一种抑制血管生成的化合物及其制备方法，它包括如下步骤：将种子培养液接入发酵培养基，于室温25-30℃发酵72-96h；将发酵培养物用甲醇浸泡萃取，发酵液用大孔树脂吸附，然后利用乙醇洗脱，浓缩后得到浸膏。浸膏利用硅胶以及凝胶柱层析色谱进行分离，以石油醚/乙酸乙酯以及石油醚/氯仿/甲醇流动体系进行洗脱,得到1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃。在100 μg/mL时，体间血管数为14.60 ± 3.71，抑制率为43.4%；在10μg/mL时，体间血管数为19.20±2.58，抑制率为25.6%；在1 μg/mL时，体间血管数为22.80 ±1.79，抑制率为11.6%，具有显著性差异。化合物具有显著抑制血管生成活性，具有用于抗肿瘤药物制备的前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及海参共附生真菌发酵制备具有抑制血管生成作用的代谢产物1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃的制备及其在抑制血管生成活性的应用。
技术介绍
海参作为重要的药食同源海洋生物，含有丰富的活性物质，如海参皂苷、海参多糖、海参多肽、神经节苷脂等，具有非常高的营养价值。海参共附生微生物和海参长期共存，共同进化，抵御海里恶劣的环境，可能进行基因交换，进而能够产生结构新颖、药理活性强的化合物。海参共附生真菌种类丰富，已经报道的代谢产物有苯并呋喃类化合物，生物碱类化合物、聚酮类化合物和萜类化合物，生物活性主要有抗肿瘤活性、抑制乙酰胆碱酶活性和α-糖苷酶等活性，引起了化学家和药物研究者的高度重视。但是海参共附生真菌来源的抑制血管生成活性的化合物除了本课题组之前报道的苯并呋喃类化合物外，还未见报道。本专利申请的化合物,1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃，且该菌代谢该化合物的量大（100μg/L），利用斑马鱼模型发现具有较强的抑制血管生成活性，在抑制血管生成为机理的抗肿瘤领域具有广阔的前景。肿瘤是严重威胁人类健康的一类常见疾病。肿瘤血管生成与肿瘤生长、侵袭和转移等特性密切相关。由于肿瘤血管内皮细胞处于高度生长状态，药物选择性高；其细胞基因组稳定，不容易产生多药耐药性；以及各种肿瘤血管基因内皮细胞差异较小，同一药物可能对不同肿瘤有疗效，因此理想的肿瘤血管生成抑制剂具有高效、低毒、无耐药性并且具有抗广谱瘤等特点。通过抑制血管新生血管生成治疗肿瘤已经成为一种广泛而被深入研究的新兴治疗手段。
技术实现思路
本专利技术涉及一种利用海参共附生真菌发酵制备代谢产物：1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃的制备工艺、结构以及抑制血管生成的药理活性。本专利技术从海参的共附生真菌的发酵培养物中提取分离得到抑制血管生成的化合物，它的结构式是：白色胶状，核磁和高分辨质谱的物化参数是：1HNMR（CDCl3）:δH3.36(2H,s,H-6),3.63(3H,s,CH3O-5),6.62(1H,brs,H-2’),6.46(1H,d,8.1Hz,H-5’),6.57(1H,brd,8.3Hz,H-6’),2.98(1H,dd,J=15.9,8.2Hz,H-7’a),2.88(1H,dd,16.2,9.4Hz,H-7’b),4.43(1H,t,8.9Hz,H-8’),1.23(3H,s,H-10’),1.06(3H,s,H-11’),7.74(2H,d,8.4Hz,H-2’’/H-5’’).13CNMR(CDCl3):δC171.8(C-1),138.2(C-2),128.1(C-3),84.6(C-4),171.8(C-5),38.7(C-6),52.8(CH3O-5),125.8(C-1’),129.7(C-2’),126.9(C-3’),158.5(C-4’),107.7(C-5’),126.6(C-6’),29.9(C-7’),89.0(C-8’),70.0(C-9’),26.0(CH3,C-10),25.0(CH3,C-11’),121.2(C-1’’),129.6(C-2’’/C-6’’),115.2(C-3’’/C-5’’),158.6(C-4’’).HRESIMS:［M+H］+441.1505。