VCP抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及VCP(valosin‑containing protein,VCP)抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物的应用。本发明专利技术首次发现VCP抑制剂可以用于制备溶瘤病毒抗肿瘤增效剂。发明专利技术同时涉及一种包含VCP抑制剂以及溶瘤病毒的药物组合物，包含VCP抑制剂及溶瘤病毒的药品套装，以及VCP抑制剂与溶瘤病毒在治疗肿瘤，特别是对所述溶瘤病毒不敏感的肿瘤中的用途。发明专利技术还涉及一种抗肿瘤用药系统，其特征在于包括VCP表达水平检测试剂以及溶瘤病毒。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及VCP蛋白抑制剂与溶瘤病毒的联合在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
溶瘤病毒(oncolytic virus)是一类选择性的感染并杀伤肿瘤细胞，而不损伤正常细胞的可复制病毒。溶瘤病毒疗法(oncolytic virotherapy)是一种创新的肿瘤靶向治疗策略，它利用天然的或经基因工程改造的病毒选择性的感染肿瘤细胞，并在肿瘤细胞中复制，达到靶向性溶解、杀伤肿瘤细胞的作用，但是对正常细胞没有损伤。M1病毒(Alphavirus M1)属于甲病毒属(Alphavirus)，其在制备抗肿瘤药物方面具有较好的应用效果。例如中国专利技术专利申请201410425510.3公开了M1病毒能选择性引起肿瘤细胞死亡而不影响正常细胞存活，其在抗肿瘤方面具有非常好的应用前景。然而，不同肿瘤对M1病毒的敏感性不一，对于某些肿瘤，M1病毒单独用药时，溶瘤作用还不够理想。例如中国专利技术专利申请201410425510.3所记载的，M1作为抗肿瘤药物使用时，对于结直肠癌、肝癌、膀胱癌和乳腺癌的效果不如胰腺癌、鼻咽癌、前列腺癌和黑色素瘤明显；而胶质瘤、宫颈癌、肺癌则更其次；而胃癌则最不显著。筛选增加溶瘤病毒肿瘤治疗效果的化合物有望增加溶瘤病毒的抗瘤谱及抗瘤强度。专利技术人此前申请的专利201510990705.7中，将大黄酚及其衍生生物作为溶瘤病毒的抗瘤增效剂，二者组合可以将肿瘤细胞的存活率降低至39.6％，但其抗癌强度存在很大的进步空间，此外，这种联合应用的作用机制尚不明确。本专利技术的目的在于提供一种基于精确机制的溶瘤病毒抗癌增效剂，能够选择性 的增强M1病毒对肿瘤细胞的杀伤作用，而不影响正常细胞。本专利技术提供了一种更精准更安全的溶瘤病毒增效疗法。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种VCP抑制剂在制备溶瘤病毒抗瘤增效剂方面的应用。本专利技术的另一个目的在于提供一种抗瘤药物组合物，其可以使得溶瘤病毒发挥更好的抗瘤效果。本专利技术的另一个目的在于提供一种针对溶瘤病毒不敏感的肿瘤，安全有效的溶瘤病毒增效药物。本专利技术的另一个目的在于提供一种个性化的用药系统和方法。专利技术通过以下技术方案实现上述目的：专利技术人通过研究、筛选发现，VCP抑制剂可以增强溶瘤病毒的溶瘤效果。所述的VCP抑制剂为抑制VCP蛋白活性的物质、或降解VCP蛋白的物质、或降低VCP蛋白水平的基因工具。VCP(valosin containing protein,VCP)，又称P97，是一种细胞内广泛表达的ATP酶，它作为内质网应激相关降解通路的重要组成元件，负责识别和递呈泛素化蛋白，并将这些蛋白转运至蛋白酶体进行降解，以保证细胞内蛋白质稳态。已有多篇文献报道VCP在肿瘤细胞中高表达，抑制VCP能够显著的诱导肿瘤细胞死亡。专利技术人通过用VCP干扰片段(Si RNA)抑制这个基因的表达，降低相应蛋白的表达量，结果发现，单独干扰VCP和未干扰并未引起细胞形态病变，同时单独应用M1病毒也不引起细胞形态病变，只有干扰VCP联合应用M1病毒组引起了显著细胞形态病变。进一步地，专利技术人的进一步实验验证了通过抑制VCP可以显著增强溶瘤病毒的溶瘤效应。