适于用作肝癌靶向药物的脱氧二氢黄当归醇H查尔酮的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种适于用作肝癌靶向药物的脱氧二氢黄当归醇H查尔酮的提取方法，其制备工艺流程为：明日叶→醇水提取→石油醚脱叶绿素→硅胶柱吸附脱氧二氢黄当归醇H查尔酮→水洗脱糖类等水溶性杂质→正己烷与乙酸乙酯的混合溶剂洗脱脱氧二氢黄当归醇H查尔酮→甲醇二次重结晶→脱氧二氢黄当归醇H查尔酮精制品。本发明专利技术工艺流程简单、易控，所制得的脱氧二氢黄当归醇H查尔酮产品纯度高；动物活体对比实验表明：本发明专利技术所制得的明日叶脱氧二氢黄当归醇H查尔酮对肝癌细胞间隙血管生长有显著的抑制作用，促进癌细胞坏死，符合靶向药物特征，可作为一种肝癌肿瘤血管生成抑制剂，适于用作肝癌靶向药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从明日叶中提取查尔酮的方法，尤其涉及一种适于用作肝癌靶向药物的脱氧二氢黄当归醇H查尔酮的提取方法。
技术介绍
癌症已成为21世纪全人类的健康杀手，亦是各国政府和科学家投入大量财力和人力重点攻克的重大科技难题之一。据全国肿瘤登记中心发布的2012年数据显示，中国每年新增癌症病例约350万，约有250万人因此去世。人一生中患恶性肿瘤的几率是22％，除生活习惯、环境外，诊断与治疗很重要。在肝、食道、胃和肺等4种恶性肿瘤中，中国新增病例和死亡人数均居世界首位。其中，肝癌患者所占比例11.6％。从药物治疗消费市场看，2008年中国治癌药市场289.86亿，2014年是837.65亿，增长了17％。靶向药物每天治疗的费用为600-800元，药企的效益可见一斑。靶向药物是目前最先进的用于治疗癌症的药物，是针对肿瘤基因开发的，能够识别肿瘤细胞上特有的基因，可以阻止癌细胞的生长，是抗肿瘤药重要发展方向。靶向治疗原理：是在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点(该位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子，也可以是一个基因片段)，来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特异地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞，所以分子靶向治疗又被称为“生物导弹”。2007年3月29日，美国《连线》杂志评出了全球最具“创新精神”的四十强企业，谷歌、苹果和一家名为基因泰克(Genentech)的公司占据了三甲的席位。其中，基因泰克是一家生物制药公司，总部位于美国加利福尼亚州(以下简称加州)旧金山，近年来在美国知名度越来越高，这次能够在众多传统及生物制药同行中独占鳌头，甚至把雅虎、微软等IT行业的巨头也甩在身后，主要得益于他们强大的创新实力，特别是在肿瘤治疗药物研发上的卓越表现。基因泰克的成功，源于强大的“产品线”，它目前已在三个领域，即肿瘤、免疫、组织生长和修复领域占据了重要地位。但其中，最令同行羡慕的还是它在肿瘤治疗药物，特别是靶向治疗药物的研发方面所取得的巨大成就。基因泰克研发的药物Avastin(音译：阿瓦斯丁)、Heceptin(中文商品名赫赛汀)、Rituxan(在中国叫做Mabthera，中文商品名美罗华)以及Tarceva(中文商品名特罗凯)，均是针对肿瘤抗原的靶向治疗药物，在全球的销量非常可观。以阿瓦斯丁为例，它是一种单克隆抗体，可以选择性地抑制肿瘤细胞的血管内皮生长因子(VEGF)，后者能够刺激新血管形成。因此，在用药后，肿瘤细胞的新生血管难以生成，肿瘤细胞将可能因缺乏养分而被“饿死”。正由于如此巧妙的机制，该药早在问世之前即被业界看好，甚至有媒体称之为“有史以来最好卖的药物”。上市之后，更是深受医生和患者的好评。据悉，仅在2007年第四财季，其销量即已突破6亿美元。目前在美国，这种药物主要与化疗药物联合使用，用于大肠癌转移的治疗。我国有规模药企约4000家，做靶向药物的企业不足10家。其中，杭州贝达药业的小分子靶向药物“凯美纳”被誉为中国医药“两弹一星”，它2006年获临床实验批文，对照物国际名药“易瑞沙”(英国阿斯利康)。2011年获准上市后，中国成为继美、英之后拥有完全自主知识产权靶向抗癌药的第三个国家；凯美纳也一举打破肺癌靶向治疗长期被进口药垄断的局面，成为全球第三个、亚洲第一个靶向抗癌药。凯美纳2012年销售额达到3.6亿元，2013年销售额达到4.75亿元，刷新了中国创新药物销售纪录。全国最大药企江苏恒瑞医药股份有限公司2014年12月宣布用于治疗晚期胃癌的新型药物：艾坦(阿帕替尼)正式在上市销售。阿帕替尼是一个全新小分子靶向药物，它是血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的小分子酪氨酸激酶抑制剂。通过高度选择性竞争细胞内VEGFR-2的ATP结合位点，阻断下游信号转导，抑制酪氨酸激酶的生成从而抑制肿瘤组织新血管的生成，最终达到治疗肿瘤的目的。