一种抑制血管生成活性的化合物的制备方法，其特征是它包括如下步骤：1)制作种子培养液：将土曲霉Aspergillusterreus菌株斜面接种于葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏培养基中：pH:6.5-7.5,在温度25-30℃、转速150rpm、培养120h,获得种子培养液；2）发酵罐发酵生产：将500-1000毫升种子培养液转入发酵培养基，利用30升发酵罐在25-30℃条件下发酵72-96小时；发酵培养基：葡萄糖0.5-2，酵母提取物,0.05-0.2,蛋白胨0.1-0.4,氯化钠3-6，海水100（以上为重量比）。通气量0.3-0.5（体积比，通气量/发酵体积），转速100-140rpm；将种子培养液接入发酵培养基，于室温25-30℃发酵72-96h，得到发酵液。将发酵液经纱布过滤和离心去除菌体，将菌体利用甲醇浸泡，发酵液利用大孔树脂吸附，然后利用100%乙醇洗脱得到洗脱液，洗脱液浓缩得到浸膏；浸膏利用以硅胶为固定相，以30-50%石油醚/乙酸乙酯为流动相进行洗脱；然后利用SephadexLH-20为固定相，以石油醚/二氯甲烷/甲醇=1:1:1为流动相进行洗脱，得到1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃。一种抑制血管生成活性的化合物的应用，其特征是1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃在制备抑制血管生成生物活性方面的药物中的应用。结构确定：利用高分辨核磁波谱数据结合高分辨质谱，确定了1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃的结构。本专利技术具有以下有益效果，实验证明1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃在100μg/mL时，体间血管数为14.60±3.71，抑制率为43.4%；在10μg/mL时，体间血管数为19.20±2.58，抑制率为25.6%；在1μg/mL时，体间血管数为22.80±1.79，抑制率为11.6%，具有显著性差异，因此1-氧-2-（2-（2-羟基异丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋喃具有显著抑制血管生成的活性，且在测定浓度范围内该化合物显示出较好的量效的关系，发酵工艺简单，可以大规模制备，具有用于抗肿瘤药物的前景。具体实施方式实施例1：菌株的获得：将威海成山头海域仿刺参表皮切成1cm×1cm的小块，利用PDA培养基添加硫酸链霉素和氨苄青霉素,25-30℃培养7-14天,挑选纯的菌株，并利用分子...
【技术保护点】
一种抑制血管生成活性的化合物，其特征是：它的结构式如下：。
【技术特征摘要】
1.一种抑制血管生成活性的化合物，其特征是：它的结构式如下：
。
2.根据权利要求1所述的抑制血管生成活性的化合物，其特征是1-氧-2-（2-（2-羟基异
丙醇）-2,3-二羟基苯并呋喃-)-2-甲酸甲酯-3-（4-羟基苯酚）-4-羟基-5-羰基-2,5-二氢呋
喃的物理性状及核磁氢谱和碳谱以及高分辨质谱的物化参数是：白色胶状；
核磁氢谱（1HNMR）（CDCl3）:δH3.36(2H,s,H-6),3.63(3H,s,CH3O-5),6.62
(1H,brs,H-2’),6.46(1H,d,8.1Hz,H-5’),6.57(1H,brd,8.3Hz,H-6’),2.98
(1H,dd,J=15.9,8.2Hz,H-7’a),2.88(1H,dd,16.2,9.4Hz,H-7’b),4.43(1H,
t,8.9Hz,H-8’),1.23(3H,s,H-10’),1.06(3H,s,H-11’),7.74(2H,d,8.4Hz,
H-2’’/H-5’’).
核磁碳谱（13CNMR）(CDCl3):δC171.8(C-1),138.2(C-2),128.1(C-3),84.6(C-4),
171.8(C-5),38.7(C-6),52.8(CH3O-5),125.8(C-1’),129.7(C-2’),126.9(C-3’),
158.5(C-4’),107.7(C-5’),126.6(C-6’),29.9(C-7’),89.0(C-8’),70.0(C-9’),
26.0(CH3,C-10),25.0(CH3,C-11’),121.2(C-1’’),129.6(C-2’’/C-6’’),115.2
【专利技术属性】
技术研发人员：夏雪奎，张立新，刘昌衡，齐君，贾爱荣，刘新，张永刚，张绵松，史亚萍，袁文鹏，
申请(专利权)人：山东省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37
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