA-XE-XF(V)式中，X0或XA为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；XE为无或细胞穿透元件；XF为无或K；Z为具有引入的链内二硫键的YAP抑制多肽，并且所述Z中去除所述链内二硫键所对应的氨基酸之后具有式Va所示的基本序列：Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-Z11-Z12-Z13-Z14-Z15-Z16式Va式中，Z1为V、A或无；Z2为P、A或无；Z3为M、F、L或氯苯丙氨酸；Z4为R、K、A或无；Z5为L、Nle、A或无；Z6为R、或K；Z7为K、R、Orn、Dab、或A；Z8为L、或Nle；Z9为P；Z10为任意天然或非天然氨基酸，优选D、A、V、L、I或E；Z11为S、或T；Z12为F、L、或氯苯丙氨酸；Z13为F、L、氯苯丙氨酸、或无；Z14为K、R、A或无；Z15为P、A或无；Z16为P、A或无；其中，所述的二硫键的第一氨基酸B1位于所述基本序列中Z1至Z8所构成的第一区段中任意两个氨基酸之间或位于所述第一区段的第一个氨基酸之前，而二硫键的第二氨基酸B2位于所述基本序列中Z9至Z16所构成的第二区段中任意两个氨基酸之间或位于所述第二区段的最后一个氨基酸之后。在另一优选例中，Z4和Z5不同时为无。在另一优选例中，第一氨基酸B1位于Z2和Z3之间、Z3和Z4之间、Z3和Z5之间(此时Z4为无)、Z4和Z5之间、Z7和Z8之间；和/或第二氨基酸B2位于Z11和Z12之间、Z12和Z13之间、Z13和Z14之间、Z14之后(此时Z15和Z16为无)、Z15之后(此时Z16为无)、Z16之后。在另一优选例中，所述式Va中Z3至Z13所示序列与SEQIDNO.:1中第3－13位所示的序列相差不超过1、2、3、4、5个氨基酸，较佳地，不超过3、4个氨基酸。注：SEQIDNO.:1中第3-13位或对应于的Z3至Z13所构成的序列为核心序列。在另一优选例中，第一氨基酸B1和第二氨基酸B2之间间隔3-14个(较佳地4-12个，更佳地4-10个，最佳地7、8、或9个)氨基酸。在另一优选例，所述的第一氨基酸B1和第二氨基酸B2各自独立地选自Hcy或C。在另一优选例中，一个或多个选自Z1、Z2、Z14-Z16的氨基酸为无。在另一优选例中，所述的任意氨基酸包括天然或非天然氨基酸。在另一优选例中，所述二硫键之间的间隔距离为4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸(不含形成二硫键的氨基酸)。较佳地，间隔距离为5、6、7、8、或9个氨基酸。在另一优选例中，所述二硫键的数量为1对。在另一优选例中，所述式A或式V多肽含有至少一个非天然氨基酸。在另一优选例中，所述式A或式V多肽与SEQIDNo.:1的相同性(或同源性)≥50％，≥60％，≥70％，≥80％，≥90％。在另一优选例中，所述式A或式V多肽保留了SEQIDNo.:1的生物活性的至少≥50％，≥60％，≥70％，≥80％，≥90％、≥100％，例如80-500％，较佳地100-400％。在另一优选例中，所述的生物活性指的是YAP-TEAD结合抑制活性。在另一优选例中，所述的多肽具有式I所示的结构：X0-VP-X1-X2-LRX3-X4-P-X5-SF-X6-X7-PP-XA-XE-XF式I，且所述的多肽满足以下特征：(a)X0或XA为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；(b)X1选自M或F；(c)X2、X5、X6或X7分别为任意氨基酸残基，且所述的X2、X5、X6和X7之间任选地形成至少一对二硫键；(d)X3或X4为任意氨基酸；和(e)X本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，其特征在于，所示的多肽具有式A所示的结构：X0‑Y1‑Y2‑Y3‑Y4‑Y5‑Y6‑XA‑XE‑XF          式A式中，X0或XA为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；Y1为AP、VP、或无；Y2为X1‑X2‑X2a，其中X1选自M、F、C或Hcy；X2为任意氨基酸残基(较佳地X2为C、Hcy、L、M、F)；以及X2a为L、Nle、C、Hcy、K或R；Y3为X3a‑X3‑X4，其中X3a为碱性氨基酸R或K；X3为任意氨基酸(较佳地X3为K、R、Hcy、C、Orn或Dab)；以及X4为任意氨基酸(较佳地为L、Nle、Hcy、C),且Y3中至少一个氨基酸为Hcy或C；Y4为P；Y5为X5，且X5为任意氨基酸(较佳地X5为A、D、或E)；Y6为S‑X6a‑X6，其中X6a为F、C、或Hcy；和X6为任意氨基酸残基(较佳地X6为C、Hcy、F、K或R)Y7为X7‑P‑X7a，其中X7为任意氨基酸残基(较佳地X7为C、Hcy、K、R或P)；以及X7a为C、Hcy或P；XE为无或细胞穿透元件；XF为无或K；且所述的多肽具有Yes相关蛋白(Yes‑associated protein，YAP)活性抑制作用。...