它是目前标准化疗失败后的晚期胃癌治疗药物中唯一的被证实有效的小分子靶向药物，显著延长晚期胃癌患者的生存时间。艾坦也是国家“十一五”、“十二五”重大新药创制专项，我国首个完全自主研发的抗胃癌新药。上述靶向药物为化学合成或者生物化学合成药物。在有药效的同时，药物不良反应等毒副总作用较大是这类药的缺陷。2015年医学与生理学诺贝尔奖获得者屠呦呦从中药青蒿中提取的天然药物青蒿素在治疗世界性疾病疟疾方面取得了令世界瞩目的成就，中草药是药物宝库名副其实，它做大的优点就是来自天然产物，毒副作用很小。明日叶，又名长寿草、长寿菜等，属原生芹科多年生草本植物，因其具有今日采剪明日就长出新芽的极强生长能力，故而获得明日叶之称。我国名医李时珍早在《本草纲目》(1593年)中将明日叶谓之“滨海当归”，明确其味甘、辛，性温，归肝、心、大肠经。在日本著《大和本草》(1709年)和《重订本草纲目启蒙》(1844年)中均有明日叶可强壮身体、保健益寿之功效的记载。近十多年来的国内外研究发现，明日叶含有10多种矿物元素、16种必需氨基酸以及丰富的叶绿素、黄酮泛酸、胆碱、芸香苷等活性物质；食用明日叶对风湿痛、糖尿病、脂肪肝、肝硬化、动脉硬化、高血压等多种疾病有一定预防和治疗作用。国内近2-3年来已有种植明日叶和生产明日叶茶、胶囊、饮片等保健品，以及面条、甜点等食品的宣传报道。国内外已有大量研究证明，明日叶安全无毒，是一种市场前景光明的天然药物资源，目前已成为国内外在天然植物化学物与药草领域中的一大研究热点。查尔酮是一类含有二苯基丙烯酮结构及其衍生物的化合物，在明日叶的根、茎、叶中均有较高含量，其中以根部的含量最为丰富。目前在明日叶中已分离鉴定出8种查尔酮类物质，其中含量最多的为黄当归醇与4-羟基德里辛。查尔酮类物质分子结构柔性较大，易与受体结合，能表现出多方面生物活性，也是一种重要的有机药中间体。国内外均有研究报道，明日叶查尔酮类物质具有抗菌、抗炎、抗糖尿病、抗肿瘤、降血脂、降血压等多种生物活性，其中以对肿瘤细胞的抑制作用特别引人关注；有体外研究报道，查尔酮能够诱发人类神经母细胞瘤细胞(IMR-32)的细胞凋亡，抑制其生长，且随着浓度升高其抑制率也随之提高。还有研究报道，查尔酮对HL-60、CRL1579、A549/AZ521等人类肿瘤细胞株均有细胞毒性作用，抑制其生长增殖。体内动物实验则显示，查尔酮对小鼠皮肤癌、腹水瘤、肝癌等肿瘤均有良好的抑制作用。有研究认为，明日叶查尔酮的抑瘤机制，可能是通过调控caspase-3、Bax以及DJ-1等蛋白的表达，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适于用作肝癌靶向药物的脱氧二氢黄当归醇H查尔酮的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，按质量比1︰6，将明日叶与醇水体系混合，升温到70℃搅拌浸取24h后过滤，得滤液A；其中，所述醇水体系的醇水比为体积比5︰1；第二步，将所得滤液A与石油醚按体积比1︰1的比例混合，室温下搅拌10h；然后，静置分层，再除去叶绿素杂质，取水醇相B。第三步，将水醇相B上硅胶柱置换反应3h；然后，水洗，以除去糖类及其他水溶性小分子；最后，用正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂洗脱、蒸发、烘干，得到脱氧双氢黄当归醇H查尔酮粗品C；上述正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂中，正己烷与乙酸乙酯的体积比为1‑5︰1‑3；第四步，将脱氧双氢黄当归醇H查尔酮粗品C用甲醇溶解，重结晶2‑3次，除去杂质，即得脱氧二氢黄当归醇H查尔酮成品。

【技术特征摘要】
1.一种适于用作肝癌靶向药物的脱氧二氢黄当归醇H查尔酮的提取方法，其特征在于，包括
以下步骤：
第一步，按质量比1︰6，将明日叶与醇水体系混合，升温到70℃搅拌浸取24h后过滤，
得滤液A；其中，所述醇水体系的醇水比为体积比5︰1；
第二步，将所得滤液A与石油醚按体积比1︰1的比例混合，室温下搅拌10h；
然后，静置分层，再除去叶绿素杂质，取水醇相B。
第三步，将水醇相B上硅胶柱置换反应3h；
然后，水洗，以除去糖类及其他水溶性小分子；
最后，用正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂洗脱、蒸发、烘干，得到脱氧双氢黄当归醇H查
尔酮粗品C；
上述正己烷和乙酸乙酯的混合溶剂中，正己烷与乙酸乙酯的体积比为1-5︰1-3；
第四步，将脱氧双氢黄当归醇H查尔酮粗品C用甲醇溶解，重结晶2-3次，除去杂质，

【专利技术属性】
技术研发人员：李子超，钟进义，郭培志，李群，李晓雯，刘芳芳，王力平，刘倩倩，牛传凤，马苗，李姣，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东;37