专利技术人采用了抑制VCP活性的化合物Eeyarestatin I、NMS-873 或CB-5083协同溶瘤病毒例如M1病毒作用于肿瘤细胞，实验结果发现，Eeyarestatin I、NMS-873或CB-5083或其组合，均可以协同溶瘤病毒增强抗肿瘤效应。本专利技术首次发现，VCP抑制剂可以作为溶瘤病毒的抗瘤增效剂/耐药逆转剂。本专利技术提供了VCP抑制剂在制备溶瘤病毒抗瘤增效剂/耐药逆转剂方面的应用。所述的VCP抑制剂包括但不限于Eeyarestatin I(式1)、NMS-873(式2)、CB-5083(式3)等抑制VCP蛋白活性的化合物。化合物的获取方式可选但不限于：自己化学分离或合成或者从商业途径购买。在本专利技术优选的实施例中，VCP蛋白抑制剂为Eeyarestatin I、CB-5083或他们的组合。VCP抑制剂还包括针对VCP基因表达抑制工具，包括但不限于RNA干扰(RNAi)microRNA以及基因编辑或敲除等工具手段。在本专利技术另一优选的实施例中，VCP蛋白抑制剂为VCP的干扰RNA片段。所述的溶瘤病毒选自M1病毒、盖塔病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和单纯性疱疹病毒中的一种或多种；优选M1病毒、盖塔病毒或者他们的组合。本专利技术所说的溶瘤病毒(甲病毒(例如M1病毒、盖塔病毒等)、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和单纯性疱疹病毒等)可以尤其地指目前已有的溶瘤病毒，但也不排除一些可能发生的自然变异或者进行了突变、修饰、序列增加、减少等的病毒，只要这些变异、突变、修饰、序列增加或减少等的变化并不影响所说的溶瘤病毒发挥本专利技术所述的作用，则属于本专利技术所述的同质的病毒。所说的VCP抑制剂为能起到敲低或影响VCP基因表达或者降低VCP蛋白量或蛋白活性的物质(例如化合物、或氨基酸序列、核苷酸序列等)或工具等。本领域技术人员可以对其抑制化合物或者基因工具进行修饰、替换、改变等，但只要起到上述抑制VCP的作用的，则属于本专利技术的VCP抑制剂，属于上述物质、化合物或工具等的同质替换。本专利技术还提供一种用于治疗肿瘤的药物组合物，其包含VCP抑制剂以及溶瘤病毒。本专利技术还提供用于治疗肿瘤的药品套装，其包含VCP抑制剂，以及溶瘤病毒。药品套装区别于组合物的地方在于，在药品套装中，VCP抑制剂未必、并且通常不与溶瘤病毒混合存在，而是通常地被分开包装。分开包装的溶瘤病毒与VCP抑制剂也可含有其各自的佐剂。所述的佐剂是指在药学中，可辅助药物疗效的手段。药品套装也可以包含独立包装的VCP抑制剂，以及独立包装的溶瘤病毒。药物套装中VCP抑制剂，以及溶瘤病毒的施用，可以是同时施用或者是以任意的前后顺序施用，其中患者先用一种药物治疗，然后再给以另一种药物。所述的患者是指哺乳动物受治疗者，尤其是人类。所述的VCP抑制剂包括但不限于Eeyarestatin I(式1)、NMS-873(式2)、CB-5083(式3)等这一类的抑制VCP蛋白活性的化合物。或者针对VCP基因表达抑制工具，包括但不限于RNA干扰(RNAi)microRNA以及基因编辑或敲除等工具手段。优选Eeyarestatin I、CB-5083或它们的组合。所述的溶瘤病毒选自M1病毒、盖塔病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和单纯性疱疹病毒中的一种或多种；优选M1病毒和盖塔病毒的至少一种。在组合物或药品套装中，Eeyarestatin I或NMS-873或CB-5083与溶瘤病毒的配比可选地为：0.01～200mg:103～109PFU；优选0.1～200mg:104～109PFU；进一步优选0.1～100mg:105～109PFU。优选使用剂量为：Eeyarestatin I或NMS-873或CB-5083使用范围为0.01mg/kg至200mg/kg，同时溶瘤病毒使用滴度为MOI从103至109(PFU/kg)；优选Eeyarestatin I或NMS-873或CB-5083使用范围为0.1mg/kg至200mg/kg，同时溶瘤病毒使用滴度为MOI从10本文档来自技高网...

