公开了治疗血管生成疾病的哺乳动物ｋｒｉｎｇｌｅ（５）片段和ｋｒｉｎｇｌｅ（％）融合蛋白。也公开了抑制血管生成疾病的方法和组合物。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肽化学领域。更具体地讲，本专利技术涉及下述肽的制备和用途，所述肽含有的氨基酸序列与哺乳动物血纤溶酶源的kringle 5区的相应序列大致相似；本专利技术涉及含有所述肽的药用组合物、制管张素受体的特异性抗体、制管张素检测的方法和测定、连接制管张素蛋白的细胞毒性剂和由血管生成引起或恶化的疾病的治疗。
技术介绍
血管生成即形成新血管的过程，它是包括生殖、发育和伤口修复在内的正常机体活性所必需的。尽管没有完全了解该过程，但据信它包括调节内皮细胞(毛细血管的初级细胞)生长的分子的复杂的相互作用。在正常条件下，这些分子似乎将微脉管系统保持在静止状态(即没有任何毛细管生长)，其保持时间可以持续长达数周，在某些情况下长达数十年。必要时(诸如在伤口修复期间)，这些同样的分子可以在5天内经历快速增殖和转换(folkman,J．和Shing,Y.,The Journal ofBiological Chemistry,267(16),10931-10934，以及Folman,J．和Klagsbrun,M.,Science,235,442-447(1987)。尽管血管生成在正常情况下为高度受调节的过程，但持久的非调节血管生成引起许多疾病(以血管生成疾病为特征)。另有陈述，非调节的血管生成或者可以直接引特定的疾病，或者可以使现有病况恶化。例如，已经暗示眼新血管形成为眼盲的最常见的原因，并控制大约20种眼病。在诸如关节炎的某些现有疾病中，新形成的毛细血管侵入所述关节并破坏软骨。在糖尿病中，在视网膜中形成的新毛细管侵入玻璃体、出血并引起眼盲。实体瘤的生长和转移也依赖于血管生成(Folkman,J.,Cancer Research,46,467-473(1986),Folkman,J.,Journalof the National Cancer Institute,82,4-6(1989)。例如已经表明，增大至2mm以上的肿瘤必须获得它们自身的血供应，并通过诱导新毛细血管生长而获得血供应。一旦这些新血管包埋于该肿瘤中，它们则提供肿瘤细胞进入循环的工具，并转移到诸如肝脏、肺或骨之类的较远部位(Weidner,N．等,The New England Journal of Medicine,324(1)1-8(1991))。迄今为止，已经描述和特征记述了几种天然产生的血管生成因子(Fidler,J．和Ellis,L.M.,Cell,79:185-189(1994))。最近，O’Reilly等已经从患病肿瘤小鼠的血清和尿中分离并纯化了一种抑制内皮细胞增殖的38千道尔顿(kDa)蛋白(O’Reilly,M．等，Cell,79:315-328(1994)和于1995年11月2日公布的国际申请WO 95/29242)。该内皮抑制剂的微序列分析表明与鼠血纤溶酶源内部片段有98％的序列同源性。作为鼠抑制剂片段命名的制管张素为包括鼠血纤溶酶源前四个kringle区的肽。来自人血纤溶酶源同一区的肽片段(即含有kringle 1-4)在体外和体内也强烈地抑制毛细管内皮细胞的增殖。衍生该肽片段的完整的血纤溶酶源不具有有效抑制剂的作用。目前正在开发用于治疗血管生成疾病的几种血管生成抑制剂(Gasparini,G．和Harris,A.L.，J.Clin,Oncol.,13(3):765-782,(1995))，但这些化合物有一些相关的缺点。例如，苏拉明是一种有效的抑制剂，但在抗肿瘤活性所需的剂量下引起人严重的系统性毒性。诸如retinoid、干扰素和抗雌激素之类的化合物对于人类使用是安全的，但具有弱抗血管生成作用。另外的化合物可能难以制备或制备成本高。因此，需要可用于治疗哺乳动物血管生成疾病的化合物。更具体地讲，需要治疗使用安全的血管生成抑制剂，并且所述血管生成抑制剂例如通过选择性地抑制内皮细胞增殖，同时对正常(即非癌性)细胞不表现出或表现出低程度毒性，对于病理状态表现出选择性毒性。这类化合物也应该容易并且成本有效地制备。