本发明专利技术描述了抗原Ang-2的抗体及这种抗体的应用。特别地，本发明专利技术描述了针对抗原Ang-2的完全人单克隆抗体。本发明专利技术还描述了编码重链和轻链免疫球蛋白分子、特别是相应于跨越构架区和/或互补决定区(CDR)、特别是从FR1至FR4或者CDR1至CDR3的连续重链和轻链序列的序列的核苷酸序列及包含重链和轻链免疫球蛋白分子、特别是相应于跨越构架区和/或互补决定区(CDR)、特别是从FR1至FR4或者CDR1至CDR3的连续重链和轻链序列的序列的氨基酸序列。本发明专利技术还描述了表达这些免疫球蛋白分子和单克隆抗体的杂交瘤或其它细胞系。
【技术实现步骤摘要】
本申请是2005年12月19日提交的题为“血管生成素-2的抗体及其应用”的中国专利申请200580048270.9的分案申请。本申请要求并入本文参考的2004年12月21日提交的美国临时申请系列号60/638,354和2005年8月25日提交的美国临时申请系列号60/711,289的优先权。专利
本专利技术涉及抗血管生成素-2(Angiopoietin-2，Ang-2)的单克隆抗体及这些抗体的应用。更特别地，本专利技术涉及针对Ang-2的完全人单克隆抗体及这些抗体的应用。本专利技术还涉及表达这些抗体的杂交瘤或其它细胞系。所述抗体可用于诊断及治疗与Ang-2的活性和/或过量产生相关的疾病。专利技术背景血管生成是从现有的血管中形成新的毛细血管的过程，是胚胎发生、正常生理性生长、修复和肿瘤扩展的基本成分。尽管有许多因素可以调节体外内皮细胞(EC)应答及体内血管生长，但是只有血管内皮生长因子(VEGF)家族成员和血管生成素被认为是几乎专门地对血管EC起作用。Yancopoulosetal,Nature407:242-48(2000)。已发现血管生成素是Ties的配体，Ties是在血管内皮中选择性表达的酪氨酸激酶家族(Yancopoulosetal,Nature407:242-48(2000))。目前血管生成素家族有四个确定的成员。血管生成素-3和-4(Ang-3和Ang-4)可代表小鼠和人中相同基因座的非常不同的对应物(Kimetal,FEBSLet,443:353-56(1999)；Kimetal,JBiolChem274:26523-28(1999))。Ang-1和Ang-2最初是分别作为激动剂和拮抗剂在组织培养实验中鉴别的(Davisetal,Cell87:1161-69(1996)；Maisonpierreetal,Science277:55-60(1997))。所有已知的血管生成素均主要结合Tie2，Ang-1和-2均以3nM(Kd)的亲和性结合Tie2(Maisonpierreetal,Science277:55-60(1997))。Ang-1示出支持EC存活并促进内皮完整性(Davisetal,Cell87:1161-69(1996)；Kwaketal.,FEBSLett448:249-53(1999)；Surietal,Science282:468-71(1998)；Thurstonetal,Science286:2511-14(1999)；Thurstonetal,Nat.Med.6:460-63(2000))，而Ang-2具有相反作用并且在没有存活因子VEGF或碱性成纤维细胞生长因子的条件下促进血管不稳定和退化(Maisonpierreetal,Science277:55-60(1997))。然而，关于Ang-2功能的许多研究提示一种更复杂的情况。Ang-2也许是一种血管重塑的复杂调节物，在血管萌发和血管退化中均起作用。支持Ang-2这种作用的表达分析表明在成人血管发生性萌发中Ang-2与VEGF一起被快速诱导，Ang-2在血管退化的情况中在没有VEGF的条件下被诱导(Holashetal,Science284:1994-98(1999)；Holashetal,Oncogene18:5356-62(1999))。与邻近依赖性(context-dependent)作用一样，Ang-2结合由Ang-1激活的相同内皮特异性受体Tie-2，但是对其激活具有邻近依赖性效应(Maisonpierreetal,Science277:55-60(1997))。角膜血管发生测定示出Ang-1和Ang-2具有相似作用，与VEGF协同起作用以促进新血管的生长(Asaharaetal,Circ.Res.83:233-40(1998))。通过在体外高浓度Ang-2也具有促进血管发生的观测结果，提示可能存在剂量依赖性内皮细胞应答(Kimetal,Oncogene19:4549-52(2000))。在高浓度下，Ang-2在经PI-3激酶和Akt途径激活Tie2而导致血清剥夺凋亡期间作为内皮细胞的凋亡存活因子而起作用(Kimetal,Oncogene19:4549-52(2000))。