【技术特征摘要】
1.一种分离的多肽，其特征在于，所示的多肽具有式A所示的结构：X0-Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-XA-XE-XF式A式中，X0或XA为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；Y1为AP、VP、或无；Y2为X1-X2-X2a，其中X1选自M、F、C或Hcy；X2为任意氨基酸残基(较佳地X2为C、Hcy、L、M、F)；以及X2a为L、Nle、C、Hcy、K或R；Y3为X3a-X3-X4，其中X3a为碱性氨基酸R或K；X3为任意氨基酸(较佳地X3为K、R、Hcy、C、Orn或Dab)；以及X4为任意氨基酸(较佳地为L、Nle、Hcy、C),且Y3中至少一个氨基酸为Hcy或C；Y4为P；Y5为X5，且X5为任意氨基酸(较佳地X5为A、D、或E)；Y6为S-X6a-X6，其中X6a为F、C、或Hcy；和X6为任意氨基酸残基(较佳地X6为C、Hcy、F、K或R)Y7为X7-P-X7a，其中X7为任意氨基酸残基(较佳地X7为C、Hcy、K、R或P)；以及X7a为C、Hcy或P；XE为无或细胞穿透元件；XF为无或K；且所述的多肽具有Yes相关蛋白(Yes-associatedprotein，YAP)活性抑制作用。2.如权利要求1所示的多肽，其特征在于，Y2和/或Y3中至少一个氨基酸为Hcy或C；和Y6或Y7中至少一个氨基酸为Hcy或C。3.如权利要求1所示的多肽，其特征在于，所述的X1、X2、X2a、X3、X3a、X5、X6、X6a、X7和X7a之间任选地形成至少一对二硫键。4.一种分离的多肽，其特征在于，所述的多肽具有式V所示的结构：X0-Z-XA-XE-XF(V)式中，X0或XA为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；XE为无、或细胞穿透元件；XF为无或K；Z为具有引入的链内二硫键的YAP抑制多肽，并且所述Z中去除所述链内二硫键所对应的氨基酸之后具有式Va所示的基本序列：Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-Z11-Z12-Z13-Z14-Z15-Z16式Va式中，Z1为V、A或无；Z2为P、A或无；Z3为M、F、L或氯苯丙氨酸((Cl-)F)；Z4为R、K、A或无；Z5为L、Nle、A或无；Z6为R、或K；Z7为K、R、Orn、Dab、或A；Z8为L、或Nle；Z9为P；Z10为任意天然或非天然氨基酸，优选D、A、V、L、I或E；Z11为S、或T；Z12为F、L、或氯苯丙氨酸；Z13为F、L、氯苯丙氨酸、或无；Z14为K、R、A或无；Z15为P、A或无；Z16为P、A或无；其中，所述的二硫键的第一氨基酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李康善，
申请(专利权)人：上海宝恒泓康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31