专利技术概述在本专利技术的基本实施方案中，本专利技术提供由结构式A-B-C-X-Y(Ⅰ)表示的kringle 5肽化合物或其药学上可接受的盐、酯或前体药物，其中A不存在或为氮保护基团；Y不存在或为羧酸保护基团；B不存在或为相应于SEQ ID NO:1的大约氨基酸位置334至氨基酸位置530序列的1至大约197个天然产生的氨基酸残基；C为R1-R2-R3-R4，其中R1为赖氨酰；R2为亮氨酰或精氨酰；R3为酪氨酰、3-I-酪氨酰或苯丙氨酰；R4为天冬氨酰；而X不存在或为相应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置535至大约氨基酸位置546序列的1至大约12个天然产生的氨基酸残基或其同源物(homologues)和类似物。本专利技术也包括由结构式A-B1-C1-X1-Y(Ⅱ)表示的kringle 5肽化合物或其药学上可接受的盐、酯或前体药物，其中A不存在或为氮保护基团；Y不存在或为羧酸保护基团；B1不存在或为相应于SEQ ID NO1的大约氨基酸位置334至氨基酸位置513序列的1至大约176个天然产生的氨基酸残基；C1为SEQ ID NO:1的氨基酸位置514至氨基酸位置523的序列；而X1不存在或为相应于SEQ ID NO:1的氨基酸位置524至氨基酸位置533序列的1至大约10个天然产生的氨基酸残基或其同源物和类似物。本专利技术也包括需要抗血管生成疗法的病人的治疗方法，包括给与该病人含kringle 5肽片段或kringle 5融合蛋白的化合物。本专利技术也包括需要抗血管生成疗法的病人的治疗组合物，它包括含kringle 5肽片段或kringle 5融合蛋白、kringle 5抗血清、kringle 5受体激动剂和拮抗剂以及连接细胞毒性药物的kringle 5拮抗剂的化合物，所述化合物或者为单独的或者与药学上可接受的赋形剂和/或可选的缓释化合物结合，以形成治疗组合物。本专利技术也包括选自癌症、结构域、黄斑变性和糖尿病性视网膜病的疾病的治疗组合物，它包括含kringle 5肽片段或kringle 5融合蛋白的化合物。本专利技术也包括一组合物，它包含分离的编码kringle5肽片段或融合蛋白的单链或双链多核苷酸序列。这样的多核苷酸最好是DNA分子。本专利技术也包括含有编码kringle 5肽片段或融合蛋白的DNA序列的载体，其中该载体存在于细胞中时，能够表达kringle 5肽片段或kringle5融合蛋白，本专利技术也包括包含含载体的细胞的组合物，其中所述载体含有编码kringle 5肽片段和kringle 5融合蛋白的DNA序列。本专利技术还包括基因治疗方法，用此方法，将编码kringle 5肽片段或kringle 5融合蛋白或kringle 5肽片段缀合物的DNA序列导入病人中，以体内修饰kringle 5水平。本专利技术也包括制备kringle 5肽片段的方法，包括步骤(a)将哺乳动物血纤溶酶源以大约1∶100至大约1∶300的比率暴露于人或猪弹性蛋白酶，以形成所述血纤溶酶源和所述弹性蛋白酶的混合物；(b)温育所述混合物并且(c)从所述混合物中分离所述kringle 5肽片段。本专利技术也包括kringle 5肽片段的制备方法，包括步骤(a)将哺乳动物血纤溶酶源以大约1∶本文档来自技高网...
【技术保护点】
具有式（Ⅰ）的化合物或其药学上可接受的盐、酯或前体药物， Ａ－Ｂ－Ｃ－Ｘ－Ｙ （Ⅰ） 其中， Ａ不存在或为氮保护基团； Ｙ不存在或为羧酸保护基团； Ｂ不存在或为相应于ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１的大约氨基酸位置３３４至氨基酸位置５３０序列的１至大约１９７个天然产生的氨基酸残基； Ｃ为Ｒ↑［１］－Ｒ↑［２］－Ｒ↑［３］－Ｒ↑［４］，其中 Ｒ↑［１］为赖氨酰； Ｒ↑［２］为亮氨酰或精氨酰； Ｒ↑［３］为酪氨酰、３－Ｉ－酪氨酰或苯丙氨酰； Ｒ↑［４］为天冬氨酰；以及 Ｘ不存在或为相应于ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１的氨基酸位置５３５至大约氨基酸位置５４６序列的１至大约１２个天然产生的氨基酸残基及其同源物（ｈｏｍｏｌｏｇｕｅｓ）和类似物。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：DJ达维森，王结义，EJ格宾斯，
申请(专利权)人：艾博特公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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