其它体外实验提示在持续暴露期间，Ang-2的作用可逐渐从Tie2的拮抗剂转变为激动剂，在随后的时间点，其可直接有助于血管形成和新血管稳定化(Teichert-Kuliszewskaetal,Cardiovasc.Res.49:659-70(2001))。另外，如果将EC在血纤蛋白凝胶上培养，也观测到Ang-2对Tie2的激活，这也许提示Ang-2的作用依赖于EC分化状态(Teichert-Kuliszewskaetal,Cardiovasc.Res.49:659-70(2001))。在三维胶原凝胶中培养的微血管EC中，Ang-2也可诱导Tie2激活并促进毛细血管样结构形成(Mochizukietal,J.Cell.Sci.115:175-83(2002))。3-D球形共培养物作为体外血管成熟的模型的应用表明EC与间充质细胞之间的直接接触消除了对VEGF的应答性，而VEGF和Ang-2的存在诱导萌发(Korffetal,FasebJ.15:447-57(2001))。Etoh等证实组成型表达Tie2的EC，MMP-1、-9和u-PA的表达在存在VEGF的情况下由Ang-2强力地正调节(Etoh,etal,CancerRes.61:2145-53(2001))。在体内瞳孔膜模型中，Lobov等揭示了Ang-2在存在内源VEGF的条件下促进毛细血管直径迅速增加、基底层重塑、内皮细胞的增殖和迁移，并刺激新血管的萌发(Lobovetal,Proc.Natl.Acad.Sci.USA99:11205-10(2002))。相反，在无内源VEGF的条件下，Ang-2促进内皮细胞死亡及血管退化(Lobovetal,Proc.Natl.Acad.Sci.USA99:11205-10(2002))。相似地，在体内肿瘤模型中，Vajkoczy等证实多细胞聚集体通过宿主和肿瘤内皮同时表达VEGFR-2和Ang-2导致血管发生萌发从而引发血管生长(Vajkoczyetal,J.Clin.Invest.109:777-85(2002))。这个模型例证了生长中的肿瘤的已建立的微脉管系统特征在于持续重塑，推测其通过VEGF和Ang-2的表达介导(Vajkoczyetal,J.Clin.Invest.109:777-85(2002))。Tie-2和血管生成素-1的敲除小鼠研究示出相似的表型，提示血管生成素-l刺激的Tie-2磷酸化介导发育中的血管的重塑和稳定，在血管发生期间促进血管成熟及维持内皮细胞-支持细胞附着(Dumontetal,Genes&Development,8:1897-1909(1994)；Sato,Nature,376:70-74(1995)；Thurston,G.etal.,2000NatureMedicine:6,460-463))。认为血管生成素-1的作用在成人中是本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种以低于100皮摩尔(pM)的Kd结合血管生成素‑2的靶向结合剂，其中所述靶向结合剂是抗体，其轻链CDR1、CDR2和CDR3序列分别为RASQSITGSYLA、GASSWAT和QQYSSSPIT，其重链CDR1、CDR2和CDR3序列分别为GFTFTNYGMH、VISHDGNNKYYVDSVKG和EGIDFWSGLNWFDP。
【技术特征摘要】
2004.12.21 US 60/638,354;2005.08.25 US 60/711,2891.一种以低于100皮摩尔(pM)的Kd结合血管生成素-2的靶向结
合剂，其中所述靶向结合剂是抗体，其轻链CDR1、CDR2和CDR3
序列分别为RASQSITGSYLA、GASSWAT和QQYSSSPIT，其重链
CDR1、CDR2和CDR3序列分别为GFTFTNYGMH、
VISHDGNNKYYVDSVKG和EGIDFWSGLNWFDP。
2.权利要求1的靶向结合剂，其中所述靶向结合剂是抗体，其
中所述抗体的重链和轻链可变区的氨基酸序列分别由SEQIDNO：79
和81组成。
3.权利要求1或2的靶向结合剂，其中所述靶向结合剂也结合
血管生成素-1。
4.权利要求1或2的靶向结合剂，其中所述靶向结合剂是单克
隆抗体。
5.权利要求4的靶向结合剂，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·L·格林，Q·周，B·A·基特，X·杨，S·C·埃默里，D·C·布莱基，
申请(专利权)人：阿斯利康公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。