【技术保护点】
VCP抑制剂在制备溶瘤病毒抗肿瘤增效剂或耐药逆转剂方面的应用；优选地，所述的溶瘤病毒选自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和单纯性疱疹病毒中的一种或多种；优选地，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种。

【技术特征摘要】
1.VCP抑制剂在制备溶瘤病毒抗肿瘤增效剂或耐药逆转剂方面的应用；优选地，所述的溶瘤病毒选自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和单纯性疱疹病毒中的一种或多种；优选地，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的VCP抑制剂为抑制VCP蛋白活性的物质、或降解VCP蛋白的物质、或降低VCP蛋白水平的基因工具；优选地，所述的抑制VCP蛋白活性的物质选自化合物，更优选地，所述化合物选自Eeyarestatin I、NMS-873和CB-5083中的一种或几种；或者优选地，所述的降低VCP蛋白水平的基因工具为RNA干扰、microRNA、基因编辑或基因敲除材料；更优选地，所述的VCP抑制剂为肿瘤靶向VCP抑制剂。3.一种治疗肿瘤的药物组合物，包含：(a)VCP抑制剂；所述的VCP抑制剂为抑制VCP蛋白活性的物质、或降解VCP蛋白的物质、或降低VCP蛋白水平的基因工具；优选地，所述的抑制VCP蛋白活性的物质选自化合物，更优选地，所述化合物选自Eeyarestatin I、NMS-873和CB-5083中的一种或几种；或者优先地，所述的降低VCP蛋白水平的基因工具为RNA干扰、microRNA、基因编辑或基因敲除材料；更优选地，所述的VCP抑制剂为肿瘤靶向VCP抑制剂；(b)溶瘤病毒；所述的溶瘤病毒选自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和单纯性疱疹病毒中的一种或多种；优选地，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种。4.一种药品套装，包含：(a)VCP抑制剂；所述的VCP抑制剂为抑制VCP蛋白活性的物质、或降解VCP蛋白的物质、或降低VCP蛋白水平的基因工具；优选地，所述的抑制VCP蛋白活性的物质选自化合物，更优选地，所述化合物选自Eeyarestatin I、NMS-873和CB-5083中的一种或几种；或者优先地，所述的降低VCP蛋白水平的基因工具为RNA干扰、microRNA、基因编辑或基因敲除材料；更优选地，所述的VCP抑制剂为肿瘤靶向VCP抑制剂；(b)溶瘤病毒；所述的溶瘤病毒选自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和单纯性疱疹病毒中的一种或多种；优选地，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种；在所述的药品套装中VCP抑制剂和溶瘤病毒被分开包装。5.VCP抑制剂及溶瘤病毒的组合在制备治疗肿瘤药物中的应用；所述的溶瘤病毒选自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和单纯性疱疹病毒中的一种或多种；优选地，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种；所述的VCP抑制剂为抑制VCP蛋白活性的物质、或降解VCP蛋白的物质、或降低VCP蛋白水平的基因工具；优选地，所述的抑制VCP蛋白活性的物质选自化合物，更优选地，所述化合物选自Eeyarestatin I、NMS-873和CB-5083中的一种或其组合；或者优选地，所述的降低VCP蛋白水平的基因工具为RNA干扰、microRNA、基因编辑或基因敲除材料；更优选地，所述的VCP抑制...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海鹏，邓静，林园，WK凯夫尼，程世源，高光坪，林穗珍，吕凌，蔡静，龚守芳，胡骏，白雪涛，肖晓，李凯，梁剑开，谭亚倩，朱文博，银巍，颜光美，
申请(专利权)人：广州威